犬晶状体超声乳化术对术眼及其角膜内皮组织学的影响

廖天利，张叶枫

（1.重庆市黔江区畜牧兽医局，重庆 黔江 409000；2.西南大学荣昌校区动物医学系，重庆 荣昌 402460）

犬晶状体超声乳化术对术眼及其角膜内皮组织学的影响

廖天利1，张叶枫2

（1.重庆市黔江区畜牧兽医局，重庆 黔江 409000；2.西南大学荣昌校区动物医学系，重庆 荣昌 402460）

本试验通过对健康的试验犬实施晶状体超声乳化术，然后制作术眼角膜切片，观察该手术对犬眼角膜内皮组织学的影响。结果表明，超声乳化术后犬只恢复情况良好，术眼在一周内痊愈；术后7d角膜内皮层变形，呈波浪状，有些出现断裂、脱落，内皮细胞空泡化；术后14d角膜内皮细胞空泡化更明显，甚至角膜内皮层连同后弹力层一同丢失，基质层变形、脱出。

犬；超声乳化术；角膜内皮；病理切片

有研究表明[1]，犬发生白内障的几率大于人，对于犬白内障治疗的研究大体分为药物治疗和手术治疗。超声乳化术是目前最先进的手术治疗方式，但手术过程中对角膜内皮造成损伤是该手术最大的缺点。本试验通过实验造模，了解超声乳化术后术眼的恢复情况及角膜内皮的组织学变化，评估该手术对角膜内皮的影响。

1 材料与方法

1.1 药品与仪器

1.1.1 手术用 5%托吡卡胺滴眼液（美多丽）、速眠新（846合剂）、盐酸奥布卡因滴眼液、利多卡因、卡米可因、庆大霉素等。

1.1.2 染色用 10%中性福尔马林、二甲苯、1%苏木素、0.5%伊红、酒精、1%氨水、中性树胶。

1.1.3 主要仪器 双目手术显微镜、裂隙灯、尼龙5-0和10-0眼科无损伤缝线、眼科显微手术器械一套、低温切片机、光学显微镜、高温高压灭菌锅、冰箱。

1.2 试验方法

1.2.1 动物选择与分组 选择体重相当（4～5kg）、体质健康均匀、4～5月龄、眼无任何疾病史的本地犬24只，雌雄不限。在相同饲养条件下隔离喂养一周后，未发现问题的随机分为两组：第一组为试验组（12只犬），均对其左眼进行超声乳化术；第二组（12只犬）为空白对照组，不进行超声乳化术。

1.2.2 手术参数设定 根据目前手术仪器的条件，参照临床上犬超声乳化手术常用的参数设定，同时考虑到手术眼为健康眼，本试验采用冷超声乳化技术，设超乳能量为40%，乳化抽吸负压为170mmHg，抽吸速率为27cc/min，每次乳化时间在42.0～78.0s之间，平均时间为54.4s。

1.2.3 超声乳化术实施 手术当日禁食12h，手术前1h对犬的手术眼用5%托吡卡胺散瞳，术前30min用硫酸阿托品0.04mg/kg皮下注射，丙泊酚0.6mL/kg静脉注射诱导麻醉，然后气管插管，全程采用吸入麻醉。手术过程如下：

（1）显露术野：开睑器充分开睑。（2）角巩膜缘切口：在眼球12点方向，距角巩膜缘后方0.5～1.0mm处，用穿刺刀进入前房，宽度为3.0～3.2mm。（3）连续环形撕囊术：向前房内注入粘弹剂后，用撕囊镊形成一个翘起的囊瓣，以其游离部的顶端为着力点，沿时钟轨迹做逆时针牵引，依次撕开前囊膜。（4）晶状体的水分离：在撕囊边缘的前囊下，注入灌注液，使晶状体与周围皮质完全分离。（5）侧切口：沿虹膜平行方向，用直头穿刺刀做前房穿刺。（6）囊袋内双手超声乳化术：采用冷超乳技术，先将踏板踩至1档（灌注），当针头接触到晶状体核时，逐渐将踏板踩至2档（抽吸）和3档（乳化）进行超声乳化。（7）抽吸皮质：进入灌注/抽吸模式，将I/A针头移向囊袋中央牵引皮质，使其附着在后囊上的部位脱离赤道部。重复以上操作直至皮质完全清除。（8）彻底抽吸出囊袋和前房内的粘弹剂。（9）缝合切口，冲洗术眼，涂上红霉素眼膏。

1.2.4 术后护理 术后将犬只单独饲养于犬笼中，为防止它舔舐、抓咬术眼，要佩戴伊丽莎白圈。术后一周内每天涂红霉素眼膏，并自术后1～7d，每日进行裂隙灯检查，观察角膜水肿情况、瞳孔形状、前房深度、前房炎症情况、囊膜有无撕裂、后囊膜有无破裂等。每日多次检查术眼情况，及时清理眼分泌物。

