金华地区Ki—67在乳腺癌中的表达及意义

楼立新　林恒军　王荣飞

[摘要] 目的 探讨金华地区Ki-67在乳腺癌组织中的表达水平、与乳腺癌亚型的关系及其对患者行改良乳腺癌根治术后局部复发、远处转移的预测价值。 方法 选取我院行改良乳腺癌根治术治疗的乳腺癌患者134例，术后均随访至少3年。检测其乳腺癌组织Ki-67、ER、PR及Her-2表达水平和癌旁组织Ki-67表达水平，分析乳腺癌Ki-67蛋白表达水平及其与乳腺癌亚型的关系、乳腺癌Ki-67蛋白表达水平与局部复发和远处转移的关系及其预测局部复发和远处转移等预后情况的价值。 结果 乳腺癌患者乳腺癌组织Ki-67蛋白阳性表达率高于癌旁组织（P<0.05）。Ki-67在金华地区乳腺癌患者不同亚型的蛋白阳性表达率分别为Luminal A型53.57%、Luminal B型77.27%、Her-2阳性型94.29%、三阴型96.30%（P<0.05）。Ki-67在金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织蛋白表达水平与乳腺癌亚型密切相关。Ki-67阳性表达患者的局部复发率及远处转移率均高于阴性表达患者（P<0.05）。Ki-67在金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织蛋白表达水平与局部复发和远处转移均密切相关，且其预测局部复发和远处转移的价值良好。结论 金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织Ki-67蛋白表达与乳腺癌亚型和局部复发和远处转移等预后情况均相关，且对预后情况的预测价值良好，可作为乳腺癌亚型和预后评估的参考指标。

[关键词] 乳腺癌；免疫组化法；Ki-67；乳腺癌亚型；复发；转移

[中图分類号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）31-0009-05

乳腺癌在全球女性恶性肿瘤发病中居首位，近年来乳腺癌的发病随着生活方式、饮食结构等的改变而不断增加，且呈现年轻化趋势[1-3]。尽管目前临床对乳腺癌的早期诊断和治疗手段有长足进展，但患者的预后情况仍较差，乳腺癌仍是女性死亡的重要原因之一[4，5]。乳腺癌的发生受到多个因子的影响，近年来Ki-67逐渐成为一个新的研究热点，且有研究提示其与乳腺癌的发生发展密切相关[6-8]。因此，Ki-67亦可能与浙江金华地区乳腺癌的发生发展相关，可能用于病情和预后评估从而指导干预。然而目前关于金华地区Ki-67在乳腺癌中的表达和意义的分析研究仍较少。因此，本研究采用免疫组化法检测金华地区乳腺癌患者Ki-67在乳腺癌组织中的表达水平及其与乳腺癌亚型及复发、转移等预后情况的关系，旨在为该地区乳腺癌的预后评估及治疗干预提供指导从而改善预后情况，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年4月～2013年8月金华市人民医院行改良乳腺癌根治术治疗且病理确诊的乳腺癌患者134例。纳入标准：所有患者均经术后病理学检查确诊，性别均为女性，年龄不限，志愿入组。排除标准：排除入选时即已合并远处转移、治疗期间死亡、中途退出研究等患者。实验经我院伦理委员会审核批准，且所有入选的患者及其家属均已签署知情同意书。134例乳腺癌患者中年龄最小30岁，最大82岁，平均（51.83±9.88）岁，其中淋巴结转移16例，病变部位在左侧66例，病变部位在右侧68例；病理分型：浸润性导管癌67例，浸润性小叶癌58例，其他病理类型9例。

1.2方法

采用免疫组织化学技术SP染色法检测乳腺癌组织中Ki-67、雌激素受体（estrogen receptor，ER）、孕激素受体（progesterone receptor，PR）和人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factorreceptor-2，Her-2）的表达情况及癌旁组织中Ki-67表达水平，检测采用的相关试剂盒均由武汉博士德生物工程有限公司提供。将手术切除所得的乳腺癌组织及癌旁组织进行甲醛固定并常规行石蜡包埋，采用切片机将组织切成厚度约0.4 μm的连续切片。由同一临床检验经验丰富的医师采用免疫组化SP法对乳腺癌组织的Ki-67、ER、PR及Her-2的表达情况及癌旁组织中Ki-67表达水平进行检测，每张病理切片均随机选择10个高倍视野，以100个肿瘤细胞作为观察对象，进行蛋白表达情况的评价。

