布鲁氏菌病疫苗S2株免疫成年绵羊的抗体消长规律试验

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（1. 山西省大同市动物疫病预防控制中心，山西大同 037004；2. 山西省灵丘县动物疫病预防控制中心，山西灵丘 034400）

布鲁氏菌病疫苗S2株免疫成年绵羊的抗体消长规律试验

樊生平1，齐守军1，李连平1，韩小军1，曹春红2

（1. 山西省大同市动物疫病预防控制中心，山西大同 037004；2. 山西省灵丘县动物疫病预防控制中心，山西灵丘 034400）

[目的]探索成年绵羊经布鲁氏菌病疫苗S2株免疫后血清抗体的消长规律。[方法]采用“灌服100亿菌”“灌服200亿菌”和“肌注50亿菌”三种不同免疫方法，对试验羊进行布鲁氏菌病S2株疫苗的免疫接种。在接种前和接种后不同时间点分别采集试验羊血清样品，用虎红凝集试验（RBT）和试管凝集试验（SAT）进行血清抗体检测。[结果]肌注组抗体上升较快，于免疫后10天达到峰值，然后快速下降，90天后下降速度减缓，但在180天时RBT和SAT阳性率仍分别为63.2%和84.2%，SAT平均凝集效价为1:178.9。2个口服组均在免疫20天后抗体达到最高，以后下降，分别于90天和120天降到最低，然后有所回升并维持在低水平波动；至180天时，口服组的RBT阳性率均下降为0，SAT阳性率分别下降为40.9%和23.1%，SAT平均凝集效价分别降至1:40.9和1:18.2。[结论]对采用布鲁氏菌病S2株活疫苗口服免疫6个月以后的羊群，可用虎红凝集试验进行布鲁氏菌病检疫的初筛。

成年绵羊；布鲁氏菌病；S2株疫苗；免疫抗体；检测；检疫

布鲁氏菌病（Brucellosis，以下简称布病）是由布鲁氏菌属细菌引起的一种人兽共患传染病。其中，羊种布鲁氏菌侵入性最强[1]，主要侵害羊的生殖系统和关节等器官，使怀孕母羊流产，公羊发生睾丸炎等，是引起人感染的主要菌型，可使人发热、出汗，且长期不愈，给畜牧业发展和人类健康带来严重危害。我国已将布病列为二类动物疫病，并且列入《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020）》重点防控疫病名录。

羊布病控制的要点虽然是执行以检疫净化为主的综合防控措施，但对污染区的易感羊群也需采取疫苗接种措施，主要接种猪种布鲁氏菌S2株弱毒疫苗。该疫苗虽具有良好的免疫效果，但目前尚无法准确区分疫苗接种抗体和自然感染抗体，主要以疫苗免疫抗体存续时间短，自然感染抗体存续时间长来鉴别[2]。目前，有关S2株疫苗免疫绵羊的抗体存续时间的报道不尽相同。

本试验用S2株疫苗免疫成年健康母绵羊后，用虎红凝集试验（RBT）和试管凝集试验（SAT）分别进行血清抗体分时段检测，探索S2株疫苗免疫成年母绵羊后的抗体消长规律，为当地成年母绵羊的布病免疫和检疫，寻找切实可行的方法和途径，为基层兽医工作者开展布病防控提供参考。

1 材料与方法

1.1实验材料

1.1.1试验动物。舍饲的本地二代寒羊母羊100只，均为2～3胎龄，无流产病史，且经布病虎红凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）检测均为阴性；随机分成4组，每组25只，分别为口服免疫1组（QF1组）、口服免疫2组（QF2组）、肌注免疫组（JZ组）、对照组（DZ组）。试验羊均进行耳标标记，按正常生产进行饲养管理。

1.1.2试验用疫苗。布病活疫苗（S2株），购自金宇保灵生物药品有限公司，批号5393001。

1.1.3检测试剂：布病虎红凝集抗原（批号201507）、布病虎红凝集阴性血清（批号201505）、布病虎红凝集阳性血清（批号201502），均购自哈药集团生物疫苗有限公司；布病试管凝集试验抗原（批号20150702）、布病试管凝集试验阳性血清（批号20140701）和阴性血清（批号20140801），购于青岛易邦生物工程有限公司。各种检查试剂均在有效期内使用。

