流式细胞技术在医学检验中的应用研究进展

王建红

流式细胞技术在医学检验中的应用研究进展

王建红

近几年随着医学技术的不断发展，对细胞的研究技术也在不断的进步，流式细胞术是近几年适用范围逐渐加大的一种新技术，主要是对单细胞进行快速定量以及定性分析，这不仅对科学研究有着重要的意义，对于临床检验也有着极大的影响，本文主要是对流式细胞术的应用研究进展进行分析，以期为流式细胞术的发展和应用提供参考。

流式细胞技术；医学检验；应用研究；发展史

作者单位：261000 潍坊，潍坊市中医院

流式细胞术是近几年在临床医学中出现的一种新技术，其结合了多门学科，是一个综合性的技术，其中包括细胞生物学、物理学技术、激光技术等，尤其是随着医学技术的快速发展，其使用频率以及范围均有提升，流式细胞术主要是使细胞快速流动，在这种情况下对细胞或是细胞中的生物粒子等进行分析和分选的一种技术[1]。目前在遗传学、肿瘤学、生物细胞学中均有所应用，尤其是在医学检验中的应用更是频繁。

1 流式细胞技术

1.1 流式细胞术概述 流式细胞技术属于综合性的技术，临床中也可将其称为流式细胞分析，流式细胞术主要的应用方式，是通过对流式细胞仪的应用，对悬浮细胞进行测量，并根据对计算机、流体力学、电子等生物技术学科的应用，对细胞进行具体的分析，包括细胞的功能、特性等[2]。近几年随着流式细胞术的发展和进步，在医学检验中也逐渐被扩大应用范围，包括细胞生物检验、肿瘤检验、血液检验等方面。

1.2 流式细胞仪

1.2.1 流式细胞仪的发展史 在记载中，最早出现细胞计数的时间是20世纪30年代中期，Guclcer在1947年，通过对层流以及端流的原理研究后，研制出了最初的细胞计数仪器，烟雾微粒计数器[3]；而后在1953年，出现可对全血细胞计数器的描述，这也是后期流式细胞仪的雏形；第一台光电计数器1954年；1969年，医学界出现第一台使用荧光检测进行细胞计数仪器；而后在1972年，对细胞分选器的研制取得了成功；单克隆抗体技术在1975年被提出，为细胞研究中应用特异性免疫试剂提供了一定的基础[4-6]。随着社会的发展，光电技术也随之发展，而流式细胞仪的发展也有了一定的模块化。21世纪后，流式细胞仪已逐渐完善，成为细胞分析学以及医学检验的重要辅助工具。

1.2.2 流式细胞仪的工作原理 流式细胞仪的主要构成，分别为：①液体的流动系统；②激光系统以及光学系统；③光学系统；④信号处理系统以及信号分析系统；⑤细胞进行分类以及筛选的系统。

流式细胞仪的基本工作原理：主要是通过激光对鞘流中的染色细胞标志物进行测量，记录其中的荧光强度以及荧光宽度、散射光强度等参数。且由于进行荧光标记单克隆抗体的种类有所不同，进而对定量检测结果中的细胞抗原物质进行区分，也可以对细胞成分进行分析[7]。

1.3 流式细胞技术的分析方法

1.3.1 对流式细胞免疫表型进行分析 分子探针选择荧光素进行标记的单克隆抗体，使用流式细胞仪对细胞上的特异性抗原分子进行检测，就被称为流式细胞免疫的表型分析。流式免疫表型分析，对于细胞种类的分析速度较快，操作较简单。通过对细胞进行免疫荧光染色、或是多色免疫荧光细胞染色等方法对细胞进行检验，可以对单细胞的抗原进行鉴别，且鉴别细胞的时间较短，也逐渐成为医学检验中使用较为先进的细胞检验技术，应用范围也较广。

1.3.2 对血液淋巴细胞的免疫表型分析 对血液淋巴细胞进行免疫表型分析，沈继龙等[8,9]的研究中，主要的方法包括以下两种：①使用双色荧光对血液淋巴细胞进行免疫表型分析，通过对两种单克隆抗体使用两种荧光色素进行标记，并与全血中淋巴细胞膜的特异性抗原进行结合，对红细胞进行溶解后，将红细胞碎片以及未结合的抗体进行洗涤，对细胞进行固定，对淋巴细胞亚群的百分率进行计数；②使用多色荧光对血液淋巴细胞进行免疫表型分析，对单克隆体使用3种荧光素进行标记，使用CD45对血液中的淋巴细胞进行免疫表型分析，可以更为准确地对淋巴细胞亚群进行鉴别。