1.3观察指标

采用免疫组化检测患者乳腺癌组织Ki-67、ER、PR及Her-2表达水平和癌旁组织Ki-67表达水平，分析患者乳腺癌亚型，并比较乳腺癌不同亚型患者乳腺癌组织Ki-67蛋白表达水平。术后均随访至少3年，统计患者随访期间局部复发率和远处转移率。

1.4 判断标准[9]

Ki-67、ER、PR染色定位于细胞核，Her-2染色定位于细胞膜，以细胞膜或细胞核存在棕黄色颗粒为阳性标准，观察乳腺癌组织各切片中Ki-67、ER、PR、Her-2阳性表达情况及癌旁组织中Ki-67蛋白阳性表达情况。乳腺癌亚型判断标准[10]：Luminal A型：ER（+）或PR（+）且Her-2（-）；Luminal B型：ER（+）或PR（+）且Her-2（+）；Her-2阳性型： ER（-），PR（-）且Her-2（+）；三阴型：ER（-），PR（-）且Her-2（-）。

1.5 统计学方法

采用SPSS14.0统计学软件进行处理，计数资料采用χ2检验，采用Logistic多因素分析法分析乳腺癌Ki-67蛋白表达水平及其与乳腺癌亚型、局部复发和远处转移的关系，并采用受试者操作特性曲线（ROC）分析乳腺癌Ki-67蛋白表达水平预测局部复发和远处转移等预后情况的价值，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1乳腺癌组织和癌旁组织Ki-67蛋白表达情况比较

134例乳腺癌患者乳腺癌组织Ki-67蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2乳腺癌患者乳腺癌亚型分析

金华地区乳腺癌患者乳腺癌亚型比例分别为Luminal A型20.90%、Luminal B型32.83%、Her-2阳性型26.12%、三阴型20.15%，见表2。

2.3乳腺癌不同亚型患者乳腺癌组织Ki-67蛋白表达水平比较

Ki-67在金华地区乳腺癌患者不同亚型的蛋白阳性表达率分别为Luminal A型53.57%、Luminal B型77.27%、Her-2阳性型94.29%、三阴型96.30%，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

2.4乳腺癌组织Ki-67蛋白表达水平与乳腺癌亚型的关系分析

Logistic多因素分析结果显示，Ki-67在金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织蛋白表达水平与乳腺癌亚型密切相关（P<0.05）。见表4。

2.5乳腺癌患者随访期间局部复发率和远处转移率预后情况分析

134例乳腺癌患者随访3年期间局部复发和远处转移的患者例数分别为45例和38例，局部复发率和远处转移率分别为33.58%（45/134）和28.36%（38/134），提示局部复发率和远处转移率高，患者预后情况差，急需改善。

2.6 乳腺癌组织中Ki-67阳性表达和阴性表达患者的预后比较

Ki-67阳性表达患者的局部复发率及远处转移率均高于阴性表达患者，差异有统计学意义（P<0.05），见表 5。

2.7乳腺癌组织Ki-67蛋白表达水平与预后的关系

Logistic多因素分析结果显示Ki-67在金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织蛋白表达水平与局部复发密切相关，其β、SE、Wald、P、OR和95%CI分别为1.535、0.342、4.488、0.000、9.475和2.268～9.735。Ki-67在金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织蛋白表达水平与远处转移亦密切相关，其β、SE、Wald、P、OR和95%CI分别为1.506、0.314、4.796、0.000、9.278和2.205～9.563。

2.8 金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织Ki-67蛋白表达预测其预后的价值分析

进一步ROC曲线分析结果显示，金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织Ki-67蛋白阳性表达预测局部复发和远处转移的曲线下面积、敏感度、特异度、准确性、阳性预测值、阴性预测值等均较高，金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织Ki-67蛋白阳性表达预测局部复发和远处转移的价值均良好，见表6及图1、2。

3讨论

近年来，随着生活水平的提高、饮食结构改变及环境变化增加各类恶性肿瘤的发生，其中女性常见恶性肿瘤之一的乳腺癌的发病亦呈逐年上升趋势。乳腺癌是女性发病率首位的恶性肿瘤，其在金华地区的发病率高，可明显影响女性患者的健康，甚至直接威胁着女性患者的生命安全[11]。因此，对乳腺癌早期进行疾病确诊，并根据患者的组织分型、肿瘤直径等确定治疗方案，有利于预后的改善。乳腺癌的早期诊治技术目前已取得了较大进展，然而患者术后复发、远处转移甚至死亡等不良预后情况仍时有发生[12-14]。本研究分析134例行乳腺癌根治术治疗的乳腺癌患者随访3年的局部复发和远处转移发生情况，本研究结果显示，乳腺癌患者随访期间局部复发率和远处转移率分别为33.58%和28.36%，其局部复发率和转移率均较高，极易导致死亡等不良预后情况，乳腺癌患者的预后情况差。因此，对乳腺癌患者的病情和预后进行评估从而及时采取更有效的治疗措施进行相关治疗具有重要意义。

