威海市免疫无高致病性禽流感和免疫无口蹄疫区动物疫病监测体系的建立与应用

张华杰 尹昭智 徐 栋

（①山东省威海市动物疫病预防控制中心 264205 ①山东省威海市动物卫生监督所）

威海市免疫无高致病性禽流感和免疫无口蹄疫区动物疫病监测体系的建立与应用

张华杰①尹昭智①徐 栋①

（①山东省威海市动物疫病预防控制中心 264205 ①山东省威海市动物卫生监督所）

威海市免疫无高致病性禽流感和免疫无口蹄疫区(简称无疫区)建设自2001年启动，至2016年6月12日建成并进入维持状态。2013年以来，威海市无疫区动物疫病监测体系建设不断完善，监测能力和监测队伍均达到无疫区管理技术规范关于规定动物疫病监测的要求，承担了高致病性禽流感和口蹄疫证明无疫、维持无疫、H7N9剔除计划、小反刍兽疫消灭计划、畜间布鲁氏菌病、种畜禽场主要动物疫病监督监测，规模场主要动物疫病净化，及时发布监测预警信息等任务，为全市无疫区建设和重大动物疫病防控提供了重要的技术支撑。

1 威海市无疫区动物疫病监测体系的建立

1.1 动物疫病监测机构建立 威海市动物疫病预防控制中心、威海市环翠区动物疫病预防控制中心、文登区畜牧兽医技术服务中心、荣成市动物疫病预防控制中心、乳山市畜牧兽医工作站分别建有通过农业部兽医实验室考核的二级生物安全兽医实验室，承担高致病性禽流感和口蹄疫证明无疫、维持无疫、H7N9剔除计划、小反刍兽疫消灭计划、牲畜布鲁氏菌病监测，规模场主要动物疫病净化，及时发布监测预警信息等任务，高区、经区、临港区三个国家级开发区属于非农业县，无兽医实验室，动物疫病监测工作由威海市动物疫病预防控制中心和开发区镇基层站共同承担。

1.2 兽医实验室检测能力建立 威海市辖区5个兽医实验室均具有口蹄疫、高致病性猪蓝耳病、猪瘟、猪伪狂犬、猪细小病毒、猪圆环病毒、猪链球菌病、禽流感、禽白血病、鸡白痢、新城疫、布鲁氏菌病、等重大疫病的病原学和血清学检测能力，每年都参加省局组织的实验室检测能力比对，涵盖了口蹄疫、禽流感、小反刍兽疫、猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征等重大动物疫病，包括ELISA、HI等血清学方法和PCR等病原学监测方法，所有兽医实验室检测结果全部准确。

1.3 三级动物疫病监测网络建立 全市以规模场、屠宰场、无害化处理场、集贸市场、村为流行单元，以高风险区域为监测重点，建立了市、区市、镇三级动物疫病监测网络。市、区市、镇根据分工分别承担高致病性禽流感和口蹄疫疫情监测、免疫效果监测和监测采样工作，对辖区动物疫情进行全面评估预警。全市在文登区侯家镇和乳山市下初镇辛庄村分别建立病死动物无害化处理场2处，由文登区畜牧兽医技术服务中心和乳山市畜牧兽医工作站负责监测。

1.4 动物疫病监测经费保障体系建立 2013年以来威海市所有兽医实验室、疫病监测、流行病学调查、检疫监督、动物隔离、疫情处置、无害化处理、应急物资储备等工作经费足额纳入财政预算，确保我市不发生高致病性禽流感和口蹄疫。三个国家级开发区由于没有兽医实验室，监测经费由市级财政和开发区财政共同负担。

2 威海市无疫区动物疫病监测体系的应用

2.1 根据每种动物疫病易感动物的不同，全市分病种建立了动物疫病的抽样框 根据每种动物疫病易感动物群的不同，涵盖威海市所有易感动物，以场和村为单元建立了每种疫病的抽样框，按照2013-2016年《山东省动物疫病监测与流行病学调查计划》高致病性禽流感和口蹄疫建立的抽样单元分别为3022和4032个，抽样单元每年更新一次，监测数量以胶东半岛无疫区监测威海市的配额为依据；H7N9、小反刍兽疫、新城疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病的布鲁氏菌病、结核病等人畜共患病监测数量，按照中国动物卫生与流行病学中心设计的Epi Sampling Calculator软件以估计流行率的抽样方法进行抽样监测。