1.2试验方法

1.2.1免疫方法。将布病活疫苗（S2株）按说明书所标注的含菌数量，用生理盐水稀释。对口服组羊只（QF1、QF2组），用改装的连续注射器（初步雾化），按2 mL/只灌服；对注射组羊只（JZ组），用连续注射器按 1mL/只肌肉注射；对空白对照组羊只（DZ组），不免疫。

1.2.2血清学检测。在免疫前，以及免疫后的10、20、30、60、90、120、150和180天，分别对试验羊进行颈静脉采血，离心分离血清，分装后-20 ℃保存。在实验室，采用布病虎红凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）分别检测实验羊的血清抗体水平，具体操作与判定按照国家标准GB/T18646—2002进行。

2 结果

2.1对照组检测结果

对照组各时间点的布病虎红凝集试验结果和试管凝集试验结果均为阴性，试管凝集试验的平均凝集效价低于1:25。

2.2试验组检测结果

通过试验对比，JZ组抗体比QF组升得快，且JZ组血清抗体均高于QF组；另外，QF2组的血清抗体均高于QF1组。经过数据统计发现，试验羊血清抗体虎红凝集阳性率与试管凝集阳性率的变化趋势一致。

2.2.1试验组抗体阳性率检测结果。各试验组抗体阳性率均在免疫后20天到达高峰，具体统计结果见表1。

2.2.2试验组试管凝集效价检测结果。各试验组试管凝集平均凝集效价多数在免疫后20天到达高峰（JZ组除外），具体统计结果见表2。

表1 各试验组抗体阳性率统计 （单位：%）

表2 各试验组试管凝集试验平均凝集效价统计

3 讨论

从表1、表2可以看出，JZ组抗体上升较快，于10天时效价达最高，为1:2 358；QF1组和QF2组的抗体效价在免疫后20天时升至最高，分别为1:150和1:170，之后各组抗体凝集效价呈下降趋势，到90天后，JZ组下降缓慢，但QF2组和QF1组抗体略有回升，并维持在低位波动；至180天时，各试验组羊血清仍有凝集效价存在。蔡一非等[3]的研究表明，采用皮下注射布病（S2株）活疫苗50亿的绵羊，免疫7天后血清试管凝集试验的平均凝集效价达最高。高红霞[4]的研究发现，绵羊经布病S2株活疫苗免疫1个月后，其凝集抗体达到最高。田素梅等[5]的检测结果显示，绵羊免疫布病（S2株）活疫苗后15天，其平均凝集抗体效价达到峰值，到9个月时仍可测到凝集抗体。

QF1组试验羊布病虎红凝集阳性率最高，为26.1%，并于免疫后90天下降到5%以下，在150天以后转为阴性。QF2组试验羊虎红凝集阳性率最高，为42.9%，于免疫后150天降到5%以下，免疫180天后的虎红平板凝集转为阴性。这进一步验证了毛开荣[6]的观点：用布病S2株活疫苗口服免疫羊，6个月后，其抗体水平已降到诊断阳性标准以下。以上结果说明对采用布病S2株活疫苗口服免疫6个月以后的羊群，可用布病虎红凝集试验进行布病检疫的初筛。

JZ组试验羊血清抗体远高于QF1组和QF2组，其试管凝集试验最高血清凝集效价达1:3 200（本试验设置的最高值），到免疫180天后，其试管凝集平均凝集效价仍为1:178.9，虎红平板凝集和试管凝集阳性率仍分别达63.2%和84.2%。但在肌注免疫后，该试验组羊只有3只发生流产（该试验组共有多少只怀孕羊，未作统计），与疫苗说明书相符，即注射免疫只能在非怀孕羊只上进行。同时，为了布病检疫、净化的方便易行，对区域性的布病免疫，建议采用口服免疫。

从QF1组和QF2组血清抗体检测结果看，在试验观察期（180天）的大多数时点中，QF2组的血清抗体均高于QF1组。申捷等[2]研究表明，绵羊口服100亿和200亿两种免疫剂量的抗体阳性差异不大。本试验检测结果与之稍有差异，但从近年来实践经验看，QF1组的免疫方法完全可以预防羊只布病的发生和流行，并从节约成本来说，大规模的绵羊布病免疫采用口服100亿菌/只的方法切实可行。