现阶段，分子生物学在肿瘤诊治中得到广泛应用，对确定治疗靶点具有较高的临床价值。乳腺癌的发生受到多个基因的调控，其中雌激素受体（estrogen receptor，ER）、孕激素受体（progesterone receptor，PR）和人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2，Her-2）等在乳腺癌发生发展中的作用亦得到多项研究的认可，并可根据乳腺癌蛋白表达水平确定乳腺癌分型从而指导治疗[15-17]。近年来Ki-67逐渐成为一个新的研究热点，是目前较为肯定的核增殖标记物，由于其半衰期短，故已成為检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标[18-22]。因此对Ki-67在乳腺癌组织中的表达水平和意义进行研究可在分子学水平上加深对乳腺癌生物学行为的认识，对预测乳腺癌临床治疗的疗效、判断乳腺癌患者的预后、优化个体化治疗方案等均有重要意义。因此，本研究对134例采用乳腺癌根治术治疗患者的乳腺癌组织Ki-67、ER、PR及Her-2表达水平进行检测分析，根据ER、PR及Her-2表达确定乳腺癌分型，并分析Ki-67乳腺癌组织表达水平与乳腺癌亚型的关系，结果显示，乳腺癌组织中的Ki-67蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织，提示Ki-67与乳腺癌的发生发展相关，与前文的假设及Ignatiadis M等[23]的研究结果一致。Ki-67的乳腺癌组织表达水平在金华地区三阴型乳腺癌中的阳性表达率最高，其次为Her-2 阳性型乳腺癌，再次为Luminal B型乳腺癌，在Luminal A型乳腺癌中的阳性表达率最低，提示金华地区乳腺癌组织Ki-67表达水平与乳腺癌分型可能相关。进一步的Logistic多因素分析结果显示，Ki-67在金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织中的蛋白表达水平与乳腺癌亚型密切相关，对乳腺癌组织Ki-67蛋白表达进行检测有助于了解乳腺癌亚型，指导临床对乳腺癌进行更准确有效的治疗，从而有助于疗效和预后的改善。

本研究亦比较金华地区不同乳腺癌组织Ki-67蛋白表达情况患者的局部复发率和远处转移率，发现金华地区Ki-67阳性表达的患者的局部复发率及远处转移率均高于阴性表达患者，提示金华地区乳腺癌组织Ki-67蛋白表达情况与局部复发和远处转移相关，进一步的Logistic多因素分析结果显示Ki-67在金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织蛋白表达水平与局部复发和远处转移均密切相关，乳腺癌组织Ki-67蛋白表达情况可反映预后情况，可用于局部复发、远处转移等预后情况的评估。本研究进一步采用ROC曲线分析金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织Ki-67蛋白阳性表达预测局部复发和远处转移等预后情况的价值。在ROC曲线下面积>0.5的情况时曲线下面积越接近于1则提示评估价值越好，而本研究中金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织Ki-67蛋白表达预测局部复发、远处转移等预后的曲线下面积均接近0.9，金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织Ki-67蛋白阳性表达预测局部复发和远处转移的价值良好。因此，对金华地区乳腺癌患者乳腺癌组织中Ki-67蛋白表达情况进行检测有助于早期预知不良预后风险，从而尽早采取积极措施改进治疗方案，提高疗效和改善预后。而金华地区Ki-67蛋白表达情况与乳腺癌分型及预后等均相关，提示Ki-67可能成为乳腺癌基因治疗的靶基因，对Ki-67进行靶向抑制可能有助于乳腺癌疗效和预后的改善，对Ki-67进行靶向抑制治疗乳腺癌的效果有待进一步的实验研究验证。

综上所述，金华地区乳腺癌组织Ki-67蛋白阳性表达高、与乳腺癌亚型及局部复发和远处转移等预后情况均相关，且其对预后情况的预测价值良好。因此，金华地区乳腺癌组织Ki-67蛋白表达情况的检测有助于确定其乳腺癌亚型和预后的早期评估，为其临床治疗提供依据，从而有利于疗效和预后的改善。

[参考文献]

[1] 罗湘涛，胡欣，胡巧英，等. 浙江省肿瘤医院2008～2012年住院疾病谱和地区分布分析[J]. 中国肿瘤，2013，22（12）：949-952.

