P57、P53、Her-2及Ki-67在胎盘绒毛水肿性病变中的表达及其意义*

李昌秀,杨达荣,徐红梅,杨 柳,刘俊玲，吴时军,罗治彬

(1.重庆市合川区人民医院病理科 401520；2.重庆市第三人民医院肿瘤科 400014)

·经验交流· doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.04.030

P57、P53、Her-2及Ki-67在胎盘绒毛水肿性病变中的表达及其意义*

李昌秀1,杨达荣1,徐红梅1,杨 柳1,刘俊玲1，吴时军1,罗治彬2

(1.重庆市合川区人民医院病理科 401520；2.重庆市第三人民医院肿瘤科 400014)

[摘要] 目的 研究P57、P53、Her-2及Ki-67在流产绒毛水肿(HA)、部分性葡萄胎(PHM)及完全性葡萄胎(CHM)中的表达，探讨其在水泡状胎块发生、发展中的作用，为葡萄胎的早期诊断及鉴别诊断提供理论依据。方法 采用免疫组织化学(EnVision法)分别检测P57、P53、Her-2及Ki-67在30例正常绒毛(NP)、30例HA、30例PHM及30例CHM中的表达。结果 P57在NP组、HA组、PHM组中的阳性表达率分别为96.66%、96.66%、93.33%，显著高于在CHM组(3.33%)中的表达(P<0.01)；P53在PHM组(53.33%)中表达明显高于在NP 组(16.66%)和HA组(20.00%)中的表达，而明显低于在CHM组(80.00%)中的表达，差异有统计学意义(P<0.05)；Her-2在CHM组中的表达为36.66%，明显高于在NP组(10.00)和HA组(13.33%)中的表达(P<0.05),但是Her-2在PHM组(23.33%)与CHM组中的表达差异无统计学意义(P>0.05)；PHM组和CHM组的Ki-67增殖指数分别为(48.03±18.77)%和(87.79±10.50)%，均高于HA组[(33.43±17.17)%]及NP组[(34.46±16.15)%]，P<0.01，而CHM组的Ki-67显著高于PHM组(P<0.01)。结论 P57缺失而P53及Ki-67高表达可诊断为CHM；P57阳性而P53及Ki-67增殖指数均缺失或弱表达可诊断为HA。其他情况下均需要进一步做分子基因分型检测；Her-2的表达对HA、PHM及CHM的鉴别意义不大。

水泡状胎块；流产水肿绒毛；P53；P57；Ki-67；Her-2

胎盘绒毛水肿性病变是一组以外观呈透亮水泡状的胎盘绒毛病变，临床工作中常见包括完全性葡萄胎(complete hydatidiform mole,CHM)、部分性葡萄胎(partial hydatidiform mole,PHM) 及流产绒毛水肿 (hydropic abortuses,HA)。肉眼标本、组织形态学及临床表现的不同常用于胎盘绒毛水肿性病变的诊断及鉴别，但是在病变早期，常常因肉眼标本、镜下组织及临床特征不典型而难以分型，甚至与HA鉴别困难。近年来有文献报道了P57、P53和Ki-67在水泡状胎块分型与HA鉴别中的价值，但报道结果并不完全一致[1-3]。而且Her-2在不同类型的绒毛水肿性病变中的表达及意义研究甚少。本研究通过免疫组织化学方法观察P57、P53、Her-2和Ki-67在不同的绒毛水肿性病变中的表达情况，探讨联合4个指标对绒毛水肿性病变鉴别诊断的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2010-2015年合川区人民医院病理科经病理高级医师诊断为HA、CHM和PHM的患者各30例作为研究对象。选取正常的绒毛组织(NP)30例作对照。所有存档病例均经10%甲醛固定,石蜡包埋。

1.2 方法 P57、P53、Her-2及Ki-67单克隆抗体、EnVision试剂盒及二氨基联苯胺(DAB)显色液均购自福建迈新生物工程有限公司。所有组织经4 μm连续石蜡切片，严格按照EnVision检测试剂盒说明书的步骤操作。

1.3 结果的判定 参照许良中等[3]的资料，综合考虑切片中阳性细胞占所观察同类细胞数的百分比和阳性细胞着色强度两项指标，半定量判断结果。P57、P53的观察，先在低倍镜下选取最强着色区，然后选10个高倍镜视野(×400)，分别记数100个细胞，其颜色深浅评分：细胞核上无棕黄色颗粒为0分、淡黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分。染色细胞所占百分比打分：无阳性细胞为0分、1%～10%为1分、11%～50%为2分、≥51%为3分。两项乘积得分大于或等于3分定为阳性。Her-2阳性判断方法：根据细胞膜有无显色或强弱。0：完全未着色或小于10%细胞膜着色；(+)：≥10%呈微弱、不完整细胞膜着色；(++)：>10%呈弱-中度完整细胞膜着色；(+++)：>10%呈现强而完整的细胞膜着色。“0”为阴性，(+～+++)为阳性[4]。Ki-67只计数绒毛外的滋养细胞和绒毛间质细胞，Ki-67增殖指数=Ki-67阳性细胞数/计数细胞总数×100%。

