益母草浸膏对产后子宫内膜炎作用功效的实验研究*

陈晓燕冉华阳张锦安△

（1.重庆市中医院，重庆 400021；2.重庆市西南药业销售公司，重庆 400038）

·研究报告·

益母草浸膏对产后子宫内膜炎作用功效的实验研究*

陈晓燕1冉华阳2张锦安1△

（1.重庆市中医院，重庆 400021；2.重庆市西南药业销售公司，重庆 400038）

目的 观察益母草对产后子宫内膜炎模型大鼠的影响，并对其作用机制作初步探索。方法 将大鼠按随机数字表法分为5组：正常对照组、模型组、益母草浸膏低剂量组、益母草浸膏高剂量组和三七总皂苷对照组。采用大肠埃希菌进行阴道灌注建立感染模型，采用ELISA法对各组大鼠SOD、MDA以及TNF-α、IL-1β、IL-6的含量进行检测；采用放免药盒测试法测定6-K-PGF1α和TXB2的含量；蛋白免疫印迹法测定Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 与模型组相比，益母草浸膏可以明显地使产后子宫内膜炎大鼠血清中的MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α含量降低，SOD含量提高；减弱6-K-PGF1α，增强TXB2的表达；上调Bcl-2蛋白、下调Bax蛋白的表达（P＜0.05或P＜0.01）。而益母草高、低剂量组和三七总皂苷组之间；益母草浸膏高剂量组和低剂量组之间各指标无显著差异（P＞0.05）。结论 益母草可以抑制炎症因子的表达，降低氧自由基损伤，降低子宫内膜的细胞凋亡，还能够降低6-K-PGF1α的表达，升高TXB2的表达，促进其动态平衡，使血止但不留淤，通过以上的可能调节机制，促进子宫内膜的增生、修复，对产后子宫内膜炎起到保护和改善作用，从而起到促进产后子宫复原的功效。

产后子宫内膜炎 益母草 实验研究

近年来，产后子宫复旧不全［1］的发生率呈上升趋势，严重影响着妇女的身心健康，影响妇女的生活质量。在临床上主要表现为：血性恶露的量增多、持续时间延长、浑浊、伴有恶臭，甚至会导致宫腔内分泌出脓性液体；腰部、下腹部胀疼等。导致这种情况的原因较复杂，而产后感染所导致的子宫内膜炎是造成产后子宫复旧不全的常见原因之一［2］。子宫内膜炎作为妇科的常见疾病，炎症、氧化、凋亡是其非常重要的因素。益母草因其能够活血化瘀、收缩子宫等，被誉为“妇科经产药”，大量研究表明，益母草还具有很好的抗炎、抗氧化作用。本实验研究通过基础动物实验初步探索益母草浸膏对产后子宫内膜炎模型大鼠的影响及其可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 实验采用健康雌性大鼠50只，2月龄，体质量185～215 g，雄性大鼠25只，体质量190～290 g，SPF级。均由重庆医科大学提供［合格证号为：SCXK（渝）2012-0001］。

1.2 试药与仪器 益母草浸膏：由重庆医科大学中药学院提供，进行消毒并灭菌后，4℃保存、备用。三七总皂苷：其提取物由重庆医科大学中药学院提供，进行消毒并灭菌后，4℃保存、备用。大肠埃希菌的标准菌株ATCC25921于细菌室内培养，定期进行活化。超氧化物歧化酶 （SOD）和丙二醛 （MDA）试剂盒 （批号：20150312）均购买于南京建成生物工程研究所；肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素（IL）-1β、IL-6的ELISA试剂盒（批号：201300305248）均购买于上海森雄科技实业有限公司；6-酮-前列腺素F1Α（6-K-PGF1Α）、血栓素B2（TXB2）放射免疫试剂盒（批号：20130621）购买于北京华英生物技术研究所；Bcl-2和Bax抗体购于美国Sigma公司。紫外分光光度计（754型）购买于上海精密科学仪器有限责任公司；MK3型酶标分析仪购买于上海的热电仪器有限公司。