对手术失败的试验犬予以淘汰，并及时进行补充试验。日粮中尽量避免添加刺激性较大的原材料，饲养房间禁止非试验人员进入，防止刺激导致试验犬过度吠叫引起眼压升高，缝线崩断。

1.2.5 病理切片制作

1.2.5.1 制片 （1）取材：分别于术后第 7、14 d（每个时间点2只犬），取犬术眼；对照组2只犬分别取左眼。（2）固定：10%福尔马林溶液浸泡24h，剪下完整角膜，切成宽度为1～2mm的小段。（3）冲洗：用蒸馏水彻底冲洗干净。（4）脱水：分别在50%、70%、80%、90%、95%的乙醇溶液中进行梯度脱水，每个浓度梯度的脱水时间为1h，然后在无水乙醇中脱水两次，每次0.5h。（5）透明与透蜡：先用二甲苯和酒精（1∶1）的混合液在室温下处理0.5h，再用二甲苯浸透3次，每次为5min；然后在62～65℃恒温箱中透蜡，先是用甲苯和蜡（1∶1）的混合液处理0.5h，再以纯蜡处理3次，每次0.5h。（6）包埋：将包埋组织块置入熔化的蜡液中，待包埋组织的蜡凝结成块后将蜡块修成梯形，再将其固着于木质蜡头上。（7）切片：用4%的蛋白甘油溶液浸润载玻片，再将载玻片在干燥箱中烘干备用；蜡块切片厚度为8～10μm，将蜡带放在预先处理的载玻片上，再将其平放入65℃烘箱中熔化、展片，10min后组织就能自然展开并贴在载玻片上。（8）粘片：被片上涂一层粘贴剂，加一滴水，切取蜡带，烫手后烘干。

1.2.5.2 染色 （1）脱蜡：将切片以20°倾斜放入染缸中脱蜡，程序为二甲苯I 5 min、二甲苯II 5 min，无水乙醇2 min、95%乙醇 1 min、90%乙醇 1 min、80%乙醇1min、75%乙醇 1min，蒸馏水冲洗 1min。（2）染色与脱水：苏木素染色5～10min后用蒸馏水冲洗2次，每次0.5min；染色后脱水：70%乙醇2min、80%乙醇2 min、90%乙醇2min，脱水后再用伊红染色2min，之后继续脱水：95%乙醇2min、无水乙醇2min，二甲苯I 2min、二甲苯II 2min，最后用中性树脂封闭。

2 试验结果

2.1 超声乳化术后术眼恢复情况 术后1～7d，每天用裂隙灯检测术眼的恢复情况。正常犬的眼角膜透明纯净，眼底清澈，无混浊现象。术后第1～2d，几乎所有术眼的角膜均陆续出现灰色或灰白色的混浊和水肿，表面有血管生长，切口处轻微睫状充血；术后第3d，角膜水肿逐渐消退，随着伤口愈合，血管痕迹淡化，睫状充血减轻，混浊状况有所改善；术后第5d，角膜混浊消退，切口愈合良好，血管痕迹残留，充血减轻；术后第7d，术眼愈后良好，已无明显手术反应。

2.2 犬角膜内皮的组织学观察 正常情况下犬眼角膜内皮层平滑完整，细胞排列整齐紧密。术后7d，观察到角膜内皮层变形，呈波浪状，表面变得粗糙不平，内皮细胞空泡化，有些角膜内皮层与后弹力层出现断裂，角膜内皮层脱落。术后14d，角膜内皮细胞空泡化更加明显，甚至角膜内皮层丢失，或角膜内皮层连同后弹力层一同丢失，基质层变形、脱出。

3 分析与讨论

3.1 术眼超声乳化术模型的建立及术眼的恢复情况 超声乳化术是近年来治疗白内障的有效手术方法之一，应用超声波将晶状体核粉碎，使其呈乳糜状，然后连同皮质一起吸出，同时也可植入人工晶状体[1-2]。自1967年由Kelman等发明以来，该手术以组织损伤小、切口愈合快、术后散光小及视力恢复快等优点成为当前白内障手术的主流方式[3]。

有研究认为，超声乳化术中使用的能量大小、超乳时间的长短直接影响术后角膜内皮细胞的恢复情况，能量越高、时间越长，对角膜内皮的影响就越严重。近年来“冷超声乳化”技术的问世，大大降低了术中超声能量及浪涌现象，从而减轻对角膜内皮细胞的损伤[4]。低能量脉冲式超声乳化降低了超声乳化针头产生的热量，术中超声乳化针头产生的温度仅在20～34℃之间，在机体正常温度（37℃）以下，所以不会对切口及角膜组织产生灼伤热量，相对于普通超声乳化仪更安全。有研究表明，3.5mm角巩膜缘切口对角膜内皮的损伤要小于5mm切口。本次手术采用角巩膜缘切口，切口宽度为3.0～3.2mm，如果切口过小，则超声乳化针头无法进入前房，或灌注液不能顺利流出而导致角膜灼伤。