各试验组羊血清试管凝集抗体阳性率均高于同时点的虎红凝集阳性率（表1），QF1组和QF2组试管凝集阳性率高时分别可达60.9%和77.6%，即使到免疫后180天，还分别为23.1%和40.9%，而JZ组到免疫后180天时，其阳性率仍高达84.2%。本研究的虎红凝集和试管凝集阳性率结果与陈嘉章等[7]的“对羊阳性检出率以平板法最高，试管凝集法次之，虎红凝集法最低”和罗建军等[8]的“试管凝集反应阳性率均高于虎红平板试验”研究结果相一致，所以针对免疫羊群的布病检疫，不建议采用试管凝集试验的方法。

从各试验组羊血清抗体阳性率结果（表1）可以看出，试验羊血清抗体虎红凝集阳性率与试管凝集阳性率的变化趋势基本一致，说明两者皆以检测大分子的IgM类抗体为主[3]。

据此，区域性的绵羊布病防控推荐：布疫病苗（S2株）100亿菌/只灌服免疫；羊群布病检疫于在免疫5～6个月后进行，先用虎红凝集试验初筛，再用竞争酶联免疫吸附试验（cELISA）复检。

[1]克劳斯·尼尔森，于伟玲.布鲁氏菌病诊疗过程中被忽视的要点[J]. 兽医导刊，2011（11）：38-39.

[2]申捷，宝音达来，马立峰，等. 布鲁氏菌病疫苗（S2株）免疫羊抗体消长规律的研究[J].中国动物检疫，2015，32（1）：68-73.

[3]蔡一非，赵智香，钟旗，等. 不同的血清学方法对布病疫苗免疫绵羊抗体检测结果的比较研究[J]. 中国动物检疫，2008，25（12）：31-33.

[4]高红霞. 不同血清学方法检测牛、羊布鲁氏菌疫苗免疫绵羊抗体消长规律的比较研究[D]. 哈尔滨：东北农业大学，2010.

[5]田素梅，周红菊，温都苏，等. 绵羊抗布鲁氏菌特异性IgG、IgA和IgM抗体的观察[J].中国人兽共患病杂志，1993，9（3）：53.

[6]毛开荣. 动物布氏菌病的诊断[J]. 兽医导刊，2011（9）：50-52.

[7]陈嘉章，倪富美. 平板凝集反应、试管凝集反应活虎红平板试验对牛羊布氏杆菌病阳性检出率的对比试验[J]. 中国兽医杂志，1981（10）：31.

[8]罗建军，肖峰，苏贵军，等. 青海都兰野生反刍兽和啮齿动物布鲁菌病血清学检查[J]. 中国兽医杂志，2016（3）：97-98.

（责任编辑：朱迪国）

Dynamical Changes of Antibodies after Immunization with Brucellosis Vaccine of S2 Strain in Adult Sheep

Fan Shengping1，Qi Shoujun1，Li Lianping1，Han Xiaojun1，Cao Chunhong2
（1. Datong Animal Disease Prevention and Control Center of Shanxi Province，Datong，Shanxi 037004；2. Lingqiu Animal Disease Prevention and Control Center of Shanxi Province，Lingqiu， Shanxi 034400）

[Objective]In order to explore the dynamical changes of antibodies after being immunized with brucellosis vaccine of S2 strain in adult sheep.[Methods]Vaccination experiments were conducted by three different methods：perfusion of 10 billion bacteria，perfusion of 20 billion bacteria，and intramuscular injection of 5 billion bacteria. Serum samples were collected in different time-points before and after vaccination，the antibodies were detected by Rose Bengal plate agglutination test（RBT）and tube agglutination test（SAT）. [Results]The antibody level after intramuscular injection rose faster than the rest，it rose up to the highest level on 10th day after immunization，then declined rapidly and descent speed became slow after 90 days. The positive rates of RBT and SAT were 63.2% and 84.2% on 180thday after immunization，and the average agglutination titer was 1:178.9. On the other side，the antibodies of oral groups reached peak on 20th day after immunization，then decreased，the minimum level appeared on the 90th and 180th day，respectively. Then they increased slightly and waved at the low level. On the 180th day，the positive rates of both two oral groups detected by RBT fell to 0%，while that by SAT dropped to 40.9% and 23.1%，respectively. [Conclusion]The 6 months after oral immunization with brucellosis live vaccine of S2 strain in sheep fl ock，RBT could be used in preliminary screening of brucellosis inspection and quarantine.

adult sheep；brucellosis；vaccine of S2 strain；immune antibodies；detection；inspection

S851.3

B

1005-944X（2017）02-0088-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.02.026