冬凌草甲素提纯与分离

陈 松

（承德市食品药品检验检测中心，河北 承德 067000）

冬凌草甲素提纯与分离

陈 松

（承德市食品药品检验检测中心，河北 承德 067000）

冬凌草又称冰凌草，其中含有的冬凌草甲素的提纯与分离一直是业界较为关注的重点。目前较为常用的冬凌草甲素的提纯法有实验室内常用的乙醇提取法，但由于提取中所使用的溶剂毒性较大，提取的纯度不高，因此未能大规模应用到工业化生产中。而超临界CO2萃取工艺属于新工艺，该方法得出的结果提取效率高，适合大规模生产。本文主要简述该两种提纯分离方式，进行对比并得出结论。

冬凌草甲素；乙醇提取法；柱色谱法；超临界CO2萃取法

冬凌草是一种唇形科香茶菜属的植物，在过去的研究中发现从冬凌草中提取的冬凌草甲素是一种贝壳杉烯二萜类的化合物，这是一种有抗癌功效的成分，能有效地靶向杀死食管癌109细胞、肝癌细胞BEL-7402、胃腺癌MGc80-3细胞，阻止多种植物性动物肿瘤如ARS，ECA，P388等的扩散，同时还能抑制食管上皮细胞的恶性增生。目前在临床上，也多用于肝癌、食管癌和胰腺癌的治疗，具有强抗癌活性的冬凌草甲素可以说是医学界研究重点，因此如何能高效省时地提取纯度高的冬凌草甲素，也是研究的重心。本文主要简述乙醇提取法及超临界CO2萃取工艺与柱色谱技术分离法两种提纯分离方式，进行对比并得出结论。

1 仪器与试剂

多能式提取机组;工业用95%乙醇；粉状活性炭；甲醇（分析纯、色谱纯）；石油醚、丙酮、氯仿（分析纯）；冬凌草购自山东某药厂；冬凌草甲素对照品（含量98.3%）；柱层析硅胶；柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶G；CO2（山东某气体有限公司）SFE-2000型超临界流体萃取装置；Agilent1100型高效液相色谱仪。

2 乙醇提取法方法与结果

2.1 乙醇提取

取冬凌草2 kg加入95%乙醇，放置到多能式提取机中，在0.15 MKa下加热，之后回收乙醇。过滤后浓缩，取回绿褐色的膏状物，再加入水进行溶解，弃固体后用复合溶剂进行萃取。加入粉状活性炭后回流脱色，抽滤而后得浸膏110 g，在用400 mL石油醚萃取4次后得最终浸膏80 g。

2.2 柱层析分离

用少量乙醇溶解浸膏后，加入柱层析硅胶，再拌炒后呈干粉状。进行装柱后上层覆盖一定适量硅胶，再用9:1的石油醚进行洗脱，用TLC跟踪流份后，在8:2的洗脱物中，将白色晶体洗出，而后进行减压过滤操作，并进行洗白、干燥操作。

2.3 薄层层析分析

用甲醇溶解后的样品与冬凌草甲素对照品置于统一硅胶G薄层板上进行点样，在用8:2氯仿-丙酮进行展开后，再喷硫酸（纯度为50%）显色处理，进行加热，可以看到最终样品和对照品都具有同样的Rf值（约0.36），样品无杂质斑，呈现亮黄绿色斑点，与样品的斑点反应基本一致。

3 关于乙醇提取法的讨论

在本次实验中，可以看出冬凌草甲素在8:2的比例的石油醚-丙酮洗脱液中，进行的脱色处理可以除去大部分的干扰色素，使结晶体的纯度提高。再用5:5的石油醚-丙酮转移洗脱物的时候，可以发现过程中有结晶较易析出的特点，本提纯与分离的操作适合在实验室进行，所使用的溶剂便宜可得，操作简单、方便，无需借助大型的器材。

4 关于超临界CO2萃取的方法与结果

4.1 超临界萃取过程

先将经过干燥后得冬凌草进行研磨粉碎，过筛后将40目以下的冬凌草放进萃取器，将实验装置的控制系统开启，将萃取所需的压力，温度、CO2的流量及夹带剂流量的实验操作值校定，同时将CO2的冷却水浴温度设定值调整后，开启CO2的钢瓶，使气体和夹带剂进入料泵（CO2的流量为20 g/min、夹带剂为2 g/min），反应结束后，关闭泵并进行系统的降温；而后再从旋风分离器中的萃取物放至取样瓶中，进行称量，并用HPLC法进行分析和检测最终冬凌草甲素的质量分数。

4.2 注意事项

在超临界萃取的过程中，由于CO2的相对分子质量较大，因此溶解能力在一定程度上有所限制，为了有效提取极性成分，一般都需要加入夹带剂。夹带剂剂可以调节极性并能提高待提取物的溶解度，提高提取率。通常有水、甲醇、乙醇等，在本实验中除了选择了甲醇和95%乙醇，还加入了丙酮。其他的条件因数为40～80目，压力为20 Mpa。最后使用HPLC法进行分析提取，最终得出的结果含水95%乙醇与冬凌草甲素形成氢键的能力较强，考虑到水的存在和价格因素，95%的乙醇是夹带剂的首选。另外，研究所得，夹带剂中含水量的多少也会直接影响到提取率，提取率随着含水量的增加呈现先上升再先下降，在10%时能达到0.381%，因此用10%含水量的乙醇作为夹带剂是最佳选择。

5 关于超临界CO2萃取法的讨论

超临界CO2萃取法有着其自身独特的优势，首先，它所使用的CO2对于环境无害，不会像传统的乙醇提纯法一样对环境有污染，对人体也有危害，同时流程复杂，不适合大规模的生产。但乙醇提纯法所使用的器材简单，所需材料在实验室研究中也较易取得，因而目前在实验室中还有一定的应用价值。相比之下，超临界CO2萃取法步骤简单、周期短、在控制好最佳实验条件的情况下，所能提取到的冬凌草甲素纯度高，更适应目前环境及工业生产的要求。

[1] 许欣新,等.超临界CO_2萃取冬凌草甲素影响因素分析[J].中南林业科技大学学报,2009,29(6):156-159.

[2] 史晓东.冬凌草甲素提取工艺研究[J].健康必读旬刊,2013(3):389-390.

本文编辑：吴 卫

R284.2

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ISSN.2095-8242.2017.21.3972.01