Foxp3在宫颈癌中的表达及临床意义

阴春霞,贾云霄,曲红光,陈明星,辛精卫*,金光华

(1.长春市妇产医院,吉林 长春130041;2.吉林大学中日联谊医院;3.长春市中心医院 普外科)

Foxp3在宫颈癌中的表达及临床意义

阴春霞1,贾云霄1,曲红光1,陈明星2,辛精卫2*,金光华3

(1.长春市妇产医院,吉林 长春130041;2.吉林大学中日联谊医院;3.长春市中心医院 普外科)

Foxp3(Forkhead box protein 3)是转录因子家族中的一个成员，是CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs) 特异的标志物[1，2]。在一些肿瘤病人的肿瘤组织和外周血中均存在Foxp3表达增强和Tregs增多的现象[3，4]，其通过协助肿瘤细胞逃避免疫系统的监视，促进肿瘤的免疫逃逸。而Foxp3是Treg发挥作用的关键调节基因。本研究通过对宫颈癌、各级别的宫颈癌上皮内瘤变(CIN)以及正常宫颈组织及血液中Foxp3 表达情况的分析,分析Foxp3在宫颈癌发生中的作用。

1 资料与方法

1.1 对象和分组

选取2001- 2013年就诊于长春市妇产医院接受妇产科手术治疗病人的血液和术后石蜡标本,其中CIN Ⅰ-Ⅱ级20份( CIN Ⅰ-Ⅱ级组),CINIII级20份( CINⅢ级组) ,宫颈癌60份(宫颈癌组),因宫颈病变行宫颈锥切术术后病理明确为慢性宫颈炎的标本20份(对照组)。CIN Ⅰ-Ⅱ级组病人的年龄30-65岁；CIN Ⅲ级组病人的年龄36-62岁；宫颈癌组病人的年龄39-62岁；对照组病人的年龄43-55岁。各分组之间年龄无明显差别。宫颈癌组中鳞癌55例,腺癌5例；并根据2009年国际妇产科联盟(FIGO)分期法分期。

1.2 方法

1.2.1 石蜡标本Foxp3的检测 入选蜡块切片,进行Foxp3免疫组织化学染色(SP法),由病理科有经验的医师重新阅读HE染色片,复核病理诊断及组织学分类。

1.2.2 血液标本的处理 采集血样立即室温下提取淋巴细胞。实验操作步骤按照说明书进行。

1.2.3 人血液中Foxp3的检测 取1×106PBMC细胞悬液离心，甲醛固定后打孔，加入荧光标记的Foxp3抗体标记，4℃避光保存，上机检测。

1.2.4 免疫组织化学结果判定 采用双盲法对结果进行观察。Foxp3定位表达主要在细胞核和细胞质中,镜下呈棕黄色颗粒。半定量分析标准如下：无阳性的染色细胞为阴性(-)；0-25%为弱阳性(+/-)；25%-50%为阳性(+)；50%-75% 为中等阳性(++)；>75%为强阳性(+++)。

1.2.5 病例随访 首次手术时间定为随访开始，所有病人均获得完整随访资料。60例宫颈癌病人的中位生存时间是37个月(6-98个月)。

1.3 统计学方法

采用SPSS15.0软件进行统计学处理(组间比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman秩相关检验)。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Foxp3蛋白的表达

免疫组织化学结果显示(图1),在对照组和CIN组中,Foxp3 表达并不明显；而在宫颈癌组中,Foxp3表达的阳性率为61.7%,与其他三组比较差异均有统计学意义(P>0.01)(表1)。流式细胞术结果显示在对照组和CIN组中,Foxp3 表达并不明显;而在宫颈癌组中,Foxp3表达的阳性率为60.0%,明显高于对照组和CIN组(见图2)。血液与组织中联合表达Foxp3的阳性率为45.0%明显高于对照组和CIN组(表1)。

表1 Foxp3在各组内的阳性表达情况(n,% )

注:组间比较：P<0.05,具有统计学意义。

图1 组织中Foxp3蛋白的表达

图2 血液中Foxp3的表达

2.2 宫颈癌病人Foxp3表达与临床病理学参数的关系

检测结果显示,Foxp3表达仅与FIGO分期明显相关(P=0.038)。而与其他临床及病理学参数无相关性(P>0.05)。其中,有淋巴结转移的11例病人中,血液中Foxp3阳性表达病人占72.7%(8/11),组织中Foxp3阳性表达病人占63.6%(7/11)，高于无淋巴结转移病人(27.3%和36.4%)；而在宫颈鳞癌病人中,血液中Foxp3 表达阳性的比例达60.0%(33/55),组织中Foxp3阳性表达病人占63.6%(35/55)，高于宫颈腺癌病人中的比例(40.0%和36.4%),但上述差异均无统计学意义(P>0.05)(表2)。

表2 宫颈癌病人Foxp3表达与临床病理学参数的关系(n)

2.3 血液与宫颈癌组织Foxp3表达之间的关系

在癌组织中Foxp3阳性表达的病人中血液Foxp3阳性表达者占51.3%(19/37),血液中Foxp3阳性表达的在组织Foxp3 阳性组中亦高表达(47.2%,17/36),Spearman秩相关检验提示二者存在正相关(P=0.017),表明组织及血液中Foxp3的表达具有协同表达的可能性。

