PPTG、Survivin和bFGF mRNA在非小细胞肺癌中的表达及其意义

赵淑灿 郑定容



PPTG、Survivin和bFGF mRNA在非小细胞肺癌中的表达及其意义

赵淑灿1郑定容2

目的 检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织中垂体肿瘤转化mRNA (PPTG mRNA)、生存素mRNA (Survivin mRNA)和碱性成纤维细胞生长因子mRNA(bFGF mRNA)的表达水平，探讨其在NSCLC中的诊断价值。 方法 随机选择NSCLC患者原发癌病灶组织86例为NSCLC组，其中肺鳞癌35例、肺腺癌38例、其他型肺癌13例；淋巴结转移46例、无淋巴结转移者40例；肿瘤高分化36例、中分化24例、低分化26例；TNM Ⅰ期22例、Ⅱ期24例、Ⅲ期20例、Ⅳ期 20例，同时取癌旁正常肺组织86例为癌旁组，肺部为良性疾病肺组织80例为对照组，采用实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测四组患者组织的PPTG、Survivin和bFGF mRNA的表达。 结果 PPTG、Survivin和bFGF mRNA在NSCLC组、癌旁组的组织表达水平高于对照组(P<0.05)，在NSCLC组中的表达高于癌旁组(P<0.05)；PPTG、Survivin和bFGF mRNA在腺癌、鳞癌组织表达均明显高于其他组，在腺癌组织中的表达高于鳞癌(P<0.05)，其与肺癌组织分级、TNM分期及淋巴结转移呈密切正相关性(P<0.05)，而与患者的性别与年龄无关(P>0.05)。 结论 PPTG、Survivin和bFGF mRNA基因在NSCLC中呈高表达，其表达水平有助于临床分期、组织学分级和淋巴结转移的判断。

非小细胞肺癌；实时荧光聚合酶链反应；垂体肿瘤转化；生存素；碱性成纤维细胞生长因子

碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor, bFGF) mRNA是作用广泛的有丝分裂原，与肿瘤的分期、转移和预后密切相关，多种肿瘤组织过度表达bFGF[1]；垂体肿瘤转化(Pituitary Tumor Transforming,PPTG) mRNA是一种强有力的肿瘤转化基因，与肿瘤发生密切相关，在多种肿瘤中呈高表达[2]；生存素(Survivin) mRNA是凋亡抑制蛋白家族新近发现的一个成员，具有抑制细胞凋亡又有促进细胞增殖的双重功能，在多种恶性肿瘤组织中survivin mRNA呈异常高表达[3]。非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一，其死亡率居各恶性肿瘤之首[4]，PPTG、Survivin和bFGF的高表达能促进细胞增殖转化，在肿瘤形成过程中起重要作用[5]，本文实时荧光聚合酶链反应(Real time polymerase chain reaction,RT-PCR)研究原发性NSCLC患者原发癌病灶组织与PPTG、Survivin和bFGF mRNA的基因表达情况，并分析其与NSCLC生物学行为的关系，现将结果报告如下。

资料与方法

一、一般临床材料

随机选择2013年1月-2015年12月本院呼吸与危重症医学科诊治的NSCLC 86例为NSCLC组，所有病人术前均未行化疗和放疗等其他治疗，病理诊断明确，其中男性50例、女性36例；年龄30岁-78岁，平均(55.4±8.7)岁，≥60岁患者56例，<60岁患者30例；经WHO肺癌分类标准分类[6]：肺鳞癌35例、肺腺癌38例、其他型肺癌13例；淋巴结转移46例、无淋巴结转移者40例；高分化36例、中分化24、低分化26例；按TNM分期标准[7]：TNM Ⅰ期22例、Ⅱ期24例、Ⅲ期20例、Ⅳ期 20例，同时取癌旁正常肺组织86例为癌旁组，肺部为良性疾病肺组织80例为对照组，其中男性48例、女性32例，年龄30岁-78岁，平均(56.7±8.8)岁，≥60岁患者50例，<60岁患者30例，包括肺心病10例、肺炎18例、肺气肿22例、结节病8例、慢性支气管炎10例、支气管扩张12例。所有患者均本研究所有患者都经本院医学伦理委员会批准，患者知情并签署知情同意书，以上各组份研究对象年龄和性别构成比等无统计学差异(P>0.05)，均都具有可比性。

