黎药裸花紫珠与胆木组合的药效学研究高香奇李诚丛

周星

【摘要】目的：筛选出黎药裸花紫珠和胆木最佳药效组合，为开发新药做准备。方法：对裸花紫珠和胆木提取物的组合进行包括抗炎、镇痛、抗菌和解热等药效学研究。结果：裸花紫珠和胆木的水、醇提取物的单方和组方在剂量为052g/kg·bw时，对小鼠均有一定的抗炎、镇痛作用；剂量为04g/kg·bw时，两者单方对内毒素致热家兔具有解热作用；组方裸花紫珠醇提物-胆木醇提物（026g/kg：026g/kg）对内毒素致热家兔的解热效果更佳；两者的水、醇提取物单方和组方均有一定的抑菌作用。结论：组方裸花紫珠醇提物-胆木醇提物（026g/kg：026g/kg）的抗炎、镇痛、解热和抗菌等作用最佳。

【关键词】黎药；裸花紫珠；胆木；最佳组合；药效学

【中图分类号】R2855【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）06-0034-05

裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hooket Arn）为马鞭草科植物，主要分布在我国的广东、广西和海南。裸花紫珠的药用历史悠久，在海南黎族民间也广泛的应用，海南黎族称裸花紫珠为“雅介龙”，应用在各种创伤流血、妇科炎症、腰骨痛及皮肤疥疮等[1]。裸花紫珠含有黄酮甙、酚类等多种成分，研究表明，裸花紫株可抑制毛细血管通透性，对早期的炎症渗出、肿胀有明显的抗炎性反应作用[2]；能明显缩短出、凝血时间，止血效果显著[3-4]；还能抑制多种细菌，可预防继发性感染的发生[4]。

胆木（Nauclea officenalis Pierre ex Pitard）为茜草科植物，其枝、树皮等具有药用价值，主要分布于广东、海南及广西等省区，含有黄酮苷、酚类，主要用于外感发热、急性黄疸、胃痛、急性扁桃体炎及咽喉炎等。从茎分离物（主要为生物碱）具有一定的抑菌作用。

裸花紫珠和胆木一般都单独使用，这在很大程度上限制了二者在临床上的广泛应用，本研究将对二者组合的药效学进行研究，针对性地协同增强二者的抗炎、镇痛、解热和抗菌等主要功效，筛选出二者的最佳药效学组合，增强药效的同时，以其减少药物使用量。现将研究结果报道如下。

1仪器与材料

11儀器AEG-120G型电子分析天平（岛津）；UV-2401PC紫外分光光度计（岛津）；YLS-5Q台式超级控温烫伤仪；HW-3智能热原仪（天大天发）。

12药物裸花紫珠水提取物（简称A）、裸花紫珠60%乙醇提取物（简称B）、胆木水提取物（简称C）、胆木60%乙醇提取物（简称D），以上提取物由海南省药物研究所自制。实验受试物根据具体实验要求配制。阳性对照药阿司匹林肠溶片（批号：20080106，规格：25mg/片，昆明云健制药有限公司）。

13动物SPF级昆明种小鼠、普通级家兔，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供，生产许可证号：SCXK（湘）2009-0012。

2方法

21组方抗炎作用筛选实验

211小鼠腹腔毛细血管通透性试验[5]取小鼠240只，雌雄各半，体重为18～22g，随机分成24组，每组10只，依次为阴性对照组、阳性对照组、A～D四种提取物的各剂量（026g/kg、052g/kg和104g/kg）组和A∶C（039g/kg∶013g/kg）、A∶C（035 g/kg∶017 g/kg）、A∶C（026 g/kg∶026 g/kg）、A∶C（017 g/kg∶035 g/kg）、A∶C（013 g/kg∶039 g/kg）、B∶D（039 g/kg∶013 g/kg）、B∶D（035 g/kg∶017 g/kg）、B∶D（026 g/kg∶026 g/kg）、B∶D（017 g/kg∶035 g/kg）、B∶D（013 g/kg∶039 g/kg）等各组合组各组分别按20mL/kg的容积灌胃给药，灌服相应的药液，每天1次，各组小鼠连续灌胃给药3d。末次给药后1h，[JP]各鼠尾静脉注射05%伊文思蓝生理盐水01mL/10g，随即腹腔注射06%醋酸02mL/只。20min后小鼠脱臼处死。剖开腹腔，用6mL生理盐水数次冲洗腹腔，收集并合并冲洗液于离心管内，加入生理盐水至于10mL，[JP2]以3000r/min，离心15min，取出上清液于分光光度计590nm波长处比色，以吸光度表示伊文思蓝渗出量。

212小鼠鼠耳肿胀试验[6]取小鼠240只，雌雄各半，体重为18～22g，随机分成24组，每组10只，[JP2]各组分别按20mL/kg的容积灌胃给药，灌服相应的药液，每天1次，各组小鼠连续灌胃给药3d。末次给药后1h，给小鼠右耳涂以二甲苯003mL/只，左耳作对照，20min后处死小鼠，用直径6mm的打孔器将双耳同部位等面积切下，精密称量，按以下公式计算各值。肿胀度=右耳重量-左耳重量。每组剂量均以浸膏计。[JP]