1.3 分组与造模 50只大鼠按照随机数字表法随机分为以下5个小组：正常对照组、模型组、益母草浸膏高剂量组、益母草浸膏低剂量组和三七总皂苷组。将其按照雌雄2∶1的比例［3］进行同笼饲养。本实验以赵红琼等［4-5］研究报道中建立此模型的方法为借鉴，并进行改进。估算大鼠的预产期，除正常对照组大鼠外，其余大鼠全在产后的第1天，将其麻醉后进行消毒、铺巾，将大肠埃希菌（3×108cfu/mL）用阴道灌注针对其进行接种细菌，建立产后子宫内膜炎的大鼠模型。待接种后第4日，大鼠阴道流出恶臭分泌物，造模成功。造模期间无大鼠死亡。

1.4 干预措施 正常对照组和模型组，于产后第1天开始，用蒸馏水进行灌胃，每日1次。用蒸馏水将益母草浸膏按1∶125体积比进行溶解，从产后第1日开始，以15 mL/kg和5 mL/kg的剂量对益母草高、低剂量组分别进行灌胃给药，每日1次。将三七总皂苷按1∶150体积比溶于蒸馏水中。将其按照正常人的常用量进行换算（0.12 g/kg），从产后第1天开始，以10 mL/kg对三七皂苷阳性对照组组进行灌胃给药，每日1次。每组连续给于对应药物或0.9%氯化钠溶液7 d后，大鼠断头处死，对其相应指标进行鉴定。

1.5 指标检测 1）SOD和MDA的含量测定：在7 d后，将大鼠进行处死，采取大鼠颈动脉的血，再利用比色法对所含的SOD及MDA进行测定。2）TNF-α、IL-1β、IL-6的含量测定：采大鼠颈动脉血，再利用ELISA试剂盒对血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量进行检测。3）放免药盒测试法对6-K-PGF1α、TXB2的检测：将大鼠子宫组织取出后，用眼科剪剪碎，加入生理盐水及无水乙醇（9∶1），1500 r/min研磨8 min，再进行离心，取其上清液于-20℃备用，再根据放免药盒测试相应指标。4）蛋白免疫印迹法对Bcl-2、Bax的检测：取出子宫组织，加入液氮后研碎，再加入细胞裂解液抽提蛋白，BCA法定量蛋白。组织匀浆经生理盐水稀释至2000 μg/mL，加入4×上样缓冲液，沸水浴5 min，于-40℃保存；取10 μL蛋白80 V下进行SDS-PAGE电泳，30 min，换至120 V，于200 mA下转膜1 h，室温下封闭液封闭PVDF膜，过夜。剪下PVDF膜，加入1∶1000的Bcl-2、Baz一抗，4℃下孵育48 h，TBST漂洗3次；加入1∶2500的二抗，室温下孵育2 h，TBST漂洗3次；经ECL显色，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，进行曝光处理后得图片，利用imagelab软件对条带进行分析，检测待测蛋白表达。

1.6 统计学处理 应用SPSS18.0统计软件。计量资料以（）表示，并对其进行处理、分析。采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组产后子宫内膜炎大鼠MDA、SOD含量比较

见表1。与正常对照组相比，模型组中MDA升高，而SOD降低（P＜0.01）；益母草浸膏高低剂量组和三七总皂苷组则可改善模型组这种情况，使MDA降低，SOD升高。而益母草浸膏高低剂量组和三七总皂苷组之间，益母草浸膏高、低剂量组之间无明显差异（P＞0.05）。

表1 各组产后子宫内膜炎大鼠MDA、SOD、TNF-α、IL-1β、IL-6含量比较（）

表1 各组产后子宫内膜炎大鼠MDA、SOD、TNF-α、IL-1β、IL-6含量比较（）

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

组别 n正常对照组 10模型组 10益母草浸膏低剂量组 10 IL-6（ng/L） TNF-α（ng/L）54.08±3.83 67.71±15.23 98．21±10.13△△168.23±25.33△△67.90±14.71**101.71±23.31*益母草浸膏高剂量组 10 137.98±32.10**35.01±8.78**181.67±37.31**60.14±15.11**88.76±21.09**三七总皂苷组 10 138.91±17.98**38.28±8.08**194.55±22.01*68.21±23.11*94.32±35.21**SOD（U/mL） MDA（nmol/mL）IL-1β（ng/L）156.13±25.31 33.82±4.49 147.56±17.99 62.11±11.42△△86.98±9.80△△311.02±54.21△△109.01±33.51*51.72±5.94*208.23±25.33*

