视黄醇结合蛋白4在妊娠期糖尿病孕妇中表达与胰岛素抵抗关系

郭 永，付竹梅

（山东省潍坊市妇幼保健院，山东 潍坊 261011）

视黄醇结合蛋白4在妊娠期糖尿病孕妇中表达与胰岛素抵抗关系

郭 永，付竹梅

（山东省潍坊市妇幼保健院，山东 潍坊 261011）

目的妊娠期糖尿病产妇机体中视黄醇结合蛋白4（RBP4）的表达及其与胰岛素抵抗之间的关系分析。方法用酶联免疫吸附法检测妊娠期糖尿病孕妇32例（GDM组）、糖耐量正常孕妇30例（正常妊娠组）血液中的RBP4浓度，借助葡萄糖氧化酶法、放射免疫法对两组产妇空腹状态下的胰岛素（FINS）浓度、血糖（FPG）浓度等进行测量，然后对胰岛素的抵抗指数（HOMA-IR）进行计算。采用荧光定量PCR技术、蛋白免疫印迹法对两组产妇胎盘RBP4 mRNA、蛋白表达等进行检测，并且分析GDM组胎盘组织RBP4 mRNA及蛋白表达与产妇血清RBP4、HOMA-IR之间的关联。结果（1）对照组产妇血清RBP4以及FINS、FPG等水平、HOMA-IR均低于GDM组，有统计学差异，P＜0.05；（3）对照组产妇胎盘组织RBP4 mRNA、蛋白表达显著低于GDM组，有统计学差异，P＜0.05；（3）GDM组胎盘组织RBP4 mRNA、蛋白表达与HOMA-IR均具备相关性，同时血清RBP4和HOMA-IR也具备显著的相关性，P＜0.05；但是胎盘组织RBP4 mRNA、蛋白表达与产妇血清RBP4水平未表现出相关性，P＞0.05。结论GDM产妇胎盘组织内的RBP4 mRNA出现高表达，且血清RBP4异常升高，提示产妇可能发生了胰岛素抵抗机制，临床应给予高度重视。

妊娠期糖尿病；视黄醇结合蛋白4；胎盘；胰岛素抵抗

妊娠期糖尿病（GDM）是指妊娠期间首次发生或发现糖代谢异常[1]，是妊娠期常见的并发症之一，严重危害母儿健康。GDM的发病机制比较复杂，尚未完全阐明，其中胰岛素抵抗、胰岛β细胞功能异常是GDM重要的发病机制。RPB4属于最新发现的一种细胞因子，主要由机体中的脂肪细胞所分泌，与胰岛素抵抗密切相关[2]，但其与GDM的关系报道较少。本研究对GDM孕妇血清及胎盘中RPB4的表达进行检测，以探讨其在不同组织中与胰岛素抵抗的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年12月至2016年4月在潍坊市妇幼保健院产科门诊进行前检，并选择期剖宫产手术的32例GDM孕妇，视为GDM组，平均年龄是（28.0±1.9）岁，平均孕周（38.3±1.2）周，平均体重指数（27.3±1.2）kg/m2；随机抽取同期血糖正常，且行剖宫产手术的30例产妇作为对照组，平均孕周（37.8±0.9）周，平均年龄（26.5±1.5）岁，平均体重指数（27.3±1.3）kg/m2。在年龄、体重指数、孕周等资料上，两组孕妇比较基本一致（P＞0.05），具有可比性。两组产妇均为单胎，且未合并其他疾病及并发症，无糖尿病家族史，剖宫产手术指征为臀位、巨大儿或瘢痕子宫[3]。此次研究通过我院伦理委员会的批准，且所有对象均已经知情，签订了同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 本次研究所有的标均采集时间为剖宫产术前24 h内，分别在两组产妇空腹状态下抽取4 mL肘静脉血，对血清进行分离，-80℃保存待测。分娩后30 min内取约1 cm× 1 cm×1 cm的胎盘母体面中央组织，反复漂洗后分装于无菌离心管中，-80℃保存待用。

1.2.2 实时荧光定量PCR技术检测两组孕妇胎盘组织中RBP4 mRNA的表达：首先，提取胎盘组织样本的总RNA，然后再将其逆转录为cDNA后，以此作为一个新的模板；按照cDNA的序列来对荧光定量PCR引物进行设计，并对RBP4基因表达情况进行测定；RBP4上游引物为5′-TACTCCTTCGTGTTTTCCCGG-3′，下游引物5′-TAACCGTTGTGGACGATCAGC-3′；β-actin上游引物为5′-CTTTTCCAGCCTTCCTTCTTGG-3′，下游引物为5′-CAGCACTGTGTTGGCATAGAGG-3′。以上引物均由上海生工生物丁程有限公司合成。按照荧光定量试剂盒标准操作方法操作。

1.2.3 蛋白印迹法检测RBP4蛋白表达蛋白样本按蛋白裂解液说明书抽提、浓缩后取得，对其进行电泳后，将蛋白样本转到硝酸纤维素膜上（4℃，275 mA，120 min），采取4℃的封闭液进行封闭，然后在加入比例为1：100的抗4℃孵育进行过夜，第二天将一抗弃去后进行洗涤；然后再次加入比例为1:2000二抗（羊抗兔抗体为北京博奥森生物技术有限公司产品）孵育2小时后洗涤。增强化学发光法（ECL显影），X线曝光30秒，显影后清水漂洗、定影，洗片后用激光扫描仪进行定量分析。以葡萄糖磷酸脱氢酶（GAPDH）为内参照物，RBP4蛋白与GAPDH的条带灰度值的比值表示RBP4蛋白表达水平。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件对数据进行分析处理，计量资料以“±s”表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 对比两组产妇血清指标水平情况