2.2 进行威海市无疫区证明无疫、维持无疫的监测（1）监测技术路线：一是证明无疫区内部无疫：高致病性禽流感和口蹄疫免疫合格—高致病性禽流感和口蹄疫病原学监测阳性率低于某一证明无疫的阈值(比如1%)—没有感染抗体—临床病例被动监测没有高致病性禽流感和口蹄疫。二是证明没有外来病原入侵：野鸟和野生动物无疫—外引动物不携带病原。（2）进行高致病性禽流感和口蹄疫常规主动监测(无疫区净化监测)：口蹄疫感染抗体监测和流行病学调查实验室检测方法：猪、牛、羊感染情况检测首先采用口蹄疫非结构蛋白(NSP)抗体ELISA方法进行；对NSP抗体检测结果为阳性的，牛羊采集O-P液用RT-PCR或荧光RT-PCR方法检测，如检测结果为阴性，应间隔15天再采样检测一次，RT-PCR检测阳性的判定为阳性畜。2015年以前，猪颌下淋巴结RT-PCR检测阳性的判定为阳性猪。2015年起生猪NSP抗体检测结果为阳性的，间隔2～4周后重复采样检测NSP抗体，根据抗体阳性率变化判断是否感染口蹄疫病毒，如果NSP抗体水平升高或NSP抗体阳性率在统计学上高于初次检测阳性率，为口蹄疫病毒传播 ；NSP抗体水平下降或NSP抗体阳性率在统计学上低于初次检测阳性率，为口蹄疫病毒未传播。2013年以来，威海市根据《胶东半岛免疫无高致病性禽流感区和免疫无口蹄疫区监测净化抽检表》中确定的配额，严格制定《威海市无规定疫病区口蹄疫和高致病性禽流感监测净化方案》并组织实施。在高密度免疫的基础上，对高致病性禽流感和口蹄疫防控效果进行监测、评估和分析。通过血清学和病原学等检测手段，在畜禽饲养场、养殖小区、农村散养户、市场和屠宰场等对高致病性禽流感和口蹄疫进行免疫抗体、病原学监测，并建立监测档案。全市完成了64个种禽场、112个商品代场、88个散养户共计264个场点次的29240份高致病性禽流感免疫血清样品监测，检测H5免疫抗体合格数为29144份，合格率为99.40%。其中RE-6亚型合格率99.74%、RE-7亚型合格率99.40%、RE-8亚型合格率98.52%。完成了88个种禽场次、160个商品代场次、56个散养户共计304个场点次禽流感通用型RT-PCR检测棉拭子及其他样本21096份，结果均为阴性。完成了16个种畜场次、160个商品代养殖场次、104个散养户、8个屠宰场点次共计288个场点次口蹄疫抗体监测，监测样品量总数12424份，合格11640份，合格率93.69%。完成16个种畜场次、168个商品代养殖场次、120个散养户、16个屠宰场点次共计320个场点次口蹄疫感染抗体监测，监测猪、牛、羊分别为3872份、1688份、2000份，样品量总数7560份，检测口蹄疫感染抗体阳性样品场8个，牛阳性样品24个，猪阳性样品18个。经过对阳性场限制流通并开展调查、病原学抽样荧光RT-PCR监测等措施处置全部排除口蹄疫野毒感染可能；完成720份猪组织样品口蹄疫RTPCR检测，结果全为阴性。监测结果显示，四年来年全市高致病性禽流感和口蹄疫的免疫合格率均达到90%以上，免疫合格率较高，免疫效果良好，畜禽得到良好的保护；高致病性禽流感和口蹄疫病原学检测结果均为阴性，没有发现高致病性禽流感和口蹄疫病毒感染。（3）进行高致病性禽流感和口蹄疫被动监测：2013～2016年威海市无疫区接到疑似禽流感疫情举报3起，结合临床症状、流行病学调查以及发病状况，采集病原学样品4份，进行禽流感病原检测，检测结果全部为阴性，排除了禽流感感染。没有接到疑似口蹄疫疫情举报。（4）对野生动物进行高致病性禽流感监测和流行病学调查：威海市无疫区野生动物主要为大天鹅等鸟类，对于野鸟的监测主要是针对野鸟集中出没的地区及其周边的家禽进行高致病性禽流感流行病学调查，在野鸟栖息地调查有无野鸟非正常死亡，对于死亡的野鸟进行实验室监测，并采集新鲜的野鸟粪便进行监测。2013～2016年共采集36个(次)野鸟栖息地的新鲜野鸟粪便680份，进行禽流感病原检测，检测结果均为阴性；对其中的480份样品进行H5亚型禽流感病原检测，检测结果全部为阴性。（5）对外引动物进行高致病性禽流感和口蹄疫检测：威海市无规定疫病区引入的动物主要为种禽，种猪、奶牛、羊等引入产地主要有北京、吉林、安徽、河北四川等省份。引入的动物采用RT-PCR方法(或荧光RT-PCR方法)检测禽流感病原。采用口蹄疫非结构蛋白(NSP)抗体ELISA方法检测口蹄疫感染抗体，检测结果若为阳性进行隔离，隔离期间采集病原学样品采用RT-PCR(荧光RT-PCR)方法进行病原检测。2013～2016年无疫区从非无疫区引入种鸡、种鸭共24批679000只，采集样品500份，进行了禽流感病原检测，检测结果均为阴性。引入种猪、奶牛6批2149头，采集样品186份，采用口蹄疫非结构蛋白(NSP)抗体ELISA方法进行检测，检测结果均为阴性。