2.2 各组产后子宫内膜炎大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6含量比较 见表1。与正常对照组相比，在模型组中IL-1β、IL-6和TNF-α升高（P＜0.01）；与模型组比较，益母草浸膏高、低剂量组和三七总皂苷组使TNF-α、IL-1β、IL-6降低，其中高剂量组最为明显（P＜0.05或P＜0.01），而益母草浸膏高、低剂量组和三七总皂苷组，益母草浸膏高、低剂量组之间无明显差异（P＞0.05）。

2.3 各组产后子宫内膜炎大鼠6-K-PGF1α、TXB2含量比较 见表2。与正常对照组相比，模型组6-KPGF1α升高，而TXB2呈现降低（P＜0.01）；与模型组比较，益母草浸膏高、低剂量组和三七总皂苷组使6-K-PGF1α降低，TXB2升高（P＜0.05或P＜0.01），而益母草给药组和三七总皂苷组，益母草浸膏高、低剂量组之间无明显差异（P＞0.05）。

表2 各组产后子宫内膜炎大鼠6-K-PGF1α、TXB2、Bcl-2、Bax含量比较（）

表2 各组产后子宫内膜炎大鼠6-K-PGF1α、TXB2、Bcl-2、Bax含量比较（）

组别 n正常对照组 10模型组 10益母草浸膏低剂量组 10 Bax 0.47±0.07 1.56±0.13△△0.97±0.05*益母草浸膏高剂量组 10 298.99±34.11**102.7±8.73**0.69±0.11**0.83±0.13**三七总皂苷组 10 329.71±19.28*109.23±5.84**0.58±0.08*0.91±0.11**6-K-PGF1α（pg/mL）TXB2（pg/mL） Bcl-2 303.78±15.14 125.32±4.47 0.74±0.04 379.92±13.21△△88.92±9.13△△0.29±0.03△△325.12±35.07**91.34±5.64*0.55±0.17*

2.4 各组产后子宫内膜炎大鼠Bcl-2、Bax比较 见表2，图1。与正常对照组相比，模型组Bax升高，而Bcl-2呈现降低（P＜0.01）；益母草高、低剂量组和三七总皂苷组则可改善模型组这种情况，使Bax降低，Bcl-2升高（P＜0.05或P＜0.01），而益母草高、低剂量组和三七总皂苷组之间，益母草浸膏高、低剂量组之间无明显差异（P＞0.05）。

图1 各组产后子宫内膜炎大鼠Bcl-2、Bax含量比较

3 讨 论

产妇在进行分娩后，通过子宫内膜的再生，胎盘剥离面发生修复，一般情况下，经过5~6周，子宫会渐渐地恢复到妊娠之前的状态。如果在胎盘分娩后6周，子宫仍不能恢复到之前的状态，则为产后子宫复旧不全［6］。其最主要的临床表现为，血性恶露的量增多、时间有所延长、浑浊、恶臭；腰部、下腹部疼痛等。据统计数据表明，在我国，每年有2000万左右的产妇，但有70%的产妇在生产后的自然恢复过程中，存在不同程度的子宫收缩不良的现象［7］。有报道称，这种情况呈现逐年上升趋势［8］。导致其的原因多而复杂，其中产后子宫内膜炎是较为重要的方面，是导致产后子宫复旧不全最重要、最常见的一个原因［9］。产后子宫内膜炎是细菌经过胎盘的剥离面入侵从而导致的感染，其严重威胁产妇身心健康，造成严重的后果，影响患者生活质量。按照中医理论来说，产妇往往失血耗气、正气亏损、脾虚、气虚，营阴耗损导致阴虚内热，使得血脉凝结致瘀［10］；或者由于产妇受到风寒，血运不畅而致瘀［11］；或产妇情志抑制，气机郁结而致瘀［12］。总而言之，中医认为多虚多瘀是产后子宫内膜炎的主要发病机制，其病因以气虚血瘀最为多见［13］。

