一起仔猪猪瘟的诊制体会

滕金玲

（山东省莒南县动物疫病预防控制中心 276600）

孙家伟

（山东省临沂市河东区刘店子畜牧兽医站）

谭善杰

（山东省临沂市畜牧站）

一起仔猪猪瘟的诊制体会

滕金玲

（山东省莒南县动物疫病预防控制中心 276600）

孙家伟

（山东省临沂市河东区刘店子畜牧兽医站）

谭善杰

（山东省临沂市畜牧站）

某猪场经产母猪存栏30头，所产仔猪在1～15日龄期间，临床健康，哺乳正常，皮红毛亮，生长发育良好，15日龄后陆续开始排黄色或深黄色稀便或糊状便，体温在39.5℃左右，任何药物治疗无效，同窝发病率、死亡率高达100%，维持3个月之久。曾在四家检测诊断机构做过猪瘟、伪狂犬、流行性腹泻等病原学检测，结果均为阴性。

1 诊断过程

1.1 第一次出诊

1.1.1 临床症状 母猪：被毛粗糙，皮肤泛黄，毛孔有铁锈色出血点，重者脊背皮肤开裂，表面有血样渗出物，有些母猪泪斑严重，肌肉注射后针眼血流不止，血凝不良。仔猪：排黄色稀便或糊状便，皮肤黄白色，哺乳次数减少直至停止，逐渐消瘦，最后衰竭死亡。

1.1.2 解剖症状 表现血液稀薄，凝固不良；小肠肠壁变薄，充气，肠内有黄色内容物，肾脏表面有零星出血点，其他内脏器官无异常。

1.1.3 诊断处置 疑似诊断为母猪患有附红细胞体。母猪用磺胺氯哒嗪钠+多西环素，补充VC、VAD3粉及有机铁制剂等混饲2周，重者配合血虫净(中牧集团)肌注，1支

/100～15kg体重，1次/d，连用2～3d，同时仔猪用抗生素保健，腹泻日龄稍有延迟。但25日龄左右，仔猪又开始腹泻。

1.2 第二次出诊

1.2.1 临床症状 母猪：精神状况、膘情良好，个别母猪皮肤苍白，表面出血点减少，洁净度提高。发病仔猪：初期排黄色稀便，皮肤苍白，后期皮肤发黄，四肢末梢发紫，皮下有出血点或斑，腹泻，排黄色或黄褐色稀便，骨瘦如柴，眼屎增多，体温39.5～40.8℃，扎堆怕冷，食欲废绝。

1.2.2 解剖症状 血凝不良，打开胸腔、腹腔，内脏浆膜出血严重，喉头有出血点，扁桃体出血，肾脏土黄色，表面有大量出血点，肠道出血，膀胱出血，淋巴结周边出血等，出现疑似猪瘟症状。

1.3 实验室诊断

采集发病仔猪血液12份，编号1-12，室温静置析出血清，然后经2000r/5min离心，制备待检血清。

1.3.1 猪瘟病毒抗体检测 美国(IDEXX)猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒：使用前，所有试剂和微量包被反应板在22℃室温下放置2h，并通过轻轻涡旋、旋转混匀。整个实验过程严格操作程序，且不同的样本和试剂使用不同的吸头。取出微量反应板，在原始记录表上标记好每个样本的位置。分别将50ul样品稀释液加入每个检测孔和对照孔中。分别将50ul阴性对照和阳性对照加入到相应的对照孔中。分别将50ul的被检样品加入到剩余的检测孔中。轻弹微量反应板，将反应板中的溶液混匀，然后将微量反应板用封条封闭，在室温(22℃)条件下孵育2h。用300ul洗涤液洗涤每个板孔3次。每次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在加入下一个试剂前，避免孔壁变干。在每孔中加入100ul的酶标抗体，用封条封闭反应板，在室温(22℃)条件下孵育30min。重复步骤5。每个反应孔中加入100ul的底物溶液，避光、室温(22℃)条件下放置10min。加完第一孔后计时。在每个反应孔中加入100ul的终止液终止反应。加终止液的顺序与底物的加入顺序相同。酶标仪空气调零，以450nm单波长测定样本和对照的吸光度值。结果：阴性对照平均OD450=1.585大于0.500，阳性对照阻断率=91.6大于50%，检测结果有效。计算被检样本阻断率=(阴性对照平均OD450-样本OD45)÷阴性对照平均OD450×100%。判断：被检样本的阻断率≤30%，该样本被判为阴性，无CSF抗体存在,被检样本的阻断率＞40%，该样本被判为阳性，有CSF抗体存在，如果被检样品阻断率在30%～40%之间，该样本判为可疑。抗体检测结果见表1、图1。

