枣仁颗粒镇静催眠作用及机制研究

崔施展，贾东升，谢晓亮，温春秀，李荣乔，刘灵娣

（河北省农林科学院经济作物研究所，药用植物研究中心，河北石家庄050051）

枣仁颗粒镇静催眠作用及机制研究

崔施展，贾东升，谢晓亮*，温春秀，李荣乔，刘灵娣

（河北省农林科学院经济作物研究所，药用植物研究中心，河北石家庄050051）

研究枣仁颗粒的镇静催眠作用及其作用机制。连续7 d不同剂量的枣仁颗粒灌胃（10、20、40mg/kg，以地西泮作为阳性对照，生理盐水作为空白对照，比较各组间小鼠自主活动次数，阈下剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠只数，阈上剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠潜伏期及睡眠时间，并比较小鼠脑组织中γ-氨基丁酸（GABA）含量。结果表明，中高剂量的枣仁颗粒均可显著减少小鼠自主活动次数，缩短活动时间（P＜0.05），中高剂量枣仁颗粒可显著提高阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的睡眠只数（P＜0.05），低中高剂量的枣仁颗粒均可缩短阈上剂量小鼠的睡眠潜伏期，延长睡眠时间（P＜0.05），小鼠脑组织中GABA含量升高。枣仁颗粒具有良好的镇静催眠作用，其作用机制可能为通过调节GABA含量发挥镇静催眠作用。

枣仁颗粒；镇静；催眠

当今社会，随着工作生活压力的增大，不良作息及生活习惯的养成，失眠或睡眠质量低下的发生率呈逐年上升趋势，失眠人群数量的逐年增加，给患者的生活及工作带来诸多不利的影响，引起工作及生活质量严重下降[1]。目前临床治疗失眠多采用以地西泮为代表的苯二氮类药物，此类药物极易造成患者的依赖性和成瘾性，研究发现，纯植物提取物在改善睡眠方面有着独特优势，具有安全可靠，无毒副作用，无成瘾性等特点，近年来逐渐受到人们的关注[2]。酸枣仁、远志、茯苓、党参均具有良好的镇静催眠作用[3-6]，在我国有着悠久的使用历史，相关报道较多，但对4种药材进行复方配伍后功效如何未见报道，本研究以“健脾益气”立法，选用上述4种药材，制备枣仁颗粒，通过对小鼠自主活动、协同戊巴比妥钠催眠作用及脑组织中γ-氨基丁酸（GABA）含量变化情况，验证其镇静催眠功效，以地西泮作为阳性对照，研究可能存在的作用机制，为研制具有改善睡眠，提高睡眠质量的保健类食品提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

ICP小鼠：雄性，体重20 g～25 g，北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物合格证号SCXK（京）2015-0017。

1.1.2 药品与试剂

酸枣仁、远志、茯苓、党参：购自安国中药材市场，经谢晓亮研究员鉴定为正品；戊巴比妥钠：美国Sigma；地西泮：华中药业股份有限公司；生理盐水：石家庄制药集团有限公司；水为高纯水。

1.1.3 仪器与设备

GBL-5型提取浓缩组、GLP-5型高速离心喷雾干燥机：无锡市旺盛机械厂；LGC100垂直送料干法制粒机：北京国药龙立科技有限公司；YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪：成都太盟科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 枣仁颗粒的制备

按照配方比例称取酸枣仁、远志、茯苓、党参，共煎回流提取2次，对提取液浓缩、过滤后加入适量麦芽糊精喷雾干燥，得喷雾干燥粉，取喷雾干燥粉适量，采用干法制粒即得枣仁颗粒。

1.2.2 枣仁颗粒对小鼠自主活动的影响

取健康小鼠60只，随机分为5组，空白组及阳性对照组给予生理盐水，实验组给予10、20、40mg/kg枣仁颗粒溶液，连续灌胃7 d，在末次灌胃前4 h，禁食禁水，在末次灌胃后阳性对照组给予4mg/kg地西泮，30min后置于自主活动测试仪中，适应5min后，记录小鼠在10min内的自主活动次数及活动时间，自主活动次数抑制率/%=（空白组活动次数-实验组活动次数）/空白组活动次数×100，自主活动时间抑制率/%=（空白组活动时间-实验组活动时间）/空白组活动时间×100。