妊娠期糖尿病组32例产妇血清中的RBP4水平、FPG水平以及FINS水平分别是（27.4±1.5、5.5±0.8、12.2±1.3）及HOMA-IR（2.6±0.4）均显著高于对照组（18.7±2.1、3.8±0.5、7.9±0.6、1.7±0.3，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 比较两组孕妇胎盘组织中RBP4 mRNA以及RBP4的蛋白表达情况

妊娠期糖尿病组32例产妇胎盘组织RBP4mRNA的表达水平是（0.79±0.16），对照组为（0.48±0.05）；对照组孕妇胎盘组织中RBP4蛋白水平为（0.50±0.07），GDM组为（0.78±0.11），GDM组相比于对照组显著要高（P＜0.05）。

2.3 GDM组产妇不同组织RBP4表达水平及其与HOMAIR的关系分析

GDM组30例产妇胎盘组织中RBP4蛋白水平及RBP4 mRNA表达水平与HOMA-IR均呈正相关（r=0.541、0.832，P＜0.05），而其与血清RBP4水平无相关性（r=0.045 P＞0.05）；血清RBP4水平与HOMA-IR呈正相关（r=0.793，P＜0.05）。

3 讨 论

3.1 GDM孕妇血清RBP4水平变化及意义

RBP4基因位于染色体10q23～q24区域，含有6个外显子和5个内含子，其是视黄醇结合蛋白家族成员，是一种单一肽链的蛋白质，主要由肝脏合成和分泌，其次是脂肪组织，其主要负责结合、转运全反式视黄醇及其衍生物[4]。但RBP4参与胰岛素抵抗的机制尚不明确，有研究表明，RBP能够对胰岛素所刺激的IRS1307号丝氨酸磷酸化进行抑制，可能通过干预IRS1-Ras-MAPK信号转导通路，从而对酪氨酸磷的酸化发挥抑制作用，促进磷酸烯醇式丙酮酸激酶的基因表达而增加肝糖的输出量，降低肌肉糖摄取量，进而影响胰岛细胞的分泌等多种途径引发胰岛素抵抗[5]。

GDM组30例产妇血清RBP4浓度依旧存有争议，在此次研究中，GDM组血清RBP4明显比对照组的高，并且和HOMA-IR呈现出显著的相关性关系，提示RBP4可能参与可GDM患者胰岛素抵抗的发生。

3.2 GDM孕妇胎盘组织中RBP4的表达及临床意义

血清中RBP4主要由肝脏合成和分泌，其次是脂肪组织[6]。有研究表明[7]GDM患者血清中RBP4的表达水平与皮下脂肪中RBP4-mRNA的表达水平有明显相关性。关于GDM孕妇胎盘组织中RBP4表达变化的报道极少，本研究结果表明，与正常孕妇相比较，GDM组的RBP4 mRNA、蛋白表达水平等明显高得多，且和HOMA-IR表现出相关性，由此可以看出，胎盘RBP4在GDM孕妇胰岛素抵抗形成过程中可能发挥着重要作用。但其与血清RBP4水平变化无明显相关性，考虑原因为胎盘组织并非视黄醇结合蛋白4唯一来源有关。而目前临床尚不清楚GDM孕妇胎盘组织中视黄醇结合蛋白4表达升高的机制，仍需进一步深入探讨。

总之，GDM孕妇胎盘组织及血清中RBP4表达水平均较高，提示其可能参与妊娠期糖尿病胰岛素抵抗的形成，但其具体的发病机制仍需深入研究。

[1] American Diabetes Association.Standards of medical care in diabetes-2011[J].Diabetes Care,2011,34(01):s11-s61.

[2] Yan H,Chang X,Xia M.Serum retinol binding protein 4 is negatively related to beta cell function in Chinese women with non-alcoholic fatty liver disease: a cross-sectional study[J].Lipids Health Dis,2013,27(12):157.

[3] American Diabetes Association.Standards of medical care in diabetes-2011[J].Diabetes Care,2011,34(01):s11-s61.

[4] 董金华,薛丽丽.视黄醇结合蛋白4在妊娠期糖尿病患者血清、脐血及胎盘组织中的表达及意义[J].中国医药导报,2016.13(35):80-83.

[5] 孙玉秀,鲁云霞,王朝红,等.视黄醇结合蛋白4与胰岛素抵抗及2型糖尿病关系研究进展[J].山东医药,2014,54(12):87-89.

[6] 高秀秀,甘旭培,徐先明.妊娠期糖尿病孕妇胎盘中视黄醇结合蛋白4表达与胰岛素抵抗和胰岛素分泌功能的相关性.现代妇产科进展[J].2016,25(10):750-753.

[7] Kuzmicki M,Telejko B,Wawrusiewicz-Kurylonek N,et al. Retionalbinding 4 in adipose and placental tissue of women with gestational diabetes[J].Gynecol Endocrinol,2011,27(12):1065-1069.

本文编辑：刘帅帅

R714.256

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ISSN.2095-8803.2017.07.60.02

郭永，男，山东省临朐县人，主任医师，大学本科，研究方向：妇产科高危疾病的诊疗