2 结 果

2.1 P57在各组中的表达 P57呈细胞核阳性表达，表达部位为滋养细胞、绒毛间质细胞及蜕膜细胞，见图1、2。P57在NP、HA和PHM组分别为96.66%、96.66%、93.33%，显著高于在CHM组(3.33%)中的表达(χ2=52.26、52.26、48.65，P<0.01)。P57在PHM组中的表达低于HA组和NP组中的表达，但差异无统计学意义(χ2=0.00、0.00，P>0.05)，见表1。

2.2 P53在各组中的表达 P53阳性定位于细胞核，见图3、4。P53在CHM组中表达为80.00%，明显高于NP组(16.66%)、HA组(20.00%)和PHM组(53.33%)，差异有统计学意义(χ2=24.09、21.40、4.80，P<0.05)。PHM组明显高于HA组，差异有统计学意义(χ2=7.71，P<0.01)。而HA组和NP组差异无统计学意义(χ2=0.11，P>0.05)。见表1。

图1 P57在PHM组织中的表达(SP×400)

图2 P57在CHM组织中的表达(SP×200)

图3 P53在PHM组织中的表达(SP×200)

图4 P53在CHM组织中的表达(SP×400)

2.3 Her-2在各组中的表达 Her-2阳性定位于绒毛外的滋养细胞和绒毛间质细胞的细胞膜，为棕黄色或浅黄色颗粒，见图5、6。Her-2在CHM组中的表达为36.66%，明显高于NP组(10.00)和HA组(13.33%)，差异有统计学意义(χ2=5.96、4.35,P<0.05)。而PHM组(23.33%)与CHM、HA组及NP组之间差异无统计学意义(χ2=1.26、1.00、1.92，P>0.05)，见表1。

图5 Her-2在PHM中的表达(SP×200)

图6 Her-2在CHM组织中的表达(SP×400)

图7 Ki-67在PHM组织中的表达(SP×200)

图8 Ki-67在CHM组织中的表达(SP×400)

2.4 Ki-67在各组中的表达 Ki-67阳性定位于细胞核，见图7、8。在PHM组和CHM组Ki-67增殖指数分别与HA组及NP组比较，差异有统计学意义(χ2=3.32、3.34、14.38、15.16，P<0.01)，而CHM组也明显高于PHM组，差异有统计学意义(χ2=9.81，P<0.01)，见表2。

表1 P57、P53及Her-2在各组标本组织中的表达

表2 Ki-67在各组标本组织中的表达

3 讨 论

HA、PHM、CHM三者有不同的妊娠结局和预后，准确的诊断直接影响患者的治疗方案选择和预后判断。而三者外观均是呈葡萄状的水泡样组织，特别是病变早期，在组织学上，滋养细胞增生及HA均不够典型时，如果单纯从形态学诊断就容易造成误诊或漏诊，而影响患者的治疗和预后。所以，寻找一种简单而可靠的诊断指标，对于胎盘绒毛水肿性病变的鉴别诊断和分型都非常重要。

P57定位于染色体11p15.5，是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子和肿瘤抑制基因，抑制细胞增殖和肿瘤形成。近年来，国内外学者对有关P57基因在水泡状胎块中表达及鉴别诊断意义的研究越来越多，发现P57基因又是亲源印迹基因，系母源性等位基因表达，这对鉴别PHM和CHM起到非常重要的作用，并提出P57可以用于形态学上难以客观区别的CHM和PHM的鉴别[5]。由于CHM是雄性二倍体，PHM是雌雄异型三倍体，流产水肿是双亲二倍体，所以,P57表达缺失的CHM容易从P57阳性的PHM和HA中别鉴别出来。陈云新等[6]的研究显示，P57阳性率在PHM为100%，CHM不表达。而本研究发现，P57在CHM组中的阳性率为3.33%，PHM组为93.33%，HA组为96.66%，CHM组30例患者中有1例P57阳性，这与McConnell等[7]的研究一致。McConnell等[7]同时用P57免疫组织化学和分子基因型检测技术分析水泡状胎块标本时，发现1例形态典型的CHM弥漫表达P57。而且通过短串联重复序列的分子基因型检测和单个核苷酸多态性阵列的全基因组拷贝数分析证实了该例的确是雄性二倍体，却保留有母系6号和11号染色体的拷贝。正是由于母系6号和11号染色体的存在，所以异常表达P57。本研究的P57阳性病例可能是保留着母系6号和11号染色体的CHM，也有可能是P57假阳性的CHM，需进一步做分子基因型检测以明确诊断。