表1 猪瘟病毒抗体检测结果

图1 猪瘟病毒抗体检测结果

1.3.2 猪瘟病毒抗原检测 美国(IDEXX)猪瘟病毒抗原血清ELISA检测试剂盒：使用前，所有试剂和微量包被反应板在22℃室温下放置2h，并通过轻轻涡旋、旋转混匀。整个实验过程严格操作程序，且不同的样本和试剂使用不同的吸头。（1）操作过程基本同病毒抗体检测步骤。（2）结果：阳性对照OD的平均值与阴性对照OD的平均值之差=1.018，大于0.150，阴性对照OD的平均值=0.085，小于0.250，试验结果成立。计算S-N值：即样品S(OD450)与阴性对照N(OD450)的平均值之差。判断：被检样本S-N值≤0.100的，该样本判为阴性；被检样本S-N值＞0.300，该样本判为阳性；被检样本S-N值＞0.100，≤0.300，判为可疑。判定结果见表2、图2。

表2 猪瘟病毒抗原检测结果

图2 猪瘟病毒抗原检测结果

1.4 结果分析

12份血清样品，猪瘟病毒抗体水平参差不齐，最大92，最小-16，其中4份样品为阳性，1份可疑，7份阴性；猪瘟病毒抗原3份阴性，1份可疑，8份阳性；且病毒抗体阳性的，其病毒抗原为阴性或可疑，病毒抗体阴性的，其病毒抗原阳性，符合率几乎达到100%。根据临床症状、解剖变化及实验室诊断，确诊该猪群感染猪瘟病毒。

2 防控措施

（1）加强监测，淘汰猪瘟隐形带毒猪、病猪，病死猪进行无害化处理，彻底消灭传染源。（2）加强场地及圈舍消毒，并适当增加消毒次数，粪尿等排泄物和污染物进行发酵、消毒、深埋、焚烧等无害化处理，人员定岗定位，器具专舍专用，减少外来人员及车辆流动，切断传播途径。（3）饲料配比得当，营养全面；圈舍结构合理，干燥卫生，舍温适宜，通风良好；减少应激，环境舒适安静，提高机体抵抗力。（4）根据检测结果及猪场发病情况，调整猪瘟免疫程序，保证猪体持有较高的抗体水平，抵御野毒感染。（5）加强母猪配种前猪瘟免疫，所产仔猪用猪瘟传代细胞苗1头份/猪，实施猪瘟超前免疫。（6）严格执行免疫程序，尤其注重免疫抑制性疾病的预防，合理驱虫，定期投药，防止继发或并发疾病。通过采取以上措施，猪场疫情得以控制。

3 体会

在畜牧业快速发展的今天，疾病的发展变化日新月异，望闻问切的诊断手段已经难以满足疾病的诊断需求。兽医实验室诊断虽然滞后于临床感官诊断，但却是确诊疾病的唯一手段。根据临床症状和尸体剖检变化做出疑似诊断，采用抗体检测和抗原检测相结合的实验室诊断方法，该病例得以确诊。究其在四家检测机构诊断无果，笔者认为样本采集的时间、部位及样本的保存、运输等因素影响了样本的质量，从而影响到检测结果，造成对该病例的误诊误判。当地动物疫病预防控制机构兽医实验室要充分发挥检测职能，建立完整的兽医诊断体系，对疾病达到快速、精准的判断，以更好地服务于畜牧业。

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1007-1733(2017)03-0023-02

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