皮炎湿疹疾病进展与皮损微生物感染种类、数量及炎性因子的关联研究

邓俊峰 楼芳 焦继光

·论著·

皮炎湿疹疾病进展与皮损微生物感染种类、数量及炎性因子的关联研究

邓俊峰 楼芳 焦继光

目的 探讨皮炎湿疹疾病进展与其皮损微生物感染种类、数量及炎性因子的关联。方法 于患者皮炎湿疹皮损部位皮肤、非皮损部位皮肤同时取材做微生物培养，对培养结果进行常规菌种鉴定和菌落计数，比较皮炎湿疹疾病进展组与无进展组患者的炎性因子检测结果。结果 125例皮炎湿疹患者的皮损处微生物培养阳性者共占66.40%，其中金黄色葡萄球菌检出率达到33.60%，较该组患者在非皮损部位细菌及真菌检出率明显升高(P<0.05)；皮损进展继发感染的患者皮损部位金葡菌检出率76.67%显著高于临床皮损无进展患者及对照组(P<0.05)；皮损进展继发感染患者血清中多种炎性介质的含量明显高于皮损无进展患者的指标(P<0.05)。结论 皮炎湿疹疾病进展与其皮损部位金黄色葡萄球菌感染、金葡菌平均密度密切相关，相关炎性因子可能为皮炎湿疹早期诊治和预后评判提供参考。

皮炎湿疹；金黄色葡萄球菌；炎性因子

皮炎湿疹疾病是皮肤科临床常见病和多发病[1-3]。通常只要是临床表现为皮肤瘙痒、红斑、丘疹、水疱、表皮脱屑和肥厚等特征，并伴有局部渗出和融合趋势的皮疹，在暂时无法进一步确诊的患者均可先行拟诊为皮炎湿疹[4]。皮炎湿疹性疾病的发病原因十分复杂，发病机制目前尚未明确。多数观点认为该病系由多种因素综合作用而引起的以明显渗出为特征的皮肤炎性反应性皮肤病[5,6]。目前仍缺乏特效治疗手段，造成该病常慢性迁延，容易复发。研究发现，人体的免疫机能失衡是本病的发病基础，而皮肤上某些微生物定植是造成免疫功能紊乱的重要原因，应引起足够重视[7,8]。本研究选取125例皮炎湿疹患者为研究对象，探讨皮炎湿疹疾病进展与其皮损微生物感染种类、数量及炎性因子的关联，为临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年6月至2015年12月我院符合入组标准且自愿接受检测的皮炎湿疹门诊患者。(1)入选标准：①性别不限；②18岁以上成年患者；③临床确诊为各种类型的皮炎湿疹，病变处皮损有红斑、丘疹或水疱且有渗出倾向；④病变反复发作，病因未明；⑤4周内未接受过皮质类固醇激素治疗，未应用全身抗菌素和(或)抗真菌类药物治疗的患者；⑥近7d内未进行治疗的患者。湿疹皮炎的诊断标准参照中华医学会皮肤性病学分会免疫学组指定的《湿疹诊疗指南(2011 年)》[3]。(2)排除标准：①甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病毒及人类免疫缺陷病毒感染者；②自身免疫性疾病患者；③恶性肿瘤患者；④严重的心脑血管等疾病患者；⑤各种精神疾患者；⑥罹患其他皮肤疾病者。(3)失联原因及其应对措施：①预计原因：患者中途退出试验；患者在试验过程中转院治疗。②应对措施：按照1∶1比例相应补充受试患者进试验组。(4)伦理学考量：①患者及其直系家属签署参与该临床研究的知情同意书；②对患者的医疗治疗和安全有充分保障；③对入选患者的信息及诊疗记录予以保密，保护患者的隐私权；④本研究经过我院伦理委员会批准进行。最终共选取符合入组标准的皮炎湿疹患者共125例，男75例，女50例；年龄18～75岁，平均年龄(58.72±10.24)岁；病程3周～12年。临床表现：(1)依据皮损范围：局限性湿疹60例，泛发性湿疹65例；(2)依据皮损特征：急性渗出性湿疹71例，慢性斑块性湿疹54例；(3)皮损有进展继发感染者30例，皮损无进展者95例；对照组：健康成年人50 例，皮肤正常。

