利福昔明混悬乳剂的安全性试验

史同瑞，朱庆贺，王 爽，陈 曦，王观悦，杨淑萍，侯美如，于万才

(黑龙江省兽医科学研究所，黑龙江齐齐哈尔 161005)

利福昔明混悬乳剂的安全性试验

史同瑞，朱庆贺，王 爽，陈 曦，王观悦，杨淑萍，侯美如，于万才

(黑龙江省兽医科学研究所，黑龙江齐齐哈尔 161005)

应用全身过敏性、皮肤刺激性、黏膜刺激性和乳腺刺激性试验，评定了利福昔明混悬乳剂的安全性。结果表明，致敏试验豚鼠均未出现过敏性反应。在皮肤刺激性试验中，单次敷药组家兔皮肤均未见异常变化，多次敷药组虽有1只试验兔皮肤出现了短暂性轻微红斑，但皮肤刺激反应积分平均值仅为0.2。在黏膜刺激性试验中，受试药物组有1只试验兔的阴道黏膜出现轻微的充血现象，阴道黏膜刺激反应积分平均值为0.2。乳腺刺激性试验羊乳房未见异常症状，乳腺组织未见充血、水肿和白细胞浸润等病理变化。综合评价试验结果表明，利福昔明混悬乳剂是一种安全性良好的制剂。

利福昔明；混悬乳剂；安全性

利福昔明是利福霉素的半合成衍生物，由意大利阿尔法韦士曼公司研究开发，1987年在意大利上市[1]。2002年利福昔明口服片剂进口我国，此后，利福昔明原料药及其他剂型制剂也陆续进入国内市场。利福昔明抗菌谱广，抗菌作用强，对革兰阳性菌、革兰阴性菌均具有很强的杀灭活性。由于利福昔明局部使用不易被机体组织吸收，仅在局部发挥高效抗菌作用，因此，利福昔明是一种优良的局部抗细菌感染药。在医学领域，利福昔明主要用于治疗肠道及预防外科手术等局部感染炎症[2-3]。在兽医领域，利福昔明主要用于动物乳房炎、子宫炎、胃肠炎、皮肤感染和腐蹄病等局部感染的预防和治疗[4-6]。

混悬乳剂，又称悬浮乳剂、悬乳剂，是一种相对复杂的悬浮乳状液载药体系，由固体悬浮体与乳状液混合形成，该体系不仅具有混悬剂和乳剂的特性，而且还具有自身独特性能[7]。混悬乳剂不仅使用方便，可经口服、注射等途径使用，而且还能延缓药物的释放，减少用药次数，提高药物疗效。国际上有关混悬乳剂的研究起始于20世纪80年代后期，目前，在农药及工业制剂中应用较多[8]。近年来，在兽医领域也开展了相关的研究工作[9-10]。利福昔明不溶于水，为方便临床用药，将其制备成一种20 g/L利福昔明混悬乳剂，拟用于动物乳房炎、子宫炎及肠道感染的治疗。本试验检验了药剂的安全性，旨在为其临床应用提供安全性技术依据。

1 材料与方法

1.1 材料

2 g/L利福昔明混悬乳剂，规格：20 mL∶0.4 g，由本研究室自制。豚鼠，体重350 g～400 g,家兔，体重1.5 kg～2.0 kg，由齐齐哈尔医学院实验动物中心提供。健康泌乳绵羊，体重50 kg～60 kg，购自当地某绵羊养殖场。试验动物均常规饲养，饮水、饲料中不含抗菌药物。

1.2 方法

1.2.1 过敏性试验 取健康豚鼠30只，分为5组，雌雄各半，每组6只，分别为高剂量药物组、中剂量药物组、低剂量药物组、阳性对照组和阴性对照组。高剂量药物组、中剂量药物组和低剂药物量组分别经腹腔注射受试药物1.0、0.5、0.2 mL/只，阳性对照组腹腔注射50 mL/L卵蛋白液0.5 mL/只，阴性对照组腹腔注射空白乳剂1.0 mL/只，各组均隔日注射1次，连续注射3次。在末次注射后第14天各组豚鼠经前肢静脉分别注射50 mL/L卵蛋白液1 mL/只激发致敏反应。致敏期间每天观察豚鼠症状，激发注射后3 h内密切观察豚鼠临床变化。参照文献方法[11]，依据试验豚鼠过敏反应症状和致敏性评价标准，评定药物的致敏性。

