血清VEGF-C及VEGF-D对T3期大肠癌淋巴结转移作用的研究

肖大雷,张绍鹏,王大广, 所 剑

(吉林大学第一医院 胃肠外科,吉林 长春130021)

*通讯作者

血清VEGF-C及VEGF-D对T3期大肠癌淋巴结转移作用的研究

肖大雷,张绍鹏,王大广, 所 剑*

(吉林大学第一医院 胃肠外科,吉林 长春130021)

结直肠癌(colorectal cancer)是世界第3大恶性肿瘤,在医学技术不断进步的今天,尽管全球发病率有下降趋势,但其在我国癌谱中的位置却不断攀升[1]。国内外研究均表明大肠癌淋巴结转移是影响患者5年生存率的最重要因素,淋巴结转移数目越多,预后越差。VEGF-C和VEGF-D是近年来人们发现的有利于淋巴管内皮细胞再生的两种血管生长因子[2,3],VEGF-C、D与VEGFR-3结合,促进淋巴内皮细胞增生,是淋巴管再生的独立影响因子[2,4,5]。多项研究表明大肠癌癌组织中VEGF-C和VEGF-D水平与肿瘤侵润程度、淋巴结转移有关,但有关血中VEGF-C、D水平与大肠癌淋巴结转移的研究较少,因此设计本实验研究血清VEGF-C及VEGF-D对T3期大肠癌淋巴结转移作用。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取吉林大学第一医院胃肠外科术前明确诊断为大肠癌,无远处转移,术后病理为T3期大肠癌患者50例,男性29例,女性21例,T3N0期29例,T3N1期13例,T3N2期8例,所有病例均无糖尿病、糖耐量异常病史,术前行常规血生化检查、心脏彩超、X线等检查均无异常,术前均未作放疗和化疗。

1.2 方法

术前清晨空腹采静脉血2 ml,注入抗凝管内,3 500 r/min,离心5 min。取血清于无菌管中,置入-80℃冰箱保存。人VEGF-C、D试剂盒购自上海源叶生物有限公司；Synergy H1型酶标仪。采用双夹心ELISA法分别测样本中VEGF-C、D含量,严格按照试剂盒操作说明进行,用酶标仪在主波450 nm,辅波540 nm处读取OD值(15 min内)。测定值按标准曲线换算成VEGF-C、D含量。

1.3 统计方法

2 结果

T3期大肠癌患者有淋巴结转移者的血清VEGF-C水平明显高于无淋巴结转移患者,分别为402.867±214.05 pg/ml和176.487±129.25 pg/ml,P<0.001,有统计学差异；有淋巴结转移者的血清VEGF-D水平明显高于无淋巴结转移患者,分别为526.997±288.92 pg/ml和213.973±104.12 pg/ml,P<0.001,有统计学差异(表1、图1)。

表1 血清中VEGF-C、D与淋巴结转移之间关系(x—±s)

图1 有淋巴结转移组和无淋巴结转移组血清中VEGF-C和VEGF-D浓度平均变化情况(±SE)

T3期大肠癌患者血清中VEGF-C和VEGF-D水平均和患者年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤部位等无关,P>0.05；在有淋巴结转移患者中淋巴结转移数目的多少与血清VEGF-C、D水平无明显相关,P>0.05(表2)。

表2 血清中VEGF-C、D与临床病理特征之间关系(x—±s)

3 讨论

VEGF-C和VEGF-D是VEGF家族中的两种促进淋巴管再生的因子,人的 VEGF-C 基因位于染色体 4q34 上,含 7 个外显子,编码一种含 419个氨基酸残基的蛋白,分子量约 46.9 kD[6],VEGF-D基因位于染色体xp22.34上,长度为50 kb[7],VEGF-C和VEGF-D的受体都有两种,分别为VEGFR-2 和VEGFR-3,其与VEGFR-2结合能促进血管内皮再生,与VEGFR-3结合能促进淋巴管内皮细胞再生,与肿瘤通过血行和淋巴途径转移密切相关。研究表明,肿瘤细胞可分泌VEGF-C和VEGF-D,通过旁分泌和自分泌方式作用于周边血管、淋巴管内皮细胞和肿瘤细胞,促进血管内皮细胞和淋巴内皮细胞再生,形成新的血管和淋巴管[8,9],新生的血管内皮细胞间隙较大,可能是VEGF-C、D等因子进入血液循环的途径。