22组方镇痛作用筛选实验[7]

221热板法小鼠筛选：调节恒温烫伤仪，使温度控制在（55±05）℃，取雌性小鼠300只，每次1只放在热板上，测自小鼠放入在热板上至出现舔足所需时间，作为该鼠的痛阈值，凡舔后足时间小5s或大于30s或跳跃者弃之不用，选合格小鼠240只。取合格小鼠240只，分为24组，每组10只。实验前各组每只小鼠测其正常痛阈值。试验时各组小鼠按拟定剂量灌胃，1次/d，连续3d，末次给药后60min将小鼠放在热板上（55±05）℃测其痛阈值，如60s仍无反应，则痛阈值以60s计，计算镇痛率，镇痛率=（给药组痛阈值一对照组痛阈值）/对照组痛阈值×100%。

222扭体实验取健康小鼠240只，随机分成24组，每组10只，雌雄各半。各组小鼠每日按04mL/20g的容积灌胃1次，连续给药3d，于末次给药后60min，腹腔注射05%醋酸02mL/只，观察15min内各组小鼠由醋酸引起的扭体次数。

23组方的体外抗菌作用筛选研究[6]实验菌株：大肠埃希菌（2株）、金黄色葡萄球菌（2株）、链球菌（1株）、白色假丝酵母菌（2株）、解脲支原体（2株），均来自海南医学院附属医院检验科临床微生物室。培养基采用血琼脂平板、沙保弱平板和M-H肉汤。试验方法采用肉汤稀释法。药物浓度依次为02、01、005、0025、00125g/mL。

24组方的解热作用筛选[8]取家兔，雌雄不限（雌兔应未孕），实验前对家兔进行预选，家兔单独装盒，只固定颈部，探头插人直肠，深度约6cm，测温探头整个实验过程中均保持在家兔直肠内；室温保持在20℃，每隔30min记录体温1次，共测8次，选取体温在380～396℃之间，体温波动不大于04℃的家兔96只，随机分成16 组，每组6只，实验当日停食2h，相隔30min测量2次体温，取平均值作为初始体温，然后分别按相应剂量灌胃给药1次，05h后静脉注射致热剂 （取细菌内毒素工作标准品，用氯化钠注射液溶解，配成10 EU/mL溶液） 1mL/kg，于注射致热剂给药后每30min记录体温1次，共测8次，计算每只家兔各个时间的温度与其初始体温的差值，即为体温的变化值，若为负值，计为0 ℃，计算各组体温的变化值。

25统计学方法数据用SPSS 100软件处理，以平均数±标准差（x[TX-*3]±s）表示，采用方差分析法，P<005表示差异有统计学意义。

3结果

31组方抗炎作用筛选实验

311小鼠腹腔毛细血管通透性试验除剂量为026g/kg的A～D组以外，其余各组与溶剂对照组比较，明显抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的增高，减少渗出（P<005）；阿司匹林组，剂量为104 g/kg 的A～D各组、 D组（剂量052g/kg）和B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]1）组的效果明显（P<001）。见表1。

312小鼠鼠耳肿胀试验除剂量为026g/kg的A～D组以外，其余各组与溶剂对照组比较，对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有制作用（P<005）；阿司匹林组，剂量为104 g/kg 的A～D各组、 D组（剂量052g/kg）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]1）和B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]2）组的效果明显（P<001）。

32组方镇痛作用筛选实验

321热板法各组给药后痛阙值与给药前比较，各给药组与溶剂对照组比较，给药剂量为052g/kg的 C和D组、A∶[KG-*3/5]C（1∶[KG-*3/5]3）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]1）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]2）等各组均能明显延长小鼠热板舔足反应潜伏期（P<005）；阿司匹林组、给药剂量为104g/kg的 C～D组和B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]3）能显著延长小鼠热板舔足反应潜伏期（P<001），其余各组均无明显抑制作用。见表2。

322扭体实验与溶剂对照组比较，由05%醋酸引起的小鼠扭体次数，剂量为052g/kg 的C和D、A∶[KG-*3/5]C（1∶[KG-*3/5]3）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]1）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]2）等各组均能明顯抑制由05%醋酸引起的小鼠扭体次数（P<005）；阿司匹林组、剂量为104g/kg的C和D组、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]3）能显著由05%醋酸引起的小鼠扭体次数（P<001）；其余各组均无明显抑制作用。

34组方的解热作用筛选裸花紫珠和胆木的提取液，与溶剂对照组比较，单方A、C、D（剂量：04 g/kg）在注射内毒素4h后，能抑制家兔体温升高（P<005）；B（剂量：04 g/kg）在注射内毒素3h和4h后，均能抑制家兔体温升高（P<005）。各组方与溶剂对照组比较，A∶C（3∶1）和B∶D（2∶1）在注射内毒素4h后，能抑制家兔体温升高（P<005）；A∶C（2∶1）在注射内毒素3h和4h后，均能抑制家兔体温升高（P<005）；A∶C（1∶1）和B∶D（3∶1）在注射内毒素2h～4h后，均能抑制家兔体温升高（P<005）；B∶D（1∶1）在注射内毒素1～4h后，均能抑制家兔体温升高（P﹤005）。结果显示，裸花紫珠和胆木提取液单方和各组方对家兔具有一定的解热作用，其中组方B∶D（1∶1）效果更明显。