1.2 方法 用无菌棉签自患者皮炎湿疹皮损部位皮肤、非皮损部位皮肤(选择与皮损对称部位或临近皮损6cm外正常皮肤)，对于对照组正常皮肤者统一采集左侧前臂屈侧皮肤标本。取标本过程中应注意避免触及皮损外皮肤。采集标本后将棉签置于装有3ml无菌稀释液中，反复振荡30s，取10μl稀释液接种血琼脂培养皿，置于35℃恒温培养箱内，在有氧环境下培养24～48h后观察培养皿内菌落发育情况。记录全部分离后得到的细菌种类及菌落数目。同时将其余稀释液经离心机离心后弃去上清液，将沉淀物接种在沙堡弱葡萄糖琼脂(SDA)及马拉色菌培养基上，置入37℃恒温培养箱中开始孵育，每3天观察1次菌落孵育结果，连续观察30d。对培养出的细菌及真菌做常规菌种鉴定。对分离培养出的细菌菌种及菌落数，根据下列公式计算单位皮损面积内的菌落数：皮损表面微生物密度(cfu/cm2)=每平皿菌落数×250÷3.14。患者组和对照组分别在开始治疗前晨起后空腹抽取上肢静脉血5ml，采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验测定其中血清淀粉样蛋白A(SAA)、白介素-6(IL-6)、白介素-17(IL-17)、白介素-22(IL-22)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平检测。

2 结果

2.1 不同部位微生物分布培养结果比较 125例皮炎湿疹患者的皮损标本中，经培养鉴定呈细菌和(或)真菌阳性者共83例(66.40%)，其中包括金黄色葡萄球菌42株(33.60%)，表皮葡萄球菌33株(26.40%)，同时经鉴定检出马拉色菌62株(49.60%)。患者组非皮损部位标本中，经培养鉴定呈细菌和(或)真菌阳性者共39例(31.20%)，其中包括金黄色葡萄球菌9株(7.20%)，表皮葡萄球菌36株(28.80%)，同时经鉴定检出马拉色菌37株(29.60%)。对照组50例健康成人正常皮肤标本中，经培养鉴定呈细菌及(或)真菌阳性者共24例(48.00%)，其中包括金黄色葡萄球菌0株，表皮葡萄球菌16株(32.00%)，同时经鉴定检出马拉色菌14株(28.00%)。全部皮损区域标本细菌总检出率显著高于非皮损皮肤，差异有统计学意义(χ2=30.993，P<0.05)；全部皮损区域标本金葡菌检出率显著高于非皮损皮肤，差异有统计学意义(χ2=15.433，P<0.05)；急性渗出型皮损细菌总检出率显著高于慢性斑块型皮损，差异有统计学意义(χ2=14.109，P<0.05)；急性渗出型皮损的金葡菌检出率与慢性斑块型皮损比较，差异无统计学意义(χ2=0.467，P>0.05)；全部皮损区域标本马拉色菌检出率显著高于非皮损皮肤，差异有统计学意义(χ2=10.452，P<0.05)。见表1。

表1 皮炎湿疹皮损及非皮损处及对照组微生物分布情况 %(例)

注：与全部皮损比较，*P<0.05；与急性渗出型比较，#P<0.05

2.2 皮炎湿疹皮损进展情况与微生物检出率关系比较 皮损进展继发感染的患者共30例，皮损进展处细菌总检出率83.33%(25/30)与金葡菌检出率76.67%(20/30)均显著高于临床皮损无进展患者皮损处细菌总检出率61.05%(58/95)和金葡菌检出率20.00%(19/95)以及正常皮肤组，差异有统计学意义(P<0.05)；但皮损进展继发感染的患者与皮损无进展皮炎湿疹患者及对照组正常皮肤者表皮葡萄球菌的检出率接近，差异无统计学意义(P>0.05)。皮损进展继发感染的患者与皮损无进展皮炎湿疹患者马拉色菌的检出率接近，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 皮炎湿疹皮损进展情况与微生物检出率关系比较 %(例)

注：与皮损无进展比较，*P<0.05；与皮损进展比较，#P<0.05

2.3 皮炎湿疹皮损进展情况与患者血清炎性因子关系比较 皮损进展继发感染患者血清中SAA、IL-6、IL-17、IL-22、IL-1β、TNF-α、TGF-β1等多种炎性介质的含量明显高于皮损无进展患者的指标，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

