Wnt-β-catenin信号分子在急性肾损伤大鼠肾组织中的表达及意义

周凌辉 黄 悦 张燕林

(厦门大学附属第一医院肾脏内科,厦门361003)

Wnt-β-catenin信号分子在急性肾损伤大鼠肾组织中的表达及意义

周凌辉 黄 悦①张燕林

(厦门大学附属第一医院肾脏内科,厦门361003)

目的：探讨Wnt-β-catenin信号分子在急性肾损伤大鼠肾组织中的表达。方法：将48只大鼠按照随机数字表法分为正常对照组(Control组)、假手术组(Sham组)和缺血再灌注组(IRI组)，每组16只；Control组正常喂养，IRI组建立大鼠缺血再灌注损伤模型，Sham组背侧切开后直接将伤口关闭。分别于术后第1天、第3天、第5天、第7天处死4只大鼠，观察三组大鼠肾脏组织病理学改变，并检测三组大鼠血肌酐、尿素氮水平；采用免疫印迹法检测三组大鼠肾脏组织Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表达，实时定量RT-PCR检测肾脏组织Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA表达。结果：Control组、Sham组各时段肾脏损伤评分、血肌酐比较差异无统计学意义(P>0.05)；IRI组术后第1天至第7天肾脏损伤评分、血肌酐、尿素氮先上升后逐渐降低，其中术后第3天肾脏损伤评分、肌酐、尿素氮最高；IRI组术后1、3、5、7 d肾脏损伤评分、血肌酐、尿素氮显著高于Control组、Sham组(P<0.05)。Control组、Sham组各时段Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)；IRI group术后 Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白逐渐增加，至术后第5天达表达高峰，随后逐渐降低；IRI组术后1、3、5、7 d Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白均显著高于Control组、Sham组(P<0.05)；Control组、Sham组各时段Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)；IRI group术后 Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA显著增加，至术后第3天达表达高峰，随后逐渐降低；IRI组术后1、3、5、7 d Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA均显著高于Control组、Sham组(P<0.05)。结论：Wnt-β-catenin信号分子在急性肾损伤组织中表达显著增加，激活的Wnt-β-catenin信号通路参与了肾脏组织的修复过程。

Wnt-β-catenin信号分子；急性肾损伤；再灌注损伤；信号通路

Wnt蛋白家族属于信号蛋白，在组织的形成和修复中发挥着重要作用[1,2]。目前研究证实Wnt信号异常与多种疾病的发生、发展密切相关[3]。Wnt蛋白能够与跨膜受体相结合，穿过细胞质膜并调节一系列下游信号分子，导致β-catenin去磷酸化[4]。去磷酸化的β-catenin趋于稳定，当进入细胞核内后可与TCF/LEF结合，并激活Wnt相应靶基因的表达。在胚胎肾时期存在大量Wnt家族成员表达，包括Wnt4、6、7b、11等，然而Wnt4是肾脏前体细胞唯一表达的Wnt蛋白家族成员[5]，并参与调节肾脏的发育过程。Gnemmi等[6]报道称，将急性肾损伤小鼠Wnt4基因敲除后，小鼠肾小管上皮细胞修复明显延迟，提示Wnt4可能参与了肾小管上皮细胞的再生修复。虽然既有研究已经证实Wnt-β-catenin信号途径与某些肾脏疾病发生有关，如肾脏肿瘤、免疫性肾炎等[7,8]，但是其是否参与了急性肾损伤的调节以及相关调节机制依然不清楚。鉴于此，本研究急性肾损伤大鼠肾脏组织Wnt-β-catenin信号分子及其主要受体低密度脂蛋白受体相关蛋白6(Lrp6)表达水平，探讨Wnt-β-catenin信号通路对急性肾损伤大鼠肾组织修复的机制，现将研究成果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物来源 48只SD级健康雄性大鼠均购自本院动物实验中心(动物合格证号：SCXK-2015-108)，8～12周龄，体质量200～240 g。大鼠饲养环境定期消毒，所有饲料、动物饮水以及相关器械定期灭菌消毒；控制环境室温18～22℃，相对湿度20%。

1.1.2 实验仪器与试剂 主要仪器：Allegra X-30高速冷冻离心机、AU5800全自动生化分析仪(贝克曼库尔特公司)，电泳槽、电泳仪(北京六一仪器厂)，紫外分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)，倒置显微镜(日本尼康公司)，GeneAmp 9700 PCR仪(美国ABI公司)，Odyssey成像系统及配套分析软件(美国LI-COR公司)。