4讨论

本研究考察了裸花紫珠和胆木的水和醇提取物单方和组方的抗炎、镇痛、解热、抑菌作用。结果显示，在体内抗炎药理实验中，两者单方剂量052、104g/kg·bw和各组方（总剂量为052g/kg·bw）对冰醋酸引起的小鼠腹部毛细血管通透性增加和二甲苯所致的小鼠耳肿胀具有一定抑制作用，且裸花紫珠醇提物：胆木醇提物（026g/kg ： 026g/kg）在抑制炎症方面协同增效的趋势更为明显。在镇痛药理实验中，采用热板法和扭体实验对两者进行药效评价，裸花紫珠水提和醇提取液无明显的镇痛作用，胆木水和醇提取液单方在剂量052g/kg·bw时，具有镇痛作用，且镇痛作用与剂量呈正关系；组方A∶C（1∶3）、B∶D（1∶1）、B∶D（1∶2）和B∶D（1∶3）均对小鼠亦有一定的镇痛作用。在体外抗菌作用研究中，试验结果显示，裸花紫珠和胆木提取液单方、各组方对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、白色假丝酵母菌、解脲支原体均有一定的抑菌作用。在组方解热作用筛选试验中，总剂量为04g/kg·bw时，两者单方和组方均能降低细菌内毒素致热家兔体温的升高（P<005），裸花紫珠醇提物：胆木醇提物（026 g/kg∶026g/kg）对内毒素致热家兔的解热效果更佳。

裸花紫珠又称紫珠，主要成分为黄酮类、缩合鞣质[9]，可抑制毛细血管通透性，对早期的炎症渗出、肿胀有明显的抗炎性反应作用，同时可缩短出、凝血时间，止血效果显著，还能抑制多种细菌可预防继发性感染的发生，具有保肝降酶的作用。胆木的主要含有黄酮苷、酚类，主要用于治疗外感发热、急性黄疸、胃痛、急性扁桃体炎以及咽喉炎等，其分离物生物碱还具有一定的抑菌作用。前期通过对裸花紫珠和胆木水和60%乙醇提取物进行活性成分分析，发现60%乙醇提取物裸花紫珠的出膏率、总黄酮和鞣质含量均高于水的提取物；胆木的60%乙醇提取物的出膏率、总黄酮和生物碱含量均高于水的提取物。本次实验结果显示，裸花紫珠和胆木的60%乙醇提取物较水的提取物药效更佳，且两者的组合物裸花紫珠醇提物：胆木醇提物（026g/kg∶026g/kg）在抗炎、镇痛、解热和抗菌作用方面协同增效明显，可减少单方使用的剂量，具有开发的潜能。因此，裸花紫珠和胆木的联合使用可协同增强抗炎、镇痛、解热和抗菌作用，且与主要成分总黄酮、鞣质和生物碱含量成一定的量效关系。可考虑将组方裸花紫珠醇提物：胆木醇提物（026g/kg∶026g/kg）开发出复合型药物组合物，针对性地协同增强二者的抗炎、镇痛、解热和抗菌等主要功效，进行下一步的研究开发，开发出新品种药物，以期能缩短病程、降低并发症的发生率，使用方便，且无药物不良反应，创立海南南药和黎族医药新的品牌。

参考文献

[1]王艳.裸花紫珠的临床应用研究进展[J].现代中西医结合杂志，2014，23（35）：3983-3985.

[2]陈颖，杨国才.裸花紫珠抗炎作用及增强免疫力功能的实验研究[J].广东微量元素科学，2006，13（8）：39-41.

[3]梁纪军，徐凯，李留法，等.裸花紫珠总黄酮的抗炎、止血作用研究[J].现代中西医结合杂志，2009，18（26）：3161-3162.

[4]符健，邝少轶，王世雄.裸花紫珠片的抗菌消炎和止血作用研究[J].海南大学学报：自然科学版，2002，20（2）：154-157.

[5]WHETTLE B A. The use of changen in capillary permeability in mice to distirguish and nonnarcotic between narcotic and nonnarcotic analgesics[J].Brit Pharmacol，1964，22（2）：23.

[6]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1993：259，272.

[7]阮叶萍，金铭.当归四逆汤镇痛作用实验研究[J].浙江中医药大学学报，2012，36（10）：1108-1111.

[8]林爱华，刘奕明，丘小惠，等.板蓝根F022部位对内毒素致家兔发热模型的解热作用[J].中药新药与临床药理，2005，16（6）：420-421.

[9]白晶.中药裸花紫珠研究现状[J].中国中医药现代远程教育，2009，7（2）：8-9.

（收稿日期：2017-01-13编辑：梁志庆）