1.2.3 对阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡只数影响

按照“1.2.2”项下方法，在末次灌胃30min后，腹腔注射阈下剂量戊巴比妥钠30mg/kg，以100%小鼠不入睡为最大剂量，在15min内小鼠翻正反射消失达1min为入睡标准，记录各组小鼠入睡只数。

1.2.4 对阈上剂量戊巴比妥钠小鼠入睡潜伏期及睡眠时间的影响

按照“1.2.2”项下方法，在末次灌胃30min后，腹腔注射阈上剂量戊巴比妥钠40mg/kg，以100%小鼠入睡为最小剂量，在15min内小鼠翻正反射消失达1min为入睡标准，记录各组小鼠入睡潜伏期及睡眠时间。

1.2.5 GABA含量变化情况

按照“1.2.2”项下方式，在末次灌胃30min后，将小鼠处死，迅速取出下丘脑，置于存有冰冻生理盐水匀浆仪中，5 000 r/min离心10min，取上清，按照试剂盒说明书，于450 nm处，测定GABA含量。

1.2.6 统计学方法

统计学处理选用统计学软件SPSS17.0，计数资料采用x2检验，以P＜0.05表示组间差异显著，P＜0.01表示组间差异极显著，P＞0.05表示组间无显著性差异。

2 结果

2.1 枣仁颗粒对小鼠自主活动的影响

实验结果表明，中高剂量枣仁颗粒可明显减少小鼠的自主活动次数，缩短小鼠自主活动时间，空白组小鼠活动次数为161次、阳性对照组为71次、枣仁颗粒分别为98、86、54次，空白组小鼠活动时间为583 s、阳性对照组为425 s、枣仁颗粒分别为494、328、274 s，中高剂量组与空白组比较差异显著（P＜0.05）、与阳性对照组无明显差异（P＞0.05），表明枣仁颗粒具有抑制小鼠自主活动作用，实验结果见表1。

表1 枣仁颗粒对小鼠自主活动的影响（x±s，n=12）Table1 Zizyphi spinosae semen granule on the autonomic activity of mice（x±s，n=12）

2.2 阈下剂量小鼠睡眠只数

实验结果表明，中高剂量枣仁颗粒可明显增加阈下剂量小鼠的睡眠只数，空白组无睡眠小鼠、地西泮组为7只、枣仁颗粒分别为5、7、8只，与空白组比较中高剂量组比较差异显著（P＜0.05）、与阳性对照组无明显差异（P＞0.05），表明枣仁颗粒具有增加阈下剂量戊巴比妥钠小鼠入睡只数，实验结果见表2。

表2 小鼠睡眠只数及入睡率（x±s，n=12）Table2 The number of sleep and sleep rate（x±s，n=12）

2.3 阈上剂量小鼠睡眠睡眠潜伏期及睡眠时间

实验结果表明，中高剂量枣仁颗粒可明显缩短小鼠睡眠潜伏期，延长小鼠睡眠只数，睡眠潜伏期：空白组为（5.2±1.3）min、地西泮组为（3.8±0.8）min、枣仁颗粒分别为（3.7±1.4）、（3.1±0.7）、（2.4±1.1）min，与空白组比较中高剂量组比较差异显著（P＜0.05）、与阳性对照组无明显差异（P＞0.05），睡眠时间：空白组为（32.8± 8.4）min、地西泮组为（42.7±11.7）min、枣仁颗粒分别为（41.3±12.8）、（49.2±10.2）、（51.7±11.6）min，与空白组比较高剂量组差异显著（P＜0.05）、与阳性对照组无明显差异（P＞0.05），表明枣仁颗粒可以缩短阈上剂量小鼠睡眠潜伏期，延长睡眠时间，实验结果见表3。

表3 小鼠睡眠潜伏期及睡眠时间（x±s，n=12）Table3 The latency of sleep and the sleep time of mice（x±s，n=12）