二、试剂及仪器

Taq酶、dNTP和 2×缓冲液购自上海翊圣生物科技有限公司；QIAamp DNA minikit DNA提取试剂盒购自上海浩然生物技术有限公司；总RNA提取试剂盒(TRIzol法) 购自北京百泰克生物技术有限公司； RT-PCR仪器采用美国MJR Option(2) 实时荧光FQ-PCR分仪，严格按照说明书进行操作及判定结果，结果表达量采用2-△△CT表示[8]。

三、PCR引物序列

参照Tsuyoshi等方法[9]设计正反及探针义链，内参基因为β-actin均由FAM标记，由广州中山大学达安基因有限公司合成，(见表1)，与设计的目的片段大小一致结果(见图1)。

表1 引物与探针序列

注： 1为PPTG阳性样本， 2为bFGF阳性样本， 3为Survivin阳性样本，N为阴性对照， P1为PPTG阳性对照，P2为bFGF阳性对照， P3为Survivin阳性对照，M为 100 bp DNA。

图1 PPTG、Survivin和bFGF mRNA的基因PCR结果

四、统计学方法

数据采用Spss18 for Windows软件进行数据分析，计量资料以±s表示，两组间计量资料比较采用t检验，多组计量资料比较采用F检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、三组患者的组织PPTG、Survivin和bFGF mRNA表达比较 PPTG、Survivin和bFGF mRNA在NSCLC组、癌旁组的组织表达水平高于对照组(P<0.05)，在NSCLC组中的表达高于癌旁组，P<0.05，(见表2)。

表2 三组患者的组织PPTG、Survivin和bFGF mRNA表达比较

二、不同类型癌组织PPTG、Survivin和bFGF mRNA表达比较

PPTG、Survivin和bFGF mRNA在腺癌与鳞癌均明显高于其他组，在腺癌组组中的表达高于鳞癌组，P<0.05,(见表3)；PPTG、Survivin和bFGF mRNA在肺癌TNM分期及淋巴结转移呈密切正相关性，P<0.05,(见表4，5)。

表3 PPTG、Survivin和bFGF mRNA在不同类型癌表达比较

表4 PPTG、Survivin和bFGF mRNA在TNM分期表达比较

表5 PPTG、Survivin和bFGF mRNA在转移情况表达比较

三、NSCLC患者的性别与年龄对PPTG、Survivin和bFGF mRNA的表达比较

在NSCLC中PPTG、Survivin和bFGF mRNA的表达与患者的性别与年龄无关，P>0.05,(见表6)。

表6 性别与年龄对PPTG、Survivin和bFGF mRNA的表达比较

讨 论

近年来，肺癌的发病率及死亡率在全球呈上升趋势，其发病率和死亡率是世界上最高的恶性肿瘤，现已经严重威胁人类的身心健康，其中NSCLC在肺癌中约占80%-85%[10]。正常细胞的抑癌基因和原癌基因的突变或(和)异常表达导致细胞的增殖、分化和凋亡过程失控,机体失去对细胞生长的正常调控,形成肿瘤。大量的临床研究表明肿瘤的发生与细胞凋亡的异常有关[11]，本研究随机选择本院86例NSCLC患者作为研究对象，研究PPTG、Survivin和bFGF mRNA在NSCLC中的表达和临床意义。

