野生和林下种植金线莲的体外抗氧化活性研究

赵立 杨彬君 庞文生 胡娟

【摘要】目的：研究野生和林下种植金线莲的体外抗氧化活性。方法：采用紫外分光光度法，检测野生金线莲和林下种植金线莲水提液及醇提液对DPPH自由基的清除能力。结果：野生金线莲和林下种植金线莲对DPPH自由基具有一定的清除作用，其活性均为水提液优于醇提液；野生金线莲与林下种植金线莲对DPPH自由基的清除活性总体差异不大。结论：林下种植可以作为缓解金线莲资源紧张的重要途径。

【关键词】金线莲；林下种植；抗氧化活性

【中图分类号】R284【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）06-0015-03

金线莲（Anoectochilus roxburghii）为兰科开唇兰属（Anoectochilus）地生型多年生草本植物，是民间常用的珍稀草药，享有“药王”、“金草”等美称。金线莲以全草入药，性平、味甘，具有清热、凉血、解毒、祛风除湿的功效[1]。现代研究发现金线莲具有降低低密度脂蛋白的氧化易感性、清除活性氧自由基等抗氧化活性[2-3]。

金线莲的种子发芽率低，生长繁殖也较为缓慢，近年来掠夺式的开采使金线莲生长的植被遭到破坏，栖息地减少，导致金线莲野生资源锐减，处于濒危状态[4]。《国家重点保护野生植物名录》（第二批）将其列为二级保护植物[5]。金线莲的野生资源亟待保护，为了拯救濒危植物，解决金线莲资源紧张问题。设施栽培、林下种植和盆栽等人工栽培模式被应用于金线莲的种植。林下种植金线莲是以林地资源为依托，利用林木枝叶适当的遮荫效果，形成有利于金线莲生长的环境进行栽培种植[6]。其具有充分利用林地资源空间，不占用粮食用田，单位生产成本较低等特点，林下种植金线莲正日益增多。本研究采用DPPH自由基清除法，以水和乙醇为提取溶剂，对野生和林下种植金线莲进行比较分析，评价抗氧化活性的差异。

1仪器与材料

11仪器UV-3200型紫外分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；AE240S电子分析天平（梅特勒-托利多上海有限公司）；L-530低速离心机（湖南湘仪实验室仪开发有限公司）；KQ2200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）。

12材料野生金线莲1号购于泉州叶之典生物科技有限公司；野生金线莲2号购于福建虎伯寮生物集团有限公司；林下种植金线莲1号产自仙游金线莲林下种植示范基地，林下种植6个月，购于仙游中青生物科技有限公司；林下种植金线莲2号产自武平梁野山林下种植金线莲基地，林下种植6个月，购于福建金草生物集团股份有限公司；1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）购于美国Sigma公司；L-抗坏血酸（VC）、乙醇均为分析纯，购于国药集团化学试剂有限公司。

2方法

21金线莲水提液的制备称取金线莲5g，加水350mL浸泡10min，煎煮5min，过滤取上清液；药渣加水200mL，继续煎煮5min，过滤；第三次加少许水煎煮5min，最后合并滤液至500mL；即得浓度为001g/mL的金线莲水提液。

22金线莲醇提液的制备称取金线莲1g，加入30mL乙醇浸泡30min，使药材与溶剂充分接触，超声提取2h后，离心（4000r/min，10min），取上清液，药渣重复提取2次，合并上清液，乙醇定容至100mL；即得浓度为001g/mL的金线莲醇提液。对醇提液进行浓缩，分别取上述制备的金线莲醇提液50mL，放入蒸发皿中，65℃水浴挥发浓缩，转移至10mL容量瓶中乙醇定容，得到濃度为005g/mL的金线莲醇提液。

