蔬菜农残快速检测工作中的体会

李爱国

（河北省任丘市农业局 河北 任丘 062550）

蔬菜农残快速检测工作中的体会

李爱国

（河北省任丘市农业局 河北 任丘 062550）

“民以食为天，食以安为先”，随着人们生活水平的提高，食品安全问题成为人们日益关注的焦点。发展无公害蔬菜，加强对蔬菜农药残留的快速检测，已成为十分必要的监管措施。近几年来，基层农产品检测部门和许多蔬菜产销企业都建立了检测室，配备了速测仪。随着食品安全县的创建，2016年，任丘市农业局的九个基层站、任丘市丰丽园蔬菜科技示范园区都建立了检测室，配备了速测仪。提高蔬菜农药残留快速检测技术，成为各基层农产品检测部门和许多蔬菜产销企业的重要任务。

1 蔬菜农药残留快速检测技术

目前，常用的蔬菜农药残留快速检测技术是一种生化检测法，生化检测法中又以酶抑制率法应用最为广泛。酶抑制率法的原理是在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物(乙酰胆碱)水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412 nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。该方法具有快速、方便、简单、成本较低等优点，适用于现场定性和半定量测定，特别适合各级农产品检测部门及蔬菜产销部门开展快速检测工作。但使用该方法检测蔬菜农药残留时受环境、提取条件、反应温度、操作等因素影响严重，存在检测结果误差大，重现性不好等问题。

2 近几年的实际工作体会

2.1 胆碱酯酶的最高活性温度为37℃，当温度条件低于37℃时，酶的反应速度随之放慢，加入酶和显色剂后，放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定，应以胆碱酯酶空白对照测试，3 min的吸光度变化值ΔA应在要求范围之内，即可往下操作。注意样品的放置时间与空白对照溶液的放置时间要一致。对照3 min吸光度变化小的原因：一是酶的活性不够，二是温度太低。根据经验，检测室温度在20℃～24℃时，放置反应15 min，25℃以上放置反应10 min，当室温低于20℃时，要放入37℃～38℃的水浴锅中预热10 min。

2.2 速测仪要放在干燥的地方，冬季室温底，湿度大时，仪器的光路系统易受影响，平时可在样品室放一些干燥剂。使用前必须开机预热10 min，尤其寒冷的冬季室温较低时要适当延长预热时间，使机器稳定后再进行测量。要经常调零、调百位进行校准以确保仪器测试的准确度。

2.3 手拿比色杯时，要拿毛面，否则易影响透光度。比色杯一定要洁净，可定期用乙醇浸泡清洗。

2.4 移液枪要贴上标签，专枪专用，避免交叉使用造成试剂污染；试剂从试剂瓶吸出后，不能再放回瓶中，坚持只出不进的原则，防止整瓶试剂污染。使用移液枪吸试剂时要平稳，不要过快，否则易导致所加试剂量不准。

2.5 要严格按照说明书来保存、配制试剂。胆碱酯酶易失活，对于酶抑制率法来说，又是最为关键的因素，其质量技术水平决定了检测的灵敏度、稳定性和可靠性。酶主要有两种类型：一种是固态酶，一种是改良的液态酶。固态酶更稳定，保存性更好，需冷冻保存，使用前需用缓冲液溶解，酶液反复解冻，酶的活性下降，反复解冻不超过2次，解冻后的酶液最好在7 d内用完，注意用完后应及时放回冰箱。改良的液态酶可在0℃～5℃下冷藏保存，不需冷冻，从冰箱拿出后，恢复到室温摇匀后即可直接使用，相对来说使用比较方便。

2.6 葱、蒜、韭菜、萝卜、蘑菇、番茄等蔬菜的汁液中含有对酶有影响的次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株(大块蔬菜)浸提，对于叶绿素含量较高的样品也可采取类似的方法。若浸提液较混浊时可进行过滤。提取时振荡2 min，静置3 ～5 min，时间不能过短，也不能过长，过短农药残毒提取不完全，过长蔬菜中的汁液被提取的过多，影响吸光度。

2.7 最后一般操作要快，对照、待测样品加底物后应马上摇匀，倒入比色杯，立即上机测试，否则上机前酶和底物发生反应，上机后不到3 min就反应完毕，会影响数据的准确性。

2.8 在检测过程更换试剂或重新设定测量时间，一定要重新做对照，确保对照检测值正确。

总之，检测人员要熟悉酶抑制率法的原理、操作步骤、速测仪、移液枪的使用，严格按操作规程操作，才能减小误差，提高数据的准确度。