甲状腺乳头状癌中ret癌基因的表达

谢英娜

（辽宁省沈阳市第九人民医院病理室，辽宁 沈阳 110024）

甲状腺乳头状癌中ret癌基因的表达

谢英娜

（辽宁省沈阳市第九人民医院病理室，辽宁 沈阳 110024）

目的观察研究人类甲状腺乳头状癌中ret癌基因的表达及其意义。方法选取本院2010年3月至2016年6月近6年肿瘤科收治的43例甲状腺乳头状癌确诊患者（乳头状癌组）及其癌旁正常组织（对照组），选取同期30例甲状腺滤泡型癌（滤泡型癌组），29例甲状腺腺瘤（腺瘤组）术后病理标本（甲状腺组织）。通过反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测两组4组入选者中ret癌基因的活化情况。结果入选甲状腺乳头状癌的43例患者中共出现14例（32.56%）ret/ptc癌基因呈阳性表达。滤泡型癌组、腺瘤组与对照组经检测ret/ptc癌基因均呈阴性表达。ret/ptc癌基因呈阳性表达的患者平均年龄显著小于ret/ptc癌基因呈阴性表达的患者（P<0.05）。结论甲状腺乳头状癌与ret癌基因的活化表达有着重要联系，ret癌基因的活化可能与该病的发生发展有关。且ret/ptc癌基因呈阳性平均年龄较小，其肿瘤呈现的体积较小发展程度较轻，其肿瘤组织细胞分裂繁殖能力较弱，经治疗患者远期预后能力较强，ret癌基因的活化表达可成为判定患者甲状腺乳头状癌的生物学行为指标。

ret基因；表达；ptc基因；甲状腺肿瘤；甲状腺乳头状癌

近年来，国外专家研究称甲状腺乳头状癌患者的癌细胞中多会有ret癌基因活化表达，该形式被命名为ret/ptc癌基因[1]。因此本次实验本院选取2010年3月至2016年6月近6年肿瘤科收治的43例甲状腺乳头状癌确诊患者及其癌旁正常组织，选取同期30例甲状腺滤泡型癌，29例甲状腺腺瘤的术后病理标本，通过反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测两组4组入选者中ret癌基因的活化情况。现进行如下报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取本院2010年3月至2016年6月近6年肿瘤科收治的43例甲状腺乳头状癌确诊患者（乳头状癌组）及其癌旁正常组织（对照组），选取同期30例甲状腺滤泡型癌（滤泡型癌组），29例甲状腺腺瘤（腺瘤组）术后病理标本（甲状腺组织）。4组患者在性别、年龄、病程等一般资料方面均没有显著性差异（P>0.05），因而具有可比性。

1.2 纳入排除标准

1.2.1 纳入标准[2]：①患者的确诊均为术后病理标本经病理学检查确诊；②所有患者的检查资料、术后随访资料完整；③手术治疗前未接受放化疗、免疫治疗等；④研究对象了解本研究的目的、意义并签订知情同意书。

1.2.2 排除标准[3]：①手术前使用放疗或者化疗治疗的患者；②合并其他部位原发性肿瘤的患者；③病历及随访资料不完整的患者。

1.3 方法：TaqDNA聚合酶、引物、Trizol试剂、RT试剂盒、蛋白酶K由南京诺唯赞生物科技有限公司提供。

RNA提取：甲状腺乳头状癌、癌旁正常组织、甲状腺滤泡型癌、甲状腺腺瘤组织分别放入离心管中，其中裂解液500 μL并使用高速分散器（湖北康龙电子科技有限责任公司）将组织粉碎，放置一段时间后吸取上清液放入其他离心管里（在冰浴中进行），加入3 mol/L MaAC、氯仿、饱和酚并混匀，静置15 min，12000 r/min离心10 min。吸取上清液放入其他离心管(内置异丙醇)，-20 ℃下过夜。第2天离心后弃上清液，加入0.5 mL异丙醇及裂解液，-20 ℃下静置1 h。离心后弃上清液，加入乙醇静置在空气中直至干燥。加入DEPC水测定其样品浓度。