1.2.2 皮肤刺激性试验 取健康家兔10只，均分2组，雌雄各半，分别为单次敷药组和多次敷药组。采用同体左右侧自身对照方法，每组均设空白乳剂作为对照。试验前剪去家兔背部脊柱两侧被毛，然后用100 g/L硫化钠脱毛，每侧脱毛面积约为5×5 cm2，注意保持脱毛皮肤无破损。单次敷药组取受试药物1.0 mL直接涂布于右侧去毛皮肤上，左侧涂布等量空白乳剂，然后用两层纱布和一层玻璃纸覆盖，再用绷带固定，贴敷24 h后除去受试物，用温水清洗，在去除受试物后1、24、48、72 h，观察记录涂敷部位皮肤有无红斑和水肿等症状。多次敷药组每天敷药1次，剂量同单次敷药组，每次贴敷4 h，连续敷药6次，在每次去除受试物后1 h、再次敷药前，以及末次敷药去除后1、24、48、72 h，观察涂敷部位皮肤有无红斑和水肿等症状。参照文献[11]皮肤刺激反应评分标准，计算每一观察时间点每组家兔贴敷部位皮肤反应积分平均值，并依据皮肤刺激强度评价标准判定药物的刺激性。

1.2.3 阴道黏膜刺激性试验 取健康雌性家兔15只，试验前阴道检查应无分泌物、充血、水肿及损伤等异常症状。试验兔随机均分为灭菌蒸馏水对照组、空白基质对照组和受试药物组，给药前禁食禁水6 h。给药时固定家兔，消毒阴门，将灭菌输药管插入家兔阴道5 cm～6 cm深处，注入试验药液1 mL，家兔在固定器内保持头低尾高姿势，固定4 h后放回兔笼。1次/d，连续给药7 d。

试验期间，每天观察记录家兔精神、食欲等全身状况，以及阴道局部反应，末次给药后24 h处死全部试验兔，剖检阴道黏膜，观察有无红肿、出血、破溃等现象。参照文献[12-13]方法评定药物的刺激性。黏膜刺激性评分及评定标准：无变化或无明显变化为0分；轻度充血，有少量分泌物为1分；中度充血，分泌物较多为2分；重度淤血，水肿，分泌物很多，黏膜变性为3分。统计平均分值在0～0.4范围判定为无刺激性，分值0.41～1.5判定为轻度刺激性，分值0.51～2.5判定为中度刺激性，分值大于2.5判定为重度刺激性。

1.2.4 乳腺刺激性试验 选取健康泌乳绵羊3只，试验羊右侧乳区灌注受试药物，左侧乳区灌注生理盐水作对照，灌注剂量均为2.0 mL/次，2次/d，连续3 d。给药时先挤净乳汁，再用消毒药药浴乳头约30 s，然后经乳头管灌注药物，并按摩乳区，使药物均匀分布。每天观察记录绵羊临床变化、乳汁性状，以及乳房是否出现红、肿、疼痛和发热等症状，试验至末次给药后7 d结束，参照文献[14]评分标准进行临床症状评分。试验结束后剖杀存活绵羊，剖检，采取乳腺组织，制作切片，并进行病理学检查。

2 结果

2.1 过敏性试验结果

试验结果表明，在致敏期间及激发注射后3 h内观察，各组豚鼠均未出现骚动不安、站立不稳、被毛竖立、身体颤抖、搔鼻、咳嗽、喷嚏、呼吸困难等过敏反应症状，反应症状评分为0，过敏反应为阴性。试验说明利福昔明混悬乳剂对豚鼠无致敏作用。

2.2 皮肤刺激性试验结果

在单次敷药试验中，各观察时间点受试药物和空白乳剂涂敷部位皮肤均未见红斑、水肿等异常症状，皮肤刺激反应积分为0，说明药物无刺激性。在多次敷药试验中，在末次敷药去除后1 h观察时，有1只兔受试药物和空白乳剂涂敷部位皮肤均出现轻微红斑，皮肤刺激反应积分平均值为0.2，但在除去受试药物24 h后观察，皮肤恢复正常，其他试验兔各观察时间点均未见异常变化。依据皮肤刺激强度评价标准，评定药物无刺激性。

2.3 阴道黏膜刺激性试验结果

阴道黏膜刺激性试验结果表明，给药期间试验组与对照组家兔均未见异常临床症状，阴道口也未见有充血、红肿及异常分泌物流出等现象。试验结束时剖检家兔，肉眼观察阴道黏膜，发现空白基质对照组和受试药物组各有1只试验兔的阴道黏膜仅出现轻微充血现象，其他家兔未见充血、出血、水肿、红斑、溃疡等异常症状。阴道黏膜刺激反应平均分值为0.2，说明受试药物安全。