2.3 承担了威海市H7N9剔除计划、小反刍兽疫消灭计划、畜间布鲁氏菌病监测和流行病学调查等任务 （1）持续实施威海市H7N9剔除计划。 技术路线和防控措施：限制家禽由高风险区向低风险区调运。围绕活禽交易市场、养禽场和野生禽鸟栖息地等重点区域，开展基于风险的监测和流行病学调查，发现并清除家禽 H7N9 流感病毒。血清学监测：威海市所有种禽场(父母代种禽场)全部进行血清学监测。商品代家禽养殖场、活禽批发市场、农贸市场(活禽交易摊位/档口)按照证明无疫方式随机抽样，采用血凝抑制试验(HI)。病原学监测：活禽批发市场、农贸市场按证明无疫方式随机抽样，血清学监测阳性的，采集同群活禽的咽喉/泄殖腔棉拭子样品进行病原学监测。荣成天鹅湖为1个风险监测点，每年候鸟迁徙至此地后抽检野鸟粪和野鸟栖息地周边养殖场随机抽样。采用农业部推荐的或者国家禽流感参考实验室的 RT-PCR或者荧光RT-PCR检测方法。2014～2016年，威海市没有接到H7N9流感疫情举报，共紧急监测H7N9流感3次，市动物疫病预防控制中心兽医实验共抽检父母代种禽场75个、禽场(户)132个，血清学检测禽血清样品5130份，病原学检测家禽咽喉棉拭子1110份、荣成天鹅湖大天鹅粪便120份、大天鹅咽喉棉拭子15份，H7亚型流感抗体和病原学检测结果均为阴性结果均为阴性；四区市动物疫病预防控制中心兽医实验室共监测活禽交易摊位和商品养禽场54个，血清学检测血清学样品3600份，病原学检测家禽咽喉棉拭子样品1540份，H7亚型流感抗体和病原学检测结果均为阴性主动监测没有发现家禽H7N9流感。（2）全面推进小反刍兽疫消灭计划，切实做好小反刍兽疫监测与流行病学调查工作。技术路线：威海市实施小反刍兽疫强制免疫，羊群以病原学监测为主，对病原学阳性羊及同群羊进行扑杀和无害化处理，并做好追溯排查等防控工作。免疫效果评估抗体检测采用竞争ELISA、阻断ELISA方法。病原检测学检测采集拭子或者组织样品，采用RT-PCR或者荧光RT-PCR方法进行检测。2014～2016年，威海市没有接到小反刍兽疫疫情举报，已完成小反刍兽疫紧急流行病学调查2次，专项流行病学调查3次，完成了小反刍兽疫总体状况评估。共抽检羊场112个，血清学样品3110个，小反刍兽疫免疫抗体水平合格率常年保持在97%以上，病原学检测结果均为阴性。（3）畜间布鲁氏菌病监测和流行病学调查：牲畜布鲁氏菌病防控技术路线：加强饲养管理，提高抗病能力—检测净化，淘汰阳性畜—强化检疫监督—强化监测预警—严格无害化处理，防止疫病传播扩散。威海市无疫区内禁止牲畜布鲁氏菌病免疫，动物疫病监测机构严格按照《山东省牲畜布鲁氏菌病防控技术指南》和《布鲁氏菌病防治规范》要求，对所有奶牛、奶山羊、种牛羊每年进行两次布鲁氏菌病检测净化，对所有出栏牛羊和引入牛羊实施布鲁氏菌病检疫检测，根据人间畜间布病流行病学调查结果对可疑动物单元进行监测，追溯和追踪患病动物并无害化处理，消灭传染源。2014年以来检测出布病阳性牛12头、阳性羊456只，并进行了扑杀和无害化处理。目前本市牲畜布鲁氏菌病处于控制状态。