1.1.3 主要试剂 兔抗鼠Wnt4多克隆抗体、兔抗鼠Lrp6多克隆抗体、小鼠抗人β-catenin单克隆抗体、β-肌动蛋白(β-actin)抗体均购自武汉博士德生物工程有限公司，聚偏二氟乙烯膜(PVDF)、3,3′-二氨基联苯胺(DAB)、Trizol试剂盒购自美国Invitrogen公司，辣根过氧化物酶标记抗兔二抗、RNA提取试剂Trizol、逆转录试剂盒、免疫组化试剂盒购自Sigma公司。

1.2 实验方法

1.2.1 分组 48只大鼠按照随机数字表法分为正常对照组(Control组)、假手术组(Sham组)和缺血再灌注组(IRI组)，每组16只。Control组正常喂养，不做任何处理；IRI组参考Lin等[9]报道建立大鼠单侧肾脏缺血再灌注动物模型：实验大鼠于模型制作前24 h禁食，自由饮食；腹腔注射3%戊巴比妥钠(1 ml/kg)麻醉大鼠，将麻醉后的大鼠固定于动物手术台上，备皮、消毒、铺巾，在完全无菌条件下于左背侧行纵切口，切口长度约1.5～2 cm，打开腹腔后寻找肾脏组织；将左侧肾蒂完全游离，采用无创动脉夹将肾动脉血管夹闭30 min，然后再将动脉夹放开；待肾脏重新恢复灌注后将腹腔关闭，建立大鼠IRI模型。Sham组：仅将大鼠左背侧行纵切口，然后直接将伤口关闭。分别于术后第1天、第3天、第5天、第7天分别处死4只大鼠，收集大鼠主静脉血，置于抗凝管中，-20℃保存待检。再收集大鼠双肾组织，将肾包膜完全剥离，矢状纵行将肾脏剖开，其中一部分用丙酮固定，做冰冻切片，置于-80℃冰箱保存；另外一部分用5%多聚甲醛固定，液氮保存。

1.2.2 肾脏组织病理检查 取多聚甲醛固定的肾脏组织，制成厚度约为2 μm的连续切片，再行过碘酸-Schiff染色(PAS)，以观察肾脏组织病理变化。光学显微镜下对肾脏切片的外髓质和皮质进行拍照(每组各10张)，按照Supavekin等[10]报道的方法，采用盲法对每组图片进行病理评分：将每张图片分为256个小方格，计算上皮坏死细胞、脱落的碎屑、小管上皮扁平所占的方格数，20张照片所计算出的平均值即为肾脏损伤百分比。

1.2.3 血肌酐检测 分别取三组大鼠各时段主静脉血3 ml，置于离心管中，以12 000 r/min(离心半径8 cm)离心10 min，抽取上清液10 μl置于全自动生化仪中检查血肌酐、尿素氮水平。

1.2.4 免疫印迹法检测肾脏组织Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表达 将肾脏组织剪碎后置于冰上充分研磨，再加入蛋白裂解液冰浴中静置30 min，再将产物于4℃、12 000 r/min离心15 min，取上清液置于冰浴上10 min，即获得总蛋白；BCA法检测蛋白浓度。取约50 μg总蛋白进行SDS-PAGE电泳分离蛋白，半干法将电泳段转移至PVDF膜上；电转后取出PVDF膜，37℃下5%脱脂牛奶封闭2 h，PBS冲洗3次，分别加入1∶500稀释的兔抗鼠Wnt4多克隆抗体、1∶1 000稀释的兔抗鼠Lrp6多克隆抗体和1∶1 000稀释的小鼠抗人β-catenin单克隆抗体，室温孵育1 h，4℃过夜；PBS冲洗3次；再加入1∶5 000稀释的辣根过氧化物酶标记抗兔二抗，室温下振摇1 h，PBS冲洗3次。Odyssey成像系统分析条带灰度值，以目的条带与β-actin条带灰度值之比作为目的蛋白相对表对量。