PTTG最初是由Pei等在1997年由垂体肿瘤中发现具有强致癌作用的癌基因[12]，在人体的多种正常组织(如正常成人大脑、睾丸、胚胎肝和脾脏等)存在无表达或者低表达，PTTG在多种肿瘤细胞(如早幼粒白血病细胞、腺癌细胞和垂体癌细胞)等发现高表达[13]。Survivin是哺乳动物类细胞凋亡抑制蛋白的重要成员之一，定位于不稳定性较高的染色体17q25上,具有促使细胞转化，表达于细胞周期的G2/M期，调节细胞有丝分裂和抑制细胞凋亡的作用，广泛表达于各种类型肿瘤组织之中，Survivin的表达增高随着肿瘤的生长浸润而表达逐渐增强,Survivin与多种肿瘤的预后密切相关[14]。bFGF是由成纤维细胞分泌的生长因子，是一种强有力的光谱有丝分裂剂，具有促进组织损伤部位内皮细胞分化和血管新生的能力，在在多种恶性肿瘤患者血清中明显增高[15]。本研究结果显示，肺癌组织中的PPTG、Survivin和bFGF mRNA表达明显高于正常癌旁组织，鳞癌患者PPTG、Survivin和bFGF mRNA表达明显高于腺癌患者，提示PPTG、Survivin和bFGF mRNA水平随疾病进展而升高，并且与其表达高低与患者的TNM分期及淋巴结转移呈密切相关性，由此可见，PPTG、Survivin和bFGF mRNA存在于正常人体内，与肿瘤血管密度和恶性生物学行为明显相关，其过高表达则可能提示肿瘤发生或预示肿瘤的不良转归，其机制可能是PPTG高表达直接引起了肺癌细胞转化，导致肺癌的发生；bFGF可能通过自分泌和(或)旁分泌作用于肺癌细胞，刺激肺部组织血管的生成，为肺癌提供营养物质，促进肺癌的生长、发展；PPTG和bFGF可能通过促进Survivin的表达来抑制肺癌细胞凋亡，有丝分裂促进转化细胞的异常增殖,肺癌细胞的无限增殖与凋亡受阻，最终导致肺癌的发生；PPTG、Survivin和bFGF mRNA的表达呈明显的正相关，提示PPTG、Survivin和bFGF mRNA的表达贯穿于肺癌变的全过程，三者在肺癌的发生、发展中可能存在协同作用。PPTG、Survivin和bFGF mRNA能成为反映肺癌生物学行为及侵袭性的重要指标，通过检PPTG、Survivin和bFGF mRNA表达可以对NSCLC预后进行一定的判断，以更好地指导临床治疗。

综上所述，PPTG、Survivin和bFGF mRNA的基因表达在NSCLC中高表达，其表达水平有助于临床分期组、织学分级和淋巴结转移的判断。

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Expression and significance of PPTG, Survivin and bFGF mRNA in non-small cell lung cancer

ZHAOShu-can,ZHENGDing-rong

ComprehensiveMedicalWard,ShantouCentralHospital,Shantou,Guangdong515031,China

Objective To detect the expression of PPTG mRNA, Survivin mRNA and bFGF mRNA in NSCLC patients, and to explore their diagnostic value in NSCLC. Methods 86 NSCLC patients with primary cancer lesion tissue were randomly selected, including 35 cases of lung squamous cell carcinoma, 38 cases of lung adenocarcinoma, and 13 of other types of lung cancer. There were 46 cases with lymph node metastasis and 40 cases without lymph node metastasis. 36 cases were well-differentiated tumors, 24 cases of median-differentiated tumors, and 26 cases of poorly differentiated tumors. 22 cases were at TNM stage Ⅰ, 24 cases at stage Ⅱ, 20 cases at stage Ⅲ, and 20 cases at stage Ⅳ. The normal lung tissue besides lung cancer were collected in the peritumoral group (86) and the control group (80). The expression of PPTG, Survivin and bFGF mRNA were detected by RT-PCR. Results The expression of PPTG, Survivin and bFGF mRNA in the NSCLC group and the peritumoral group was higher than that in the control group (P<0.05), and the expression in the NSCLC group was higher than that in the peritumoral group (P<0.05). The expression of PPTG, Survivin and bFGF mRNA in adenocarcinoma and squamous cell carcinoma tissues were significantly higher than other tissues, and they was higher in adenocarcinoma than in squamous cell carcinoma (P<0.05). Lung cancer grade, TNM stage and lymph node metastasis were closely positively correlated (P<0.05), regardless of patient's gender and age (P>0.05). Conclusion PPTG, Survivin and bFGF mRNA gene are highly expressed in NSCLC patients, which can help to make the clinical stage, histological grade and lymph node metastasis judgment.

NSCLC; real time polymerase chain reaction; pituitary tumor transforming; survivin; basic fibroblast growth factor

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.03.044

1. 515031 广东 汕头，汕头市汕头中心医院内科综合病区 2. 518102 广东 深圳，深圳市宝安区中心医院社区健康服务管理中心

2016-07-14]