3 讨论

Foxp3作为Tregs行使功能的决定因子，参与局部免疫应答，其功能过度发挥时反而促进肿瘤的免疫逃逸[3-6]。已有研究证实，在多种肿瘤病人外周血、肿瘤组织以及淋巴结中存在着Foxp3+数量的增加，肿瘤中Foxp3+Tregs的数量多少与肿瘤进展程度和病人预后密切相关[7，8]。 关于Foxp3在宫颈癌肿瘤局部及血液中的表达尚缺乏系统的研究。Woo等[5]报道Foxp3+Tregs在非小细胞宫颈癌外周血表达增高。Schneider等[3]检测到宫颈癌肿瘤标本和淋巴结标本中Foxp3的表达增多，并伴有NK细胞数目的减少。Shimizu等[4]采用免疫组化对100例非小细胞宫颈癌病人肿瘤组织标本Foxp3的检测发现，肿瘤浸润的Foxp3+Tregs数目与较差的无复发生存期密切相关。我们的研究发现在肿瘤局部及血液中均存在Foxp3表达的增高，明显高于CIN和正常对照组，且血液中Foxp3的表达与肿瘤局部的表达明显相关。由此我们做出如下假设：在宫颈癌病人的血液中Foxp3表达增高，并在宫颈癌肿局部发挥作用，导致了癌灶局部免疫应答减弱或缺失，促进了肿瘤的免疫逃逸，导致了肿瘤的发生发展。另外CIN病人血液中及肿瘤局部的表达高于正常对照组，但差异无统计学意义。一定程度说明Foxp3参与宫颈癌的发生也是一个渐变的过程。

另外，我们的研究还发现，Foxp3在宫颈癌肿瘤局部和血液的阳性表达与宫颈癌FIGO分期相关，并在淋巴结转移病人中的表达明显高于无淋巴结转移，说明Foxp3诱导的免疫逃逸也参与了宫颈癌病人淋巴转移的过程，并一定程度上提示病人不好的预后。由此我们认为Foxp3在宫颈癌局部和血液的表达，尤其是血液中Foxp3的表达，可以作为一个辅助的评估病人疾病严重程度及术后随访的指标。另外CIN病人血液中及局部也存在Foxp3一定程度的增高，从量变到质变的角度考虑，通过生物靶向或免疫疗法逆转CIN病人Foxp3的高表达[9]，能否阻止CIN进一步恶变为宫颈癌甚至进一步使CIN逆转，有待于进一步的研究。

综合以上实验结果，我们研究发现Foxp3在宫颈癌组织及血液中高表达，并与肿瘤的分期及生物学行为密切相关，而且Foxp3在肿瘤组织和血液中的表达显著正相关，协同促进了宫颈癌的发生发展。由此我们认为Foxp3的表达升高与宫颈癌的发生和发展关系密切,两者既可作为宫颈癌的筛查、术前疾病评估和术后随访的辅助指标，也为临床靶向干预提供了理论依据。

[1]Brunkow ME,Jeffery EW,Hjerrild KA,et al.Disruption of a new forkhead/winged-helix protein,scurfin,results in the fatal lymphoproliferative disorder of the scurfy mouse[J].Nat Genet,2001,27(1):68.

[2]Li B,Samanta A,Song X,et al.FOXP3 ensembles in T-cell regulation[J].Immunol Rev,2006,212:99.

[3]Schneider T,Kimpfler S,Warth A,et al.Foxp3+ regulatory T cells and natural killer cells distinctly infiltrate primary tumors and draining lymph nodes in pulmonary adenocarcinoma[J].J Thorac Oncol,2011,6(3):432.

[4]Shimizu K,Nakata M,Hirami Y,et al.Tumor-infiltrating Foxp3+ regulatory T cells are correlated with cyclooxygenase-2 expression and are associated with recurrence in resected non-small cell lung cancer[J].J Thorac Oncol,2010,5(5):585.

[5]Woo EY,Yeh H,Chu CS,et al.Cutting edge:Regulatory T cells from lung cancer patients directly inhibit autologous T cell proliferation[J].J Immunol,2002,168(9):4272.

[6]Ohara M,Yamaguchi Y,Matsuura K,et al.Possible involvement of regulatory T cells in tumor onset and progression in primary breast cancer[J].Cancer Immunol Immunother,2009,58(3):441.

[7]Jaberipour M,Habibagahi M,Hosseini A,et al.Increased CTLA-4 and FOXP3 transcripts in peripheral blood mononuclear cells of patients with breast cancer[J].Pathol Oncol Res,2010,16(4):547.

[8]Deng L,Zhang H,Luan Y,et al.Accumulation of Foxp3+T regulatory cells in draining lymph nodes correlates with disease progression and immune suppression in colorectal cancer patients[J].Clin Cancer Res,2010,16(16):4105.

[9]Loddenkemper C，Hoffmann C，Stanke J， et al.Regulatory (FOXP3+)T cells as target for immune therapy of cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer[J].Cancer Sci，2009，100(6)：1112.

吉林省卫生厅课题(2012Z136)

1007-4287(2017)03-0495-03

2016-04-17)

*通讯作者