[2] García-Martínez E，Gil GL，Benito AC，et al. Tumor-infiltrating immune cell profiles and their change after neoadjuvant chemotherapy predict response and prognosis of breast cancer[J]. Breast Cancer Res，2014，16（6）：488.

[3] 徐强音，陈翔，陈燕玉，等. 新辅助化疗联合保乳术治疗Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌的疗效[J]. 广东医学，2013，34（4）：611-613.

[4] Cockburn JG，Hallett RM，Gillgrass AE，et al. The effects of lymph node status on predicting outcome in ER+/HER2-tamoxifen treated breast cancer patients using gene signatures[J]. BMC Cancer，2016，16（1）：555.

[5] 郑亚军，谢忠士. Ⅲ期可手术乳腺癌患者46例新辅助化疗5年存活率[J]. 中国老年学杂志，2012，32（12）：2643.

[6] Dmitrenko AP. Lateral differences in Ki-67 in breast cancer[J]. Mol Clin Oncol，2016，4（6）：1041-1044.

[7] 魏晓丽，张玉，刘敏丽，等. 乳腺癌组织中Survivin、Ki67的表达变化及意义[J]. 山东医药，2013，53（3）：12-14.

[8] 谢静静，苏永辉，姜永冬，等. Ki-67在三阴性乳腺癌中的临床病理意义[J]. 国际免疫学杂志，2016，39（3）：218-221.

[9] 胡俊艳，赵春英. Ki-67在乳腺癌组织中的表达与ER、CerbB-2的相关性研究[J]. 中国医药导刊，2015，17（4）：334-336.

[10] 连臻强，何洁华，王曦，等. 乳腺癌不同分子亚型的临床特点和生存分析[J]. 中华乳腺病杂志，2009，3（20）：139-146.

[11] 邵红星，朱匡纪，蔡祖华，等. 2003～2005年金华市婺城区城市居民恶性肿瘤监测分析[J]. 疾病监测，2006，21（10）：544-547.

[12] 张振，冯云，曹效忠，等. 不同分子分型乳腺癌行保乳乳癌根治术的预后分析[J]. 中外医疗，2015，34（6）：19-21.

[13] Pimentel C，Becquet M，Lavoue V，et al. Ovarian metastases from breast cancer：A series of 28 cases[J]. Anticancer Res，2016，36（8）：4195-4200.

[14] Kos Z，Dabbs DJ. Biomarker assessment and molecular testing for prognostication in breast cancer[J]. Histopathology，2016，68（1）：70-85.

[15] 王冰濤，尚宏清，李伟，等. ER、PR、p53表达与乳腺癌淋巴结转移相关研究和临床意义[J]. 中国医药导刊，2014， 16（2）：231-234.

[16] Li MH，Hou CL，Wang C，et al. HER-2，ER，PR status concordance in primary breast cancer and corresponding metastatic lesion in lymph node in Chinese women[J]. Pathol Res Pract，2016，212（4）：252-257.

[17] 李文婷，王莹，张银华，等. 年轻女性乳腺癌中ER、PR、HER-2和Ki67的表达与临床病理意义[J]. 重庆医科大学学报，2012，37（9）：783-786.

[18] 王宝娜，王翔，王靖，等. Ki67在乳腺癌中的表达及临床意义[J]. 中华肿瘤杂志，2014，36（4）：273-275.

[19] 李帆. ER、PR、HER-2、Ki67在乳腺癌中的表达及临床意义[J]. 医学综述，2014，20（13）：2361-2363.

[20] 杨丽丽，梁莉萍，赵峰，等. ER、PR、HER-2、Ki67、Nm23、P53在多中心性乳腺癌中的表达及临床意义[J]. 重庆医科大学学报，2012，37（11）：964-967.

[21] 王玉楼，张英艳，孙玉琢，等. 乳腺癌患者组织中EphA4和Ki67的表达及其临床意义[J]. 中国老年学杂志，2016， 36（13）：3197-3198.

[22] 董欢，林燕苹，应学翔，等. Ki67、增殖细胞核抗原在不同分子分型乳腺癌组织中的表达及意义[J]. 中华乳腺病杂志（电子版），2013，7（2）：15-20.

[23] Ignatiadis M，Azim HA Jr，Desmedt C，et al. The genomic grade assay compared with Ki67 to determine risk of distant breast cancer recurrence[J]. JAMA Oncol，2016，2（2）：217-224.

（收稿日期：2016-09-02）