查阅相关文献发现,有关血清中VEGF-C、D水平与大肠癌淋巴转移的研究较少,且研究结果各异,Alabi AA[10]用Elisa法对120名大肠癌患者血清VEGF-C含量进行测定,有淋巴结转移患者血清中VEGF-C含量平均值为91 pg/ml,无淋巴结转移患者血清中VEGF-C含量平均值为124 pg/ml,P=0.81,无统计学差异,且VEGF-C含量与患者性别、年龄、肿瘤位置、Dukes分期无关。但Xu 等[11]的研究显示较高浓度的血清VEGF-C大肠癌患者与肿瘤淋巴转移有相关性,本研究显示,有淋巴结转移大肠癌患者的血清VEGF-C水平明显高于无淋巴结转移患者,分别为402.867±214.05 pg/ml和176.487±129.25 pg/ml,P<0.001,有统计学差异,这与Xu等的研究相符,血清中VEGF-C含量与患者性别、年龄、肿瘤位置无关。Duff[12]等利用酶联免疫吸附实验测量120例结直肠癌患者血浆中VEGF-D浓度,有淋巴结转移组VEGF-D的平均值为335 pg/ml,无淋巴结转移组平均值为316．5 pg/ml,其差异无统计学意义,认为术前VEGF-D水平不能评估患者的淋巴结转移状态。但本研究显示,T3期有淋巴结转移患者大肠癌患者的血清VEGF-D水平明显高于无淋巴结转移患者,分别为526.997±288.92 pg/ml和213.973±104.12 pg/ml,P<0.001,有统计学差异。这与Duff等的研究有差异。Alabi AA[10]等研究还显示,血清中VEGF-C与大肠癌远处转移有关,但考虑到其他VEGF家族因子如VEGF-A、B、E等可促进血管再生,可能对实验结果有影响,因此本实验将有转移的大肠癌剔除,主要关注血清中VEGF-C、D对大肠癌淋巴转移的作用。

总之,通过结合本研究及过往研究,我们认为,血清中VEGF-C、D水平与T3期大肠癌淋巴转移相关,Xu 等[11]研究显示,当血清中VEGF-C达到临界值1438.0 pg/ml时，其对肿瘤淋巴转移预测的灵敏度为81%,准确度为76%,但想通过血清中VEGF-C、D含量准确判断大肠癌淋巴转移状态还有待进一步进行大样本实验研究。

[1]赫 捷,赵 平,陈万青.中国肿瘤登记年报[M].北京：军事医学科学出版社,2011:10.

[2]Joukov V,Pajusola K,Kaipainen A,et al.A novel vascular endothelial growth factor,VEGF-C,is a ligand for the Flt-4 (VEGFR-3) and KDR(VEGFR-2) receptor tyrosine kinases[J].EMBO J,1996,15(7):1751.

[3]White JD,Hewett PW,Kosuge D,et al.Vascular endothelial growth factor-D expression is an independent prognostic marker for survival in colorectal carcinoma[J].Cancer Res,2002,62(6):1669.

[4]Kaipainen A,Korhonen J,Mustonen T,et al.Expression of the fms-like tyrosine kinase 4 gene becomes restricted to lym-phatic endothelium during development[J].Proc Natl Acad Sci U S A,1995,92(8):3566.

[5]Karkkainen MJ,Haiko P,Sainio K,et al.Vascular endothelial growth factor C is required for sprouting of the first lym-phatic vessels from embryonic veins[J].Nat Immu-nol,2004,5(1):74.

[6]Karkkainen MJ,Haiko P,Sainio K,et al.Vascular endothelial growth factor C is required for sprouting of the first lymphatic vessels from embryonic veins[J].Nat Immunol,2004,5(1):74.

[7]Yamada Y,Nezu J,Shimane M,et al.Molecular cloning of a novel vascular endothelial growth factor VEGF-D[J].Genomics,1997,42(3):483.

[8]Nishida N,Yano H,Komai K et al.Vascular endothelial growth factor C and vascular endothelial growth factor receptor 2 are related closely to the prognosis of patients with ovarian carcinoma[J].Cancer,2004,101(6):1364.

[9]Furudoi A,Tanaka S,Haruma K,et al.Clinical significance of vascular endothelial growth factor C expression and angiogenesis at the deepest invasive site of advanced colorectal carcinoma[J].Oncology,2002,62(2):157.

[10]Alabi AA,Supiah A,Madden LA,et al.Preoperative serum levels of serum VEGF-C is associated with distant metastasis in colorectal cancer patients[J].Int J Colorectal Dis,2009 24(3):269.

[11]Xu T,Chen D.Serum vascular endothelial growth factor-C and Vascular endothelial growth factor level in patients with colorectal carcinoma and clinical significance[J].Journal of Huazhong University of Science and Technology Med Sci,2006,26(3):329.

[12]Duff SE,Saunders M,McCredie V,et al.Pre-operative plasma levels of vascular endothelial growth factor A,C and D in patients with colorectal cancer[J].Clin Oncol (R Coll Radiol),2005,17(4):367.

1007-4287(2017)03-0481-03

2016-08-22)