23清除自由基活性测定分别取金线莲水提取液00、300、600、900μL于具塞试管中，加水至1mL，分别加入DPPH溶液2mL，摇匀，得到金线莲水提液浓度分别为0、1、2、3mg/mL的待测样品溶液，室温下避光静置30min；分别取金线莲醇提液00、300、600、900μL于具塞试管中，加无水乙醇至1mL，分别加入DPPH 2mL，摇匀，同样得到金线莲醇提液浓度分别为0、1、2、3mg/mL的待测样品溶液，室温下避光静置30min。用2mL无水乙醇代替2mL DPPH溶液作空白对照，采在517nm波长处测定吸光度，以下式计算清除率。

DPPH清除率计算公式：DPPH清除率=[A0-（A1-A2）]/A0×100%

公式中 Ao为空白对照吸光度；A1为样品溶液吸光度；A2为样品对照吸光度。

3结果

31野生和林下种植金线莲水提液对DPPH自由基清除活性的影响通过实验对4个金线莲样品水提液的DPPH自由基清除活性进行测定，结果见表1。在实验研究的质量浓度范围内，4种样品对DPPH自由基的清除能力随质量浓度的增大而上升。林下种植金线莲与野生金线莲水提液对DPPH自由基的清除活性相比相差不大，其IC50值均在2～3mg/mL。

4讨论

41提取时间的选择实验对金线莲不同提取时间得水提液的DPPH自由基清除率进行比较，提取时间依次为1、3、5、10、15、20、30、40min。结果发现1～15min内其对DPPH自由基清除率逐渐增加。提取时间为15min时其清除率最高，当金线莲浓度为2mg/mL时，其清除率为4202%。提取时间超过15min后DPPH自由基清除率逐渐降低。金线莲在长时间的煎煮时，可能使其抗氧化活性成分被破坏。因此，以金线莲作为茶饮时，其煎煮时间不宜过长，以15min为宜。

42实验浓度的选择实验过程中金线莲水提液浓度在3mg/mL时，其对DPPH自由基清除率已达到50%，而金线莲醇提液的清除率仅为15%左右，对其进行浓缩。当金线莲醇提液浓度在15mg/mL时，其对DPPH自由基清除率才高于50%。因此，金线莲醇提液的实验浓度为1～15mg/mL。由此也可以看出金线莲水提液清除DPPH自由基效果高于醇提液，这也符合金线莲在民间以水煎作为茶饮的食用习惯。并且其水煎液色澄明味清香，受到广大人民的青睐。实验结果为金线莲的资源开发提供一定理论依据。

随着金线莲健康产业的发展，其需求量不断上升。林下种植金线莲可以充分利用林地资源空间，不占用粮食用田，降低单位生产成本。有利于金线莲实现规模化，产业化的发展。该研究发现野生金线莲与林下种植金线莲对DPPH自由基的清除活性总体差异不大。林下种植可以作为缓解金线莲资源紧张的重要途径和手段，同时也有利于其野生资源的保护。实验结果为金线莲林下种植产业的发展提供了一定的依据和基础。

参考文献

[1]王国强. 全国中草药汇编[M]. 3版.北京：人民卫生出版社， 2014： 594.

[2]张春妮，许国平，汪俊军，等. 金线莲体外抑制LDL氧化的实验研究[J]. 医学研究生学报， 2006（02）： 117-120.

[3]林丽清，黄丽英，郑艳洁，等. 金线莲多糖的提取及清除氧自由基作用的研究[J]. 福建中医学院学报， 2006， 16（5）： 37-39.

[4]邵清松，周爱存，黄瑜秋，等. 不同移栽条件对金线莲组培苗成活率及生长的影响[J]. 中国中药， 2014（6）： 955-958.

[5]洪琳，邵清松，周爱存，等. 金线莲产业现状及可持续发展对策[J]. 中国中药， 2016（3）： 553-558.

[6]邵清松，叶申怡，周爱存，等. 金线莲种苗繁育及栽培模式研究现状与展望[J]. 中国中药， 2016（2）： 160-166.

（收稿日期：2017-01-13编辑：穆丽华）