2.4 乳腺刺激性试验结果

试验期间绵羊精神状态良好，采食量、体温等指标正常，试验乳房均未见红、肿、疼痛和发热症状，乳汁性状、泌乳量未见异常，临床症状评分为0。剖检乳腺未见充血、出血、水肿、坏死等病理变化。乳腺组织切片观察显示，乳腺管及腺泡结构正常，管泡腔内未见脱落的腺上皮细胞及炎性细胞等，间质未见水肿及炎性细胞浸润等异常现象(图1)。

3 讨论

利福昔明是治疗局部感染的高效药物，利用其特点，笔者研发了一种20 g/L利福昔明混悬乳剂，并拟用于动物子宫炎、乳房炎、肠炎等局部感染的治疗。刺激性是指非口服给药制剂给药后对给药部位产生的可逆性炎症反应，主要考察动物血管、肌肉、皮肤、黏膜部位接触受试药物后是否引起红肿、充血、渗出、变性、坏死等局部反应[11,15-16]。依据利福昔明混悬乳剂的拟用药途径，以及药剂主要作用于子宫黏膜、胃肠道黏膜和乳腺组织的特点，试验选择了皮肤刺激性试验、过敏性试验、阴道黏膜刺激性试验、乳腺刺激性试验作为评定药剂安全性的试验依据。

A1～C1.试验组；A2～C2.对照组

A1-C1.Experimental groups;A2-C2.Control groups

图1 羊乳腺组织学观察(HE，200×)

Fig.1 Histological observation of the mammary tissue of sheep(HE，200×)

在利福昔明混悬乳剂的安全性试验中，虽然多次敷药皮肤刺激性试验在末次敷药去除后1 h观察，有1只家兔受试药物和空白乳剂涂敷部位皮肤均出现轻微红斑。阴道黏膜刺激性试验有1只受试药物兔的阴道黏膜出现轻微的充血现象，但依据评定标准，药剂属无刺激性，可安全使用。综合分析试验结果，利福昔明混悬乳剂产生轻微刺激性的原因可能主要是与药剂的辅料有关。在利福昔明混悬乳剂中，除主药利福昔明外，其主要成分是液体石蜡和水，其次是乳化剂和助乳化剂。纵观利福昔明混悬乳剂中各成分，油相和乳化剂的安全性良好，不易引起动物的不良反应，仅其中的丙二醇可能是引起局部刺激的原因。

目前，研发的利福昔明兽用制剂剂型主要有混悬剂、纳米乳、栓剂和泡腾片，尚未见有混悬乳剂的研究报道。本试验结果表明，利福昔明混悬乳剂对皮肤、黏膜和乳腺组织无明显刺激性，对试验动物无致敏性，药剂安全性良好，可确保临床用药的安全。

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Safety Test of Rifaximin Suspoemulsion

SHI Tong-rui,ZHU Qing-he,WANG Shuang,CHEN Xi,WANG Guan-yue, YANG Shu-ping,HOU Mei-ru,YU Wan-cai

(HeilongjiangInstituteofVeterinaryMedicine,Qiqihar,Heilongjiang,161005,China)

The safety of rifaximin suspoemulsion was evaluated by the active systemic anaphylaxis test,skin irritation test,vaginal mucosa irritation test and mammary irritation test.The result showed that no sign of anaphylaxis was observed in guinea pigs.No abnormal changes were observed on the skin of the single dose rabbits.Although temporary mild erythema appeared on two rabbits skin in multiple dose groups,the skin irritation reaction average score was only 0.2.In the vaginal mucous membrane irritation test,the milde hyperemia was found in vaginal mucosa of a rabbit in test group,the vaginal mucous membrane irritation reaction average score was 0.2.No clinical symptoms,hyperemia,edema and leukocyte infiltration were found in the sheep mammary tissue.Comprehensive evaluation of the test results showed that the rifaximin suspoemulsion was a safe preparation.

rifaximin;suspoemulsion;safety

2016-07-25

黑龙江省创新能力提升专项项目(YC2016D004)

史同瑞(1965-)，男，山东济宁人，硕士，研究员，主要从事动物疾病诊断与治疗研究。

S859.7

A

1007-5038(2017)03-0086-04