1.3.3 流式细胞内或细胞核内抗原分析 对流式细胞内或是细胞核内的抗原进行分析的主要使用方法是对细胞进行多色流式细胞免疫表型分析，临床上多应用在白血病、微量残留的白血病以及淋巴瘤分级检测等，一般多数是将白血病细胞内核抗原以及细胞膜的表面抗原进行同时检测，检测结束后对细胞进行多参数的分析[10]。而细胞内的抗原以及细胞膜表面的抗原进行检测的过程中，穿透处理是细胞膜和核膜的检测区别，在不破坏细胞结果的情况下，又可以使细胞膜和核膜上出现单克隆体自由通过的微孔，且靶抗原抗原性不变以及细胞光散均保持不变。

2 临床医学检验中的应用

2.1 细胞免疫功能监测 流式细胞术在临床上，其实质就是为临床医学检验的提供了一种对细胞亚群进行检测的便捷方法。崔晓鸣等[11,12]研究中提到，主要的操作过程为对淋巴细胞膜表面使用荧光抗原以及抗体检测技术进行抗原、各亚群等进行检测分析，并对淋巴细胞的各亚群百分比进行计算，进而评估人体细胞的免疫情况。尤其是对一些由于病毒性感染的疾病的预防、治疗和预后有着极重要的意义。

2.2 白血病免疫分型 多数正常的血细胞是由干细胞进行分化、发育以及成熟变为功能细胞的一个过程中出现细胞膜或是胞核抗原，其变化主要与血细胞的分化发育的各阶段有着极密切的关系，且与细胞系列的分化程度有着明显的相关特异性。也正是因此，这些血细胞的鉴别和分类的基础主要为抗原的表达。

3 总结

流式细胞术近几年被越来越扩大应用范围，尤其是在医学检验中的应用频率逐渐增加，例如通过对DNA含量的检测对肿瘤进行诊断等，包括对白血病免疫分型分析，且流式细胞术的检测方法具有分辨率较高、检测结果准确性高以及速度快等优点，逐渐成为推动医学快速发展的新兴技术之一。

1 陈鑫,王延伟.流式细胞技术在医学检验中的应用研究进展.医学综述,2012,22(12): 3822-3824.

2 张洋,苏玉虹,巴彩凤,等.流式细胞微球芯片捕获技术在医学领域中的应用价值.中国临床康复,2006,37(14): 129-131.

3 魏军,王立斌.流式细胞技术在临床医学检验中的应用.宁夏医学院学报,2003,2(5): 147-149.

4 沙薇,沙莉,夏一平,等.论临床医学检验中的流式细胞技术.中外医疗,2011,12(10): 186.

5 刘春梅,魏晓锋,高诚.液相芯片技术及其在蛋白质和核酸检测中的应用.实验动物与比较医学,2015,35(1): 76-81.

6 梅金平,周欣,姬文婕,等.流式细胞术与光学比浊法检测血小板聚集率的比较.临床检验杂志,2015,33(2): 81-84.

7 康志红.流式细胞技术在临床检验中的应用.求医问药: 学术版,2012,10(11): 861-862.

8 沈继龙,蒋秉坤.流式细胞术及其在医学检验中的应用.蚌埠医学院学报,1994,3(21): 216-218.

9 王斐,徐淑琴,崔巍,等.流式细胞术检测骨髓增生异常综合征免疫表型分析及临床应用前景.中华检验医学杂志,2016,39(5): 332-335.

10 郑小江,黄其文,李春晓.免疫组织化学法与流式细胞术在非小细胞肺癌骨髓微转移检测中的效果.检验医学与临床,2016,13(z2): 142-145.

11 崔晓鸣.流式细胞术应用于医学检验的研究进展.齐齐哈尔医学院学报,2016,18(18): 2336-2337.

12 胡晓蕾,周灵玲,赵志钢.单平台与双平台流式细胞术T细胞亚群绝对计数的比较.检验医学,2016,31(7): 593-598.

Advances in the application of flow cytometry in medical examination

Jianhong WANG
Traditional Chinese Medicine Hospital of Weifang,Weifang 261000,China

In recent years,with the development of medical technology,the research technology of cell has been progressing continuously.Flow cytometry is a new technology which has been gradually applied in recent years,mainly for the rapid quantitative and qualitative analysis of single-cell,which not only has important significance for scientific research,but also has a great influence on clinical examination.This article is the research progress of the application of the convection cell operation,in order to provide reference for the development and application of flow cytometry.

Flow cytometry; Medical examination; Applied research; Development history