子宫内膜发生炎症的时候，细菌合成的脂多糖会诱导子宫的内膜上皮细胞、间质细胞、粒细胞等，启动细胞内信号的传导程序，使核因子κB被激活，从而使IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子转录增加，同时这些因子又进一步促进核因子κB的激活，使大量炎症因子发生聚集，并最终导致炎症因子超量地被释放出来［14］，浸润组织，这又进一步诱导，使子宫内膜的诱导型一氧化氮合酶增多，从而催化产生很多一氧化氮，导致血流增加，促进水肿和渗出，并与前列腺素发生作用，6-K-PGF1α的含量增加，TXB2的含量降低，使PGI2/TXA2的比例发生失调，导致溶酶体的膜通透性变大，致使血量增加［15］。细胞凋亡作为一种存在于生命发展各个时期的生理过程，在子宫内膜的变化中也不例外，对于子宫内膜，其能否维持功能的稳定以及周期性的变化，细胞凋亡的调控起到关键的作用［16］。干预、调控子宫内膜细胞内的凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax，对产后子宫内膜炎有着重要的作用，能够促进产后子宫的复旧。MDA是一种氧化应激的标志物，拥有极强的细胞毒性，它可用以衡量细胞的损伤程度。与之相对的为SOD，其对机体具有一定的保护效应。

三七为伞形目五加科植物，具有散瘀止血，消肿定痛之功效，主治咯血，吐血，衄血，便血，崩漏等，对恶露不绝也具有很好的治疗作用［17］。而益母草具有利尿消肿、收缩子宫的作用，是历来治疗妇科病的重要药物［18］。通过实验发现，三七组和益母草浸膏各组之间数据没有显著差异，说明两者对产后子宫内膜炎作用功效相似；而与模型组相比，益母草浸膏可以明显降低产后子宫内膜炎大鼠血清中的IL-1β、IL-6和TNF-α含量，从而抑制炎症因子的表达，减轻炎症损伤；降低MDA、提高SOD含量，降低氧自由基损伤；上调Bcl-2蛋白、下调Bax蛋白的表达，降低子宫内膜的细胞凋亡；减弱6-K-PGF1α，增强TXB2的表达，促进其动态平衡，使血止但不留瘀，通过以上的可能调节机制，促进子宫内膜的增生、修复，对产后子宫内膜炎起到保护和改善作用，从而起到促进产后子宫复原的功效。

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Experimental Study on the Effect of Motherwort Concrete on Postpartum Endometritis

CHEN Xiaoyan，RAN Huayang，ZHANG Jinan.
Chongqing Hospital of Traditional Chinese Medicine，Chongqing 400021，China.

Objective：To observe the effect of motherwort concrete on rats with postpartum endometritis and investigate its possible mechanism.Methods：According to random number table method，rats were randomly divided into five groups：control group，model group，motherwort concrete administration group（including motherwort concrete low dose group and high dose group）and a positive control group of PNS.Escherichia coli was used to establish infection models.SOD，MDA and IL-1β，IL-6 and TNF-α were tested by ELISA.6-K-PGF1α and TXB2 were tested by RIA kit test method.Bcl-2，Bax were tested by WB.Results：Compared with the model group，motherwort concrete reduced the content of MDA and IL-1β，IL-6 and TNF-α，increased the content of SOD，reduced the expression of 6-K-PGF1α，and increased the expression of TXB2，up-regulated Bcl-2 level and down-regulated Bax level.There was no significant difference on the indexes between the motherwort concrete administration group and the positive control group of PNS（P＞0.05）.Conclusion：Motherwort concrete can inhibit the expression of inflammatory factors，reduce the oxygen free radical damage，apoptosis of the endometrium，the expression of 6-K-PGF1α and increase the expression of TXB2，thereby adjusting the ratio between PGI2/TXA2，promoting its dynamic equilibrium，stopping the bleeding without leaving silt，By the adjustment mechanism above，it promotes endometrial hyperplasia repair，protects and improves endometrium function against postpartum endometritis，thus contributing to the postpartum uterine involution.

Postpartum endometritis；Motherwort concrete；Experimental study

R285.5

A

1004-745X（2017）01-0050-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.01.014

2016-08-26）

重庆市中医特色诊疗工程技术研究中心能力提升项目（cstc2014pt-gc10003）

△通信作者（电子邮箱：1307198425@qq.com）