RT反应条件：42 ℃30 min、99 ℃5 min、5 ℃5 min，反应体积为10 μL。PCR反应体积为50 μL，设空白对照。

PCR反应条件：94 ℃预变性2 min后，94 ℃ 30 s、59 ℃ 30 s、72 ℃1 min共27个循环，72 ℃延伸10 min。

反应产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳后经电泳凝胶成像分析系统采集图像，测定灰度值[3]。

1.4 统计学方法：利用统计学处理软件SPSS13.0进行处理分析，采用卡方检验对数据资料进行对比分析，计量资料比较采用t检验，以P＜0.05来显示结果差异性显著，具有统计学意义。

2 结 果

2.1 ret/ptc癌基因呈阳性表达患者中组织学分级为Ⅱ级的有9例（20.93%），组织学分级为Ⅲ级的有2例（4.65%）。见表1。

表1 四组入选者ret/ptc癌基因表达比较

2.2 乳头状癌组经临床资料研究得ret/ptc癌基因呈阳性表达的患者平均年龄（27.68±5.36）岁，ret/ptc癌基因呈阴性表达的患者平均年龄（44.37±13.93）岁。呈阳性患者平均年龄显著小于阴性表达的患者（P<0.05）。呈阳性表达的患者肿瘤大小、性别、淋巴结是否转移与呈阴性患者无显著差异（P>0.05）。

3 讨 论

经诸多实验证实，肿瘤的演进、发生多由机体内一连串的基因发生突变导致的，这些改变将极大破坏或影响正常细胞的调控、增生等机制。甲状腺上皮性肿瘤由于其滤泡上皮发生病变，经不同因素影响最终发展成为床生物学行为、表型等各不相同的肿瘤。本次实验中乳头状癌多为多灶性，经由淋巴道转移扩散，而滤泡性癌多为单灶性，其多经由侵袭血管完成转移扩散，上述两种癌细胞具备不一样的生物学特征，不同的甲状腺肿瘤演进、发生多由机体内一连串的对应特定基因发生突变导致的[4]。

而本次实验研究甲状腺乳头状癌与ret癌基因活化表达间的联系。ret癌基因在10q11.2区，外显子共21个，其主要表达合成酪氨酸蛋白激酶受体，该受体能通过胞膜[5]。其增殖分化调节主要由胞外信号传导来调控。当10号染色体的H4基因与RET癌基因融合发生突变后形成ret/ptc癌基因，其表达合成的蛋白延长ret癌基因合成的受体激活时长，下游信号将这一指令进行传导，导致细胞恶性转化，经多方证实其几乎只在甲状腺乳头状癌中表达。与本次实验结果一致。

综上所述，甲状腺乳头状癌与ret癌基因的活化表达有着重要联系，ret癌基因的活化可能与该病的发生发展有关。且ret/ptc癌基因呈阳性平均年龄较小，其肿瘤呈现的体积较小发展程度较轻，其肿瘤组织细胞分裂繁殖能力较弱，经治疗患者远期预后能力较强，ret癌基因的活化表达可成为判定患者甲状腺乳头状癌的生物学行为指标。

[1] 赵坚强,郭良,戚晓平,等.RET原癌基因p.C618Y突变的家族性甲状腺髓样癌一家系的临床诊治分析[J].中华医学杂志,2013,93 (6):440-444.

[2] 潘瑞蓉,张海鸣,王济芳,等.RET/PTC3在甲状腺乳头状癌中的表达[J].广东医学,2016,37(4):577-579.

[3] 叶艳,武学润,赵树君,等.RET/PTC1重排和 BRAFV600E突变甲状腺乳头状癌细胞系原位裸鼠模型比较[J].中华内分泌代谢杂志,2016,15(1):62-66.

[4] 俞灵莺,马丽珍,屠巧峰,等.荧光定量PCR检测甲状腺结节针吸细胞甲状腺乳头状癌的原癌基因1,3的重排[J].中华内分泌代谢杂志,2014,30(10):830-833.

[5] 濮亚斌,李刚强.甲状腺乳头状癌组织中酪氨酸激酶受体第16外显子基因突变情况及意义[J].山东医药,2014,48(7):22-23.

R737.9

B

1671-8194（2017）05-0022-02