1.2.5 实时定量RT-PCR检测肾脏组织Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA表达 按照Trizol试剂盒说明书提取肾脏组织总RNA，根据标准步骤逆转录成cDNA；将得到的cDNA采用实时定量RT-PCR进行扩增，引物委托上海Invitrogen公司设计合成，各引物序列见表1。PCR反应体系：双蒸水13 μl、缓冲液2.5 μl、dNTP 1 μl、上下游引物各0.5 μl，cDNA3 μl、Taq酶0.5 μl，总反应体系21 μl；反应条件：95℃预变性2 min，95℃变性15 s，60℃退火30 s，72℃延伸1 min，40个循环后72℃ 5 min；每个基因设3个复孔，共计测量3次，取3次平均值；记录目的基因CT值，以GAPDH为内参照，计算Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA相对表达量(2-ΔΔCT)；其中△Ct= Ct(检测样品mRNA)-Ct(GAPDH mRNA)。

2 结果

2.1 三组大鼠肾脏组织病理学改变 Control组、Sham组肾脏组织上皮细胞连接紧密，形态排列规则，边缘完整，细胞间隙未见水肿和炎性浸润；IRI组第1天可见大面积上皮细胞坏死，部分上皮细胞发生脱落，基底膜部分裸露，管腔内存在大量脱落细胞及碎片；第3天、第5天上皮细胞坏死面积缩小，管腔内脱落细胞数量减少；至第7天仍可见部分上皮细胞坏死脱落，但坏死面积较低1 d明显缩小，见图1。

2.2 三组大鼠肾脏损伤评分比较 Control组、Sham组各时段肾脏损伤评分比较差异无统计学意义(P>0.05)；IRI组术后第1天～第7天肾脏损伤评分先上升后逐渐降低，其中术后第3天肾脏损伤评分最高；IRI组术后1、3、5、7 d肾脏损伤评分均显著高于Control组、Sham组(P<0.05)，见表2。

图1 三组大鼠病理学改变Fig.1 Renal morphology in three groups of ratsNote: A.Control group；B.Sham group;C.IRI group 1 d；D.IRI group 3 d；E.IRI group 5 d；F.IRI group 7 d(PAS,×200).

表1 引物序列

Tab.1 Sequences of primers

GenenamePrimersequenceProduct(bp)Wnt4Forward：5′⁃TCGCGAGCTTGCTTGGCGAC⁃3′201Reverse：5′⁃GCTGTCAGGCGCGCTGCGATA⁃3′β⁃cateninForward：5′⁃GTGACATAAGTTCGGACTGCG⁃3′216Reverse：5′⁃TTTCGATTACATCGCGGAGCT⁃3′Lrp6Forward：5′⁃GCTACAGCGTATATGGTGTGC⁃3′346Reverse：5′⁃GCTGGTTAGGATCATGGCAAGT⁃3′GAPDHForward：5′⁃CAGAGCTAGAACACGGCAGCG⁃3′136Reverse：5′⁃TGCGGCGATGGCTAGGCGTGA⁃3′

2.3 三组大鼠血肌酐水平比较 Control组、Sham组各时段血肌酐比较差异无统计学意义(P>0.05)；IRI组术后第1天～第7天血肌酐含量先上升后逐渐降低，其中术后第3天血肌酐含量最高；IRI组术后1、3、5、7 d血肌酐均显著高于Control组、Sham组(P<0.05)，见表3。

2.4 三组大鼠尿素氮水平比较 Control组、Sham组各时段尿素氮比较差异无统计学意义(P>0.05)；IRI组术后第1天～第7天尿素氮含量先上升后逐渐降低，其中术后第3天尿素氮含量最高；IRI组术后1、3、5、7 d尿素氮均显著高于Control组、Sham组(P<0.05)，见表4。

2.5 三组大鼠肾脏组织Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表达 Control组、Sham组各时段Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)；IRI group术后 Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白逐渐增加，至术后第5天达表达高峰，此后逐渐降低；IRI组术后1、3、5、7 d Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白均显著高于Control组、Sham组(P<0.05)，见图2、3。

GroupsnAfter1dAfter3dAfter5dAfter7dControlgroup4013±0051)015±0021)012±0031)013±0021)Shamgroup4016±0041)015±0011)016±0021)017±0031)IRIgroup41937±3392171±4311024±214763±105BetweengroupF=224791P=0000DifferenttimepointsF=112941P=0000Betweengroup×differenttimepointsF=115561P=0000

Note：1)P<0.05 vs IRI group.

GroupsnAfter1dAfter3dAfter5dAfter7dControlgroup4413±0311)429±0341)418±0281)430±0371)Shamgroup4441±0451)435±0411)432±0391)438±0421)IRIgroup4873±0791453±2141236±117984±091BetweengroupF=132403P=0000DifferenttimepointsF=48391P=0000Betweengroup×differenttimepointsF=41385P=0000

Note：1)P<0.05 vs IRI group.