3.2 犬角膜内皮的组织学变化 角膜内皮层是角膜与前房水相接触的分界线，镜下呈直线形，由单层扁平的六边形细胞构成，大小均等、紧密镶嵌、排列整齐[5-6]。术后暂时的角膜水肿，表明角膜内皮细胞泵功能受损，是超声或机械损伤的结果。内皮细胞遭到破坏后，伤口缘的后弹力层收缩并向基质层卷曲，在数小时内，伤口周围的内皮细胞向伤口区迁移，通过细胞面积增大和重组，重建完整的内皮单层结构[7]。

超声乳化术的切口、灌注液的冲刷、超声能量的释放、劈核的方式、机械因素（如超声乳化术中乳化针头和器械不断进出前房）以及手术过程中产生的核碎屑和气泡等，不可避免地会对角膜内皮产生损伤。但是角膜内皮层的变化并不是均一的，损伤程度也并不相同，如硬核会造成超声乳化能量较高，乳化时间长，角膜内皮质、细胞间容易存在空泡，角膜内皮细胞容易发生水肿[8-9]。

本试验观察到术后7d角膜内皮层变形，呈波浪状，表面变得粗糙，内皮细胞空泡化，有些出现断裂、脱落，这是角膜内皮受到损伤、功能失调所致；术后14d时，角膜内皮的损伤加重，角膜内皮丢失，基质层甚至变形、脱落，可能是因为角膜内皮受损失代偿造成的。

4 结论

本试验采用角巩膜缘切口，切口宽度为3.0～3.2mm，设置超乳能量为40%，乳化抽吸负压为170mmHg，抽吸速率为27cc/min，每次乳化时间在42.0～78.0s之间，平均时间为54.4s。在此参数条件下对健康试验犬施行冷超乳技术，在囊袋内进行超声乳化。术后犬只精神和饮食状况与术前无明显差异，术眼在一周内痊愈，恢复情况良好。超声乳化术使角膜内皮结构发生改变，可能与角膜内皮失代偿发生有关。

（致谢：本文在西南大学郑小波副教授悉心指导下完成，在此致以衷心的感谢！）

[1]谢立信，姚瞻，黄任森，等.超声乳化白内障吸除术后角膜内皮细胞损伤和修复的研究[J].中华眼科杂志，2004，40（2）：90-93.

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[3]柴新红，王从毅，吴利安.低角膜内皮细胞数的白内障行超声乳化术 29 例[J].国际眼科杂志，2005，5（3）：560-561.

[4]孙建初，王丽娅，李卫，等.正确看待“冷超乳”[J].眼外伤职业眼病杂志，2009，31（5）：337-339.

[5]马烈，刘芳，顾丽萍，等.白内障超声乳化术中角膜内皮细胞损害的相关因素分析[J].国际眼科杂志，2012，12（1）：90-92.

[6]黄建宇，杨静，包著妍.白内障超声乳化术中两种模式和两种切口对角膜内皮细胞的影响[J].福建医药杂志，2013，35（4）：118-120.

[7]李万明，郭东华.白内障超声乳化术65例并发症临床分析[J].中国现代医药杂志，2006，8（10）：115-116.

[8]王红.白内障超声乳化人工晶体植入术后角膜水肿的原因分析及其预防[J].中国老年学杂志，2011，31（13）：2442-2443.

[9]王九三，周琼芝，王勇懿，等.白内障超声乳化人工晶体植入术 106 例临床报告[J].云南医药，2003，24（5）：400-401.

Effect of Phacoemulsification on Dog's Eyes and Corneal Endothelium

Liao Tianli1，Zhang Yefeng2
（1.Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Qianjiang District，Chongqing Qianjiang 409000；2.Department of Veterinary Medicine，Rongchang Campus of Southwest University，Chongqing Rongchang 402460，China）

In order to evaluate the effect of phacoemulsification on dog′s corneal endothelium，this experiment operated phacoemulsification on healthy dogs，as well as made pathological sections of canine corneals.The results showed that dogs recovered well after phacoemulsification and the eyes also healed in one week，after 7 days，some corneal endotheliums became wavy shape，breakage or detached，and some corneal endothelial cells became vacuolization，post-operation 14 days，the vacuolization of corneal endothelial cells became more serious，even corneal endothelium with elastic layer lost together，and the stromal layer was out of shape and prolapsed.

Dog；Phacoemulsification；Corneal endothelium；Pathological section

S858.292.12

B

1001-8964（2017）10-0024-03

2017-06-20

廖天利（1975-），男，重庆荣昌人，硕士研究生，兽医师，现从事动物疫病临床与预防控制工作。