2.4 皮炎湿疹皮损进展情况与微生物数量关系比较 皮损进展继发感染的患者共30例，皮损处细菌平均密度为(953 466±9 255)cm2，金葡菌平均密度为(744 287±8 337)cm2，均显著高于皮损无进展组及对照组的细菌平均密度及金葡菌平均密度，差异有统计学意义(P<0.05)。皮损无进展患者皮损处细菌平均密度为(493 668±8 362)cm2，金葡菌平均密度为(443 755±6 844)cm2，均显著高于对照组的细菌平均密度及金葡菌平均密度，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表3 皮炎湿疹皮损进展情况与微生物数量关系比较

进展情况细菌平均密度金葡菌平均密度皮损无进展(n=95)493668±8362443755±6844皮损进展(n=30)953466±9255744287±8337对照组(n=50)3654±4218944±695

注：与皮损无进展比较，*P<0.05；与皮损进展比较，#P<0.05

组别SAA(ng/ml)IL-6(pg/ml)IL-17(pg/ml)IL-22(pg/ml)IL-1β(pg/ml)TNF-α(ng/L)TGF-β1(ng/ml)皮损无进展(n=95)7.32±1.1448.65±15.9220.91±3.4516.96±2.2212.12±2.4284.44±24.63117.84±15.23皮损进展(n=30) 12.12±2.2499.64±21.2230.62±4.5726.07±4.5118.15±4.76201.33±25.85161.23±41.22t值13.53514.24312.16413.2458.33423.2457.347P值<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01

3 讨论

国外研究显示，特异性皮炎(atopicdermatitis，AD)的发生与细菌感染特别是金葡菌感染关系密切，金葡菌分泌的多种外毒素具有超抗原特性，能够诱发或加重特异性皮炎[9]。研究发现，皮炎湿疹患者皮损部位细菌和真菌也有较高的检出率，因此认为微生物的定植在皮炎湿疹的发生发展中发挥了重要作用[10]。

本研究中，125例皮炎湿疹患者的皮损处微生物培养阳性者共占66.40%，其中金黄色葡萄球菌检出率达到33.60%，真菌检出率49.60%，较该组患者在非皮损部位细菌及真菌检出率明显升高，而对照组金葡菌检出率为0，提示皮炎湿疹与局部微生物感染增加具有关联。

本研究结果中皮炎湿疹皮损进展情况与微生物检出率关系密切，皮损进展继发感染的患者皮损部位细菌总检出率高达83.33%(25/30)，同时金葡菌检出率76.67%(20/30)，均显著高于临床皮损无进展患者及对照组，但表皮葡萄球菌与马拉色菌的检出率各组较为接近。并且皮损进展继发感染的患者皮损处细菌和金葡菌平均密度均显著高于皮损无进展组及对照组。这一结果提示患者皮炎湿疹皮损进展继发感染与皮损部位细菌感染，尤其是金黄色葡萄球菌感染密切相关。细菌感染造成皮炎湿疹疾病进展，而炎性因子的大量分泌则是炎性反应加剧的始动因素。TH17，Th22细胞能够分泌IL-17及IL-22等炎性因子，IL-17可以诱导单核细胞和组织巨噬细胞合成分泌多种炎性介质、促进补体C3的合成；补体C3可以与IL-22受体相互结合并激活TNF-α的表达。IL-1β属于炎性反应的刺激物，局部含量降低时可以协同刺激T细胞活化，而Treg细胞的主要通过细胞-细胞接触抑制和分泌抑制性细胞因子如TGF-β、IL-10 的方式而发挥免疫调节作[11]。在微炎症诊断是皮肤病的诊疗技术法阵的新方向[12-14]，SAA对于急性炎症进程的评价，其敏感度甚至高于CRP，在微炎症诊断中CRP应用更为普遍[15]。本研究中皮损进展继发感染患者血清中多种炎性介质的含量明显高于皮损无进展患者，这可能为皮炎湿疹早期诊治、病情评判、预后提供依据。

综上所述，皮炎湿疹疾病进展与其皮损部位金黄色葡萄球菌感染、金葡菌平均密度密切相关，相关炎性因子可能为皮炎湿疹早期诊治、病情评判、预后及治疗提供可靠的参考指标。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.06.017

518108 广东省深圳市宝安区石岩人民医院

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