P53基因是抑癌基因，具有调控细胞生长、诱导细胞衰老和凋亡的作用。突变型P53在大多数恶性肿瘤中高表达，而且与肿瘤的预后密切相关。而Ki-67是细胞增殖的一个重要生物学指标,其阳性表达率常作为评价肿瘤发生、发展及预后的重要指标。近年来，P53和Ki-67也常常用于鉴别胎盘绒毛水肿性病变中[8-9]。李军红等[10]研究发现P53的表达及Ki-67在葡萄胎(HM)组中的表达高于HA组，对鉴别PHM和HA有重要价值。本研究采用免疫组织化学也发现突变型P53在CHM组(80.00%)和PHM组(53.33%)中的表达均高于HA组(20.00%)和NP组(16.66%)，差异均有统计学意义(P<0.05)。这提示CHM和PHM中P53蛋白的高表达与抑癌基因P53的突变有关， P53蛋白的检测有助于水泡状胎块与HA的鉴别。同时，笔者也发现PHM组(48.03±18.77)%和CHM组(87.79±10.50)%的Ki-67增殖指数也都高于HA组(33.43±17.17)%及NP组(34.46±16.15)%，差异有统计学意义(P<0.01)。该结果与Khooei等[11]研究结果一致。但是Khooei等[11]进一步强调，虽然Ki-67在HM和HA中的表达差异有统计学意义，但是Ki-67仍不能单独用于鉴别HM与HA，因为Ki-67在各组的表达阳性程度上存在着相当大的重叠。所以，笔者认为联合P53和Ki-67增殖指数可较为准确地反映HM和HA的绒毛外的滋养细胞和绒毛间质细胞增殖活性，可作为评估病变是HM还是HA的重要参考指标。

Her-2定位于17q12,是表皮生长因子受体家族的成员之一，在很多恶性肿瘤组织中表达并用作监测预后的标记物。Fulop等[12]对16例PHM、25例CHM和11例HA进行研究发现,Her-2表达于CHM的绒毛外滋养细胞，且明显强于PHM和HA，这对HM的分型诊断及恶变预后起到非常重要的作用。同样，Yazaki-Sun等[13]对已经发展为胎盘滋养细胞肿瘤的35例HM和自然愈合的32例HM行Her-2和P53的检测，发现两者在恶变的HM中强表达，提示Her-2和P53对HM恶变及预后判断起着非常重要的作用。但Menczer等[14]用免疫组织化学染色对23例CHM和10例PHM进行Her-2检测，发现6例阳性(CHM和PHM各3例)，而且Her-2在后来进展为妊娠滋养细胞肿瘤的HM中的表达强于未进展为妊娠滋养细胞肿瘤的HM中的表达，但差异无统计学意义(P>0.05)。而本研究结果显示，Her-2在CHM组中的表达高于NP和HA组(P<0.05),这可能提示滋养细胞有增生。但Her-2在CHM组和PHM组中的表达差异无统计学意义(P>0.05),这对诊断CHM组和PHM组无明显鉴别作用。

HM和HA的早期诊断及鉴别诊断对临床的治疗及疾病的预后都非常重要。联合检测P57、P53及Ki-67增殖指数有助于HM的分型和HA的鉴别诊断。P57缺失而P53及Ki-67高表达可诊断为CHM。而P57阳性而P53及Ki-67均缺失或弱表达可诊断为HA。当P57阳性而P53及Ki-67高表达时可能为PHM，但还需进一步做分子基因型检测，以排除母系6号和11号染色体阳性的CHM的可能。Her-2阳性对CHM和PHM的鉴别意义不大，但Her-2联合P53和Ki-67的表达情况可以作为预测HM恶变的参考指标。Her-2阳性可能提示HM的绒毛外的滋养细胞和绒毛间质细胞有增生，但其如何参与HM的绒毛外的滋养细胞和绒毛间质细胞增生，如何导致HM恶变的机制和意义还需收集大量妊娠滋养细胞肿瘤的病例进一步研究。

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重庆市卫生和计划生育委员会医学科研计划项目(20143054)。 作者简介：李昌秀(1979-)，主治医师，硕士，主要从事医学病理学研究。△

，E-mail:luozhibincq@126.com。

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