GroupsnAfter1dAfter3dAfter5dAfter7dControlgroup4527±0381)519±0341)541±0391)537±0361)Shamgroup4558±0451)546±0381)529±0341)533±0431)IRIgroup4937±1031853±3941403±2211237±204BetweengroupF=47093P=0000DifferenttimepointsF=53881P=0000Betweengroup×differenttimepointsF=28381P=0000

Note：1)P<0.05 vs IRI group.

2.6 三组大鼠肾脏组织Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA表达 Control组、Sham组各时段Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)；IRI group术后 Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA显著增加，至术后第3天达表达高峰，此后逐渐降低；IRI组术后1、3、5、7 d Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA均显著高于Control组、Sham组(P<0.05)，见图4。

图2 三组大鼠Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表达水平(免疫印迹法)Fig.2 Wnt4,β-catenin,Lrp6 protein expression level in three groups of rats(Western blot)

图3 三组大鼠Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表达水平Fig.3 Wnt4,β-catenin,Lrp6 expression level in three groups of ratsNote: *.P<0.05 vs control group;#.P<0.05 vs control group.

图4 三组大鼠Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA水平Fig.4 Wnt4,β-catenin,Lrp6 mRNA expression level in three groups of ratsNote: *.P<0.05 vs control group；#.P<0.05 vs control group.

3 讨论

急性肾功能损伤是由多种疾病所致的肾功能短时期间急性减退，严重时甚至发生肾功能衰竭。常见引起急性肾功能损伤的疾病有脓毒症休克、极低血容量、外伤、严重感染等，而这些诱因的共同特点均是肾脏缺血缺氧[11-13]。国外研究[14]显示，组织急性缺血后会诱导细胞增殖再生，而这一途径亦是组织自我修复的主要方式。本研究对Control组、Sham组、IRI组不同时段肾脏组织病理学变化进行观察，结果显示Control组、Sham组肾脏组织上皮完整，而IRI组第1天可见大面积上皮细胞坏死，第3天、5天、7天上皮细胞坏死面积逐渐缩小，说明肾脏急性损伤后会开始自我修复，证实了肾脏组织存在修复过程。晏现丽等[15]报道称大鼠IRI后24～36 h肾脏损伤最为严重，而肾损伤后24 h肾脏修复开始，修复的部位主要集中于肾脏外层髓质和皮质。本研究肾脏损伤评分显示，IRI组术后第3天肾脏损伤评分最高，IRI组术后第1天～第7天肾脏损伤评分先上升后逐渐降低，说明急性肾脏损伤后细胞开始修复，进而促进肾脏组织再生。

Wnt-β-catenin信号通路是生物界普遍存在的一种高度保守的信号转导通路，主要参与了细胞的增殖、分化和抗凋亡等一系列生物学过程。目前认为在成熟肾脏中，Wnt-β-catenin信号是沉默的[16]；而Wnt家族成员在肾脏中均有不同程度的表达，提示Wnt在维持肾脏组织动态平衡可能发挥重要作用。Wnt4是唯一在肾脏前体细胞中表达的Wnt家族成员，Vivante等[17]证实Wnt4突变与肾脏发育不良密切相关，上皮祖细胞Wnt4参与了多种肾脏疾病的发病。β-catenin是整个Wnt-β-catenin信号通路调控的关键因子，当Wnt信号通路尚未激活时，β-catenin在破坏复合体调控下发生磷酸化[18]。当Wnt信号通路被激活后，破坏复合体发生解离，β-catenin磷酸化受阻而发生蓄积，大量蓄积的β-catenin进入细胞核内诱导Wnt靶基因的表达，从而抑制细胞凋亡、诱导细胞增殖等生物行为。Wnt-β-catenin信号通路处于活化状态时，会与相应的受体结合，并将信号转导至下游靶细胞。目前研究较多的参与Wnt信号途径的受体为低密度脂蛋白相关蛋白6(Lrp6)；Pfister等[19]证实，当组织发生急性损伤后，Wnt蛋白能够以旁分泌或自分泌的形式与细胞膜上受体Lrp6结合，并抑制Lrp6磷酸化，进而启动下游β-catenin信号通路。

