全自动染色机在制备涂胶载玻片中的改良应用

2017-03-20钱洁芳任丽芳李美平戈文舜

临床与实验病理学杂志 2017年12期

鲁波，钱洁芳，任丽芳，张鹏，沈寅，李美平，戈文舜，包磊

在日常免疫组化染色中防止组织切片在染色过程中脱落，是免疫组化的重要环节[1]。因此，操作前必须将载玻片用3-氨丙基三乙氧基硅烷(3-Aminopropyitriethoxyssicane, APES)进行预处理。本科室利用全自动染色机制作涂胶载玻片，效果良好，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1材料(1)载玻片规格：25.4 mm×76.2 mm×(1～1.2) mm；(2)APES试剂：10 mL(工作浓度1 ∶50)；(3)隔水式电热恒温培养箱；(4)全自动HE染色机(Leica St5020型，德国Leica公司)；(5)丙酮；(6)蒸馏水(自配)；(7)重铬酸钾清洗液。(8)实验对照组的组织标本类型：选用质地较硬，易掉片的子宫颈锥切组织、子宫平滑肌瘤组织、带血块的子宫内膜组织。

1.2方法

1.2.1载玻片预处理将所需载玻片清除包装后浸于清洗液中过夜，取出后自来水冲洗干净。蒸馏水冲洗1遍，将装有载玻片的染色架至65 ℃温箱烘干备用。

1.2.2全自动染色机程序编辑按下Clip Color进入Program Clip colorassignment菜单为程序设定颜色代码。按下Insert Row创建程序步骤，实验选用染色机空置的4缸染色缸，分别设置APES丙酮缸2 min→空缸5 min→蒸馏水缸15 s→空缸，按下Sation打开Choose Sation菜单选择站点，然后按Confirm将所选站点指定到该步骤。按下Duration设置步骤的持续时间，按Confirm确认。按照上述方法依次设定其他步骤数。最后一个站点设置，即下载站点。进入Choose Sation选择Exit作为最后一个站点。

1.2.3涂胶载玻片制作运行将APES和丙酮(1 ∶50)混匀后，将此液倒入APES丙酮缸备用，将蒸馏水倒入蒸馏水缸备用，将洗净的载玻片插入染色架(30张/架)中，并配上指定标记染色头(以便机器操作时识别)，放入染色机中自动运行，依次经过待定缸→APES丙酮缸→空缸→蒸馏水缸→结束空缸。

1.2.4涂胶载玻片温箱烘烤将浸泡好的涂胶载玻片放入65 ℃恒温培养箱烘烤2 h后放置室温自然冷却，晾干后装入载玻片包装盒中备用。

2 结果

本实验选用质地较硬、平时容易脱片的平滑肌瘤组织、子宫颈锥切组织和带有血块的子宫内膜组织2 μm厚切片，选用自动染色机制备的涂胶片进行贴片，烤片后行免疫组化染色，结果无一组织脱片，镜下观察阳性细胞定位准确，无背景着色，结果可靠稳定(图1～3)。

3 讨论

免疫组化染色技术以其操作简单、敏感性高、特异性强，能将形态和抗原定位结合起来等优点，广泛应用于肿瘤临床病理诊断和鉴别诊断[2]。在免疫组化染色过程中，切片需长时间在液体中孵育，并受高温高压抗原修复等步骤的处理。因为，脱片现象时有发生，尤其在组织处理不佳时更加明显；所以在日常病理工作中经常需要将载玻片用粘合剂预处理，以减少组织或细胞的损失[3]。

从经济角度分析，虽然市场上已有成品涂胶载玻片出售，但是其价格较高，通常50片/盒为100元左右，30盒为3 000元，而10 mL APES+490 mL丙酮混合制涂胶片，数量可达30盒左右(50片/盒)，其10 mL APES售价仅为80元；两者价格相比，甚为明显。从环保角度分析：丙酮是刺激性挥发性液体，对中枢神经系统有抑制、麻醉作用。长时间接触可产生头晕、恶心及呕吐。APES是一种腐蚀性液体，配制时应避免接触皮肤，通常工作人员都是手工制作涂胶载玻片，不仅对人体危害极大，而且挥发的丙酮始终暴露在办公场所中。而全自动染色机制作涂胶载玻片时所有过程均在封闭的机器中进行，大大减少与人的接触，降低了有毒有害气体对人体的侵害。染色机又安放在通风管道口，挥发的气体可直接排放至室外。从质量角度分析：通常制作涂胶载玻片方法繁琐费时费力，由于没有合适的容器，实验中以往选用50 mL隔槽玻璃杯制作。因此，一般只能制作3～4盒(50片/盒)，而且每次制作时不能保证手法一致，制成的涂胶片附着的APES流量会不一致，受人为因素影响较大。而全自动染色机以其卓越的性能和良好的处理效果，特别是稳定、高效，逐渐被各级医院病理科接受并使用[4]，大大减少手工操作时间，且染色架的合理间隙使每张载玻片均能均匀的涂抹到APES，通过计算机处理程序的精确操作，确保制作涂胶片的质量，制成的涂胶载玻片看不出浸泡后留下的痕迹，玻面光滑平整，又降低了工作强度，大大改善了工作环境。病理涂胶载玻片制作由传统的经验控制转变为科学的质量控制。总之，合理利用全自动染色机制作涂胶载玻片能够减少机器的空置率。用完清洗干净，不影响机器再次使用，此方法制成的涂胶片与市售的涂胶载玻片无明显差异，值得推广。