2.4 对全市强制免疫重大动物疫病免疫效果进行评价监测 每年在春秋两季重大动物疫病集中免疫过后一个月，全市分别采集规模场、散养户的畜禽样品进行口蹄疫、高致病性禽流感、小反刍兽疫、猪瘟、新城疫等重大动物疫病免疫抗体水平检测。特别对自购强免疫苗养殖场的疫苗免疫效果进行全面检测，对免疫抗体合格率没有达到农业部规定70%标准的场户，进行补免和再检测。自2014年以来，全市对120多个抗体水平不合格场点进行了补免和再检测。

2.5 对威海市所有种畜禽场主要动物疫病进行监督监测2014～2016年持续3年开展全市种畜禽场主要动物疫病监督监测工作，5个兽医实验室对辖区内35个种畜禽场每年至少完成一次主要疫病和垂直传播疫病监测，检测范病种及范围包括强制免疫病种免疫抗体检测，种猪场(猪人工授精站)猪瘟、高致病性猪蓝耳病、口蹄疫、猪伪狂犬病原学检测，种牛场口蹄疫感染抗体、布鲁氏菌病血清学、牛结核病病原学检测，种羊场口蹄疫病原感染抗体、布鲁氏菌病血清学检测，种禽场禽流感(H5、H7、H9亚型)、新城疫、禽白血病病原学和鸡白痢血清学检测。从源头上保证了无疫区内种质资源的生物安全。

2.6 开展规模化养殖场主要动物疫病净化示范场、创建场 规模场主要动物疫病净化技术路线：针对不同疫病本底调查情况，一场一册制定相应净化方案。采取严格的生物安全措施、免疫预防措施、病原学检测、免疫抗体监测、野毒感染与疫苗免疫鉴别诊断监测，淘汰带毒动物，分群饲养，建立健康动物群。对假定阴性群加强综合防控措施，逐步扩大净化效果，最终建立净化场。同时加强人流、物流管控和实行全进全出生产模式，降低疫病水平与传播风险；强化本场留种和引种的检测，避免外来病原传入风险；建立完善的防疫和生产管理等制度，优化生产结构和建筑设计布局，构建持续有效的生物安全防护体系。2014年起威海市动物疫病检测机构组织启动了规模化养殖场“动物疫病净化创建场”和“动物疫病净化示范场”创建活动，分别在全市22个大型规模鸡、猪、牛、羊场分别开展禽白血病、鸡白痢、猪伪狂犬病、布鲁氏菌病净化示范，2016年益生畜禽股份有限公司祖代蛋鸡六场达到禽白血病净化标准，获中国动物疫病预防控制中心认证禽白血病净化示范场。

2.7 定期发布动物疫情预警信息 威海市动物疫病预防控制中心联合各区市动物疫病监测机构成立了动物疫情风险评估小组，每季度开展一次动物疫情风险评估，统计分析蛋鸡、肉鸡、猪、羊、水貂主要疫病，及时把握疫情动态并发布预警信息。自2014年以来，全市通过监测和流行病学调查等措施排除重大动物疫情17起，最大限度的降低了养殖场的损失。

S851.33

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1007-1733(2017)03-0045-03

2016-11-21）