本研究显示，IRI group术后 Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA显著增加，至术后第3天达表达高峰，随后逐渐降低。说明缺血再灌注损伤后，肾脏组织能激活Wnt-β-catenin信号通路，并进行一系列下游信号转导，启动肾脏组织的修复过程。Cruciat等[20]研究称，缺血再灌注后会上调组织中Wnt家族蛋白表达，并通过下游β-catenin级联放大，最终抑制细胞色素C和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性，达到对组织缺血再灌注损伤的保护作用。免疫印迹法检测亦证实IRI group术后 Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白逐渐增加，至术后第5天达表达高峰，此后逐渐降低。说明Wnt-β-catenin信号分子蛋白表达有一定滞后性，当术后第3天肾脏损伤最严重时，肾脏组织修复机制也达到最活跃状态，此后mRNA逐渐翻译成分子蛋白，最终启动肾脏组织的自我修复。

综上所述，Wnt-β-catenin信号分子在急性肾损伤组织中表达显著增加，激活的Wnt-β-catenin信号通路参与了肾脏组织的修复过程，这将为防治急性肾损伤提供了非常有价值的作用靶点。

[1] Kawakami M,Okuda H,Tatsumi K,etal.Inhibition of Wnt/β-catenin pathway by Dikkopf-1 affects midfacial morphogenesis in chick embryo[J].J Biosci Bioeng，2014，117(6):664-669.

[2] Ono M,Yin P,Navarro A,etal.Paracrine activation of WNT/β-catenin pathway in uterine leiomyoma stem cells promotes tumor growth[J].Proc Natl Acad Sci U S A，201，110(42):17053-17058.

[3] Lee SB,Park YI,Dong MS,etal.Identification of 2,3,6-trisubstituted quinoxaline derivatives as a Wnt2/β-catenin pathway inhibitor in non-small-cell lung cancer cell lines[J].Bioorg Med Chem Lett，2010，20(19):5900-5904.

[4] Wang H,He L,Ma F,etal.SOX9 regulates low density lipoprotein receptor-related protein 6 (LRP6) and T-cell factor 4 (TCF4) expression and Wnt/β-catenin activation in breast cancer[J].J Biol Chem，2013，288(9):6478-6487.

[5] Sabbagh Y,Graciolli FG,O′Brien S,etal.Repression of osteocyte Wnt/β-catenin signaling is an early event in the progression of renal osteodystrophy[J].J Bone Miner Res，2012，27(8):1757-1772.

[6] Gnemmi V,Bouillez A,Gaudelot K,etal.MUC1 drives epithelial-mesenchymal transition in renal carcinoma through Wnt/β-catenin pathway and interaction with SNAIL promoter[J].Cancer Lett，2014，346(2):225-236.

[7] Ueno K,Hirata H,Majid S,etal.IGFBP-4 activates the Wnt/beta-catenin signaling pathway and induces M-CAM expression in human renal cell carcinoma[J].Int J Cancer，2011，129(10):2360-2369.

[8] Grouls S,Iglesias DM,Wentzensen N,etal.Lineage specification of parietal epithelial cells requires beta-catenin/Wnt signaling[J].J Am Soc Nephrol，2012，23(1):63-72.

[9] Lin SL,Li B,Rao S,etal.Macrophage Wnt7b is critical for kidney repair and regeneration[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2010，107(9):4194-4199.

[10] Supavekin S,Zhang W,Kucherlapati R,etal.Differential gene expression following early renal ischemia/reperfusion[J].Kidney Int，2003，63(5):1714-1724.

[11] Tanaka R,Tsutsui H,Ohkita M,etal.Sex differences in ischemia/reperfusion-induced acute kidney injury are dependent on the renal sympathetic nervous system[J].Eur J Pharmacol，2013，714(1-3):397-404.

[12] Tsutsui H,Tanaka R,Yamagata M,etal.Protective effect of ischemic preconditioning on ischemia/reperfusion-induced acute kidney injury through sympathetic nervous system in rats[J].Eur J Pharmacol，2013，718(1-3):206-212.

[13] Yates RB,Sheng H,Sakai H,etal.Lack of evidence for a remote effect of renal ischemia/reperfusion acute kidney injury on outcome from temporary focal cerebral ischemia in the rat[J].J Cardiothorac Vasc Anesth，2013，27(1):71-78.

[14] Tsutsui H,Sugiura T,Hayashi K,etal.Protective effect of moxonidine on ischemia/reperfusion-induced acute kidney injury through α2/imidazoline I1 receptor[J].Eur J Pharmacol，2013，718(1-3):173-180.