2.4 GABA含量变化情况

GABA含量变化情况见表4。

实验结果表明，中高剂量枣仁颗粒可明显缩短小鼠睡眠潜伏期，延长小鼠睡眠只数，睡眠潜伏期：空白组为12.4 ng/mL、地西泮组为21.4 ng/mL、枣仁颗粒分别为19.8、28.6、34.7 ng/mL，与空白组比较低中高剂量组比较差异显著（P＜0.05）、与阳性对照组比较，中高剂量存在显著差异（P＜0.05）。

3 讨论

枣仁颗粒由酸枣仁、远志、茯苓、党参4种中药配伍组成，药材经提取、浓缩、干燥、制粒而成，其中酸枣仁入心、肝经可养心阴益肝血而宁心安神；远志入心、肾经可开心气，通肾气，交通心肾，安神定志；茯苓入心、脾经，为健脾宁心之上品；党参可补气益脾，以运药力，上述药材合用符合“健脾益气而宁心”的中医养生理论。

表4 组间下丘脑GABA含量比较（x±s，n=12）Table4 Comparison of GABA content in hypothalamus between groups（x±s，n=12）

研究结果显示，枣仁颗粒可明显抑制小鼠自主活动，具有较好的镇静作用；枣仁颗粒可增加阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的睡眠只数，缩短阈上剂量戊巴比妥钠小鼠的睡眠潜伏期并延长睡眠时间，镇静催眠作用于枣仁颗粒剂量具有正相关性，中高剂量枣仁颗粒功效与阳性对照地西泮无明显差异，表明枣仁颗粒具有良好的镇静催眠作用。

GABA为一类抑制性神经递质，可通过与GABA受体（GABAA）结合调节神经元活性，降低神经细胞兴奋，发挥镇静催眠作用[7]。GABA为腹外侧视前区（vLPO）神经元细胞受到特异性刺激后分泌的，本研究发现枣仁颗粒可提高小鼠脑组织中GABA含量，可能是枣仁颗粒可刺激vLPO神经元细胞增加GABA的分泌[8-9]，同时酸枣仁皂苷A可特异性的调控GABAA的α1、α5mRNA的表达，增加GABAA含量[10]，使GABA与GABAA结合增加，进而起到安神作用。枣仁颗粒的镇静催眠作用可能是通过调节体内的GABA含量及GABAA表达活性来完成的。

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Sedative and Hypnotic Effect of Zizyphi spinosae semen Granule and Its Mechanism

CUI Shi-zhan，JIA Dong-sheng，XIE Xiao-liang*，WEN Chun-xiu，LI Rong-qiao，LIU Ling-di
（Institute of Cash Crops of Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Medicinal Plant Research Center，Shijiazhuang050051，Hebei，China）

To study the sedative and hypnotic effects of Zizyphi spinosae semen Granule and the potential mechanism.Administrated with Zizyphi spinosae semen Granule（10、20、40mg/kg）for7 consecutive days，diazepam as a positive control，saline as control，The number of spontaneous activities in mice，the number of sleep deprivation in pentobarbital sodium mice，the sleep latency and the sleep time in pentobarbital sodium mice were compared，and the content of γ-amino butyric acid（GABA）in brain tissue of mice was compared. The results showed that Zizyphi spinosae semen particle moderate and high doses could significantly reduce the number of independent activity in mice，shortening the activity time（P＜0.05），Zizyphi spinosae semen particle moderate and high doses could significantly raise the subthreshold dose of pentobarbital sodium in mice sleeping only a few（P＜0.05），low，moderate and high doses of Zizyphi spinosae semen particle could shorten sleep latency threshold dosages in mice，prolonged sleep time（P＜0.05），GABA in the brain tissue of mice was significantly increase.Zizyphi spinosae semen particle have a good sedative and hypnotic effects，the mechanism of action may be to play a sedative and hypnotic effect by adjusting the content of GABA.

Zizyphi spinosae semen granule；sedation；hypnosis

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.03.038

2016-03-09

河北省农林科学院青年基金项目（A2015050101）；河北太行山区特色功能保健食品的开发研究（11231005D）

崔施展（1989—），男（汉），本科，主要从事中药功能食品研究。

*通信作者：谢晓亮（1962—），男，研究员，博士，主要从事中药资源、中药加工研究。