[15] 晏现丽,张 颖,郑立运,等.C3a、C5a受体缺失减轻IgA肾病肾损伤[J].中国免疫学杂志,2015,31(9):1169-1172.

[16] Bhukhai K,Suksen K,Bhummaphan N,etal.A phytoestrogen diarylheptanoid mediates estrogen receptor/akt/glycogen synthase kinase 3β protein-dependent activation of the Wnt/β-catenin signaling pathway[J].J Biol Chem，2012，287(43):36168-36178.

[17] Vivante A,Mark-Danieli M,Davidovits M,etal.Renal hypodysplasia associates with a wnt4 variant that causes aberrant canonical wnt signaling[J].J Am Soc Nephrol，2013，24(4):550-558.

[18] Konsavage WM Jr,Kyler SL,Rennoll SA,etal.Wnt/β-catenin signaling regulates yes-associated protein (YAP) gene expression in colorectal carcinoma cells[J].J Biol Chem，2012，287(15):11730-11739.

[19] Pfister AS,Tanneberger K,Schambony A,etal.Amer2 protein is a novel negative regulator of Wnt/β-catenin signaling involved in neuroectodermal patterning[J].J Biol Chem，2012，287(3):1734-1741.

[20] Cruciat CM,Dolde C,de Groot RE,etal.RNA Helicase DDX3 is a regulatory subunit of casein kinase 1 in Wnt-β-catenin signaling[J].Science，2013，339(6126):1436-1441.

[收稿2016-06-12 修回2016-08-09]

(编辑 张晓舟)

Wnt-β-catenin signal molecule expression level in acute kidney injury rats renal tissue

ZHOULing-Hui,HUANGYue,ZHANGYan-Lin.

DepartmentofNephrology,theFirstAffiliatedHospitalofXiamenUniversity,Xiamen361003,China

Objective:To explore the Wnt-β-catenin signal molecule expression level in acute kidney injury rats renal tissue.Methods: A total of 48 rats accorded to the random number table method were divided into normal control group (Control group),sham operation group (Sham group) and ischemia reperfusion group (IRI group),each group with 16 rats,Control group was given normal fed,IRI group were established ischemia reperfusion injury rats model,Sham group opened dorsal skin and then wound was closed.4 rats were sacrificed respectively at 1,3,5,7 d after surgery,the pathological changes of kidney tissue were observed in the three groups,and the serum creatinine,urea level was detected in the three groups.Wnt4,β-catenin,Lrp6 protein expression was detected in three groups of rats by Western blot,Wnt4,β-catenin,Lrp6 mRNA in renal tissues were detected by Real-time quantitative RT-PCR.Results: There was no significant difference in renal injury score and serum creatinine between Control group and Sham group (P>0.05),IRI group kidney injury score and serum creatinine,urea first increased and then gradually decreased,which was the highest in 3 d after surgery,IRI group renal injury score and serum creatinine,urea were significantly higher than those in Control group and Sham group 1,3,5,7 d after surgery (P<0.05).There was no significant difference in Wnt4,β-catenin,Lrp6 protein between Control group and Sham group (P>0.05),IRI group Wnt4,β-catenin,Lrp6 protein gradually increased,which reached to peak at 5 d after surgery,and then gradually decreased,IRI group Wnt4,β-catenin,Lrp6 protein were significantly higher than those in Control group and Sham group 1,3,5,7 d after surgery(P<0.05).There was no significant difference in Wnt4,β-catenin,Lrp6 mRNA between Control group and Sham group (P>0.05),IRI group Wnt4,β-catenin,Lrp6 mRNA gradually increased,which reached to peak at 3 d after surgery,and then gradually decreased,IRI group Wnt4,β-catenin,Lrp6 mRNA were significantly higher than those in Control group and Sham group 1,3,5,7 d after surgery (P<0.05).Conclusion: The expression of Wnt-β-catenin signal molecule are significantly increase in acute kidney injury,and the activation of Wnt-β-catenin signal pathway is involved in the repair process of renal tissue.

Wnt-β-catenin signal molecule;Acute renal injury;Reperfusion injury;Signal pathway

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.02.022

周凌辉(1978年-)，男，硕士，副主任医师，主要从事急慢性肾功能衰竭、血液透析方面的研究。

及指导教师：张燕林(1959年-)，男，硕士，主任医师，主要从事急慢性肾功能衰竭、血液透析肾功能方面的研究。

R363.2

A

1000-484X(2017)02-0268-07

①厦门大学附属第一医院皮肤科,厦门361003。