胃癌合并Hp-L感染患者MIF和MMP-9表达变化及其与血清炎症因子的关系

陈晓露，罗 昊△，吴蓉宜

(1.乐山职业技术学院病理教研室，四川乐山 614000；2.四川省成都市第六人民医院病理科 610051)

胃癌合并Hp-L感染患者MIF和MMP-9表达变化及其与血清炎症因子的关系

陈晓露1，罗 昊1△，吴蓉宜2

(1.乐山职业技术学院病理教研室，四川乐山 614000；2.四川省成都市第六人民医院病理科 610051)

目的 研究胃癌合并幽门螺杆菌L型(Hp-L)感染患者促黑激素释放抑制因子(MIF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达变化及其与血清炎症因子的关系。方法 用免疫组织化学法检测50例胃癌患者(观察组)和50例健康志愿者(对照组)胃组织中MIF与MMP-9的表达，用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6在两组受试者血清中的水平，并用革兰染色镜检两组受试者胃组织中的Hp感染情况。结果 观察组中Hp-L感染阳性者有38例，感染率为76.00%，明显高于对照组12例(24.00%)，差异有统计学意义(P<0.01)。观察组胃组织中MIF、MMP-9的表达强于对照组，同时合并Hp-L感染阳性者组织中MIF、MMP-9的表达强于Hp-L感染阴性者，差异有统计学意义(P<0.01)。观察组患者血清IL-1β、IL-6的浓度高于对照组，合并Hp-L感染阳性者IL-1β、IL-6的浓度高于Hp-L感染阴性者，差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MIF、MMP-9、IL-1β、IL-6与胃癌的发生、发展有关，其机制也与Hp-L感染有关。

螺杆菌，幽门；螺杆菌感染；胃肿瘤；白细胞介素1β；白细胞介素6

胃癌已经成为我国严重威胁人类健康和生命的恶性肿瘤之一，可导致呕吐、上腹不适、进食后饱胀等症状，且有逐年增高趋势，严重威胁着人们的身体健康[1]。胃癌在任何年龄阶段均可发生，其中以40～60岁的中老年常见，男女发病比率约为2∶1，但其发病机制尚不十分明确，可能与生活习惯、环境因素、精神因素、遗传素质、Hp-L感染等多种因素有关，也与慢性胃炎,胃息肉,胃黏膜异形增生和肠上皮化生,手术后残胃有关[2]。有研究表明，60%以上的胃癌患者均感染幽门螺杆菌(Hp)，而Hp-L是HP的异变类型，具有更强的致癌作用，其感染是影响胃癌侵袭和转移的重要原因之一，感染后可致使胃黏膜慢性炎症反应的发生，进而损伤周围正常组织，使黏膜上皮细胞急剧增殖，进一步导致患者的病情恶化[3]。因此，如何有效诊治和监测胃癌及其病情变化对提高患者临床疗效具有重要的意义。对此，本研究通过检测胃癌患者和正常人员促黑激素释放抑制因子(MIF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达变化及其血清炎症因子的浓度变化，探讨上述因子与Hp-L型感染的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年5月至2015年5月在成都市第六人民医院经胃镜病理活检证实为胃癌的患者50例作为观察组，其中男32例，女18例，年龄33～65岁，平均(45.23±7.12)岁。同时，选取50例健康志愿者作为对照组，其中男28例，女22例，年龄35～68岁，平均(47.05±7.99)岁。两组资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学法 按照Elivision两步法操作，各抗体最佳稀释浓度为MIF(1∶120)，MMP-9(1∶150)，各因子阳性对照为MIF(乳腺癌)，MMP-9(肝癌)，阴性对照均以磷酸盐缓冲液(PBS)代替。所有切片均由3%H2O2阻断内源性过氧化物酶，抗原加热修复，4 ℃孵育过夜，二氨基联苯胺(DAB)显色。

1.2.2 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测 用抗人白细胞介素(IL)-1β、IL-6抗体包被酶标板，血清中的人IL-1β、IL-6会与包被抗体结合，洗去游离部分，加入辣根过氧化物酶标记的抗人IL-1β、IL-6抗体，使其与结合在包被抗体上的人IL-1β、IL-6结合，再次洗去游离部分，加入TMB显色，在辣根过氧化物酶催化下，TMB呈蓝色，加入终止液后呈黄色，用酶标仪分别测吸光度，计算血清中IL-1β、IL-6的浓度。

1.2.3 革兰染色法 革兰染色包括怵然、煤染、脱色、复染等步骤，具体如下：石蜡切片，结晶紫初染30 s，冲洗，碘液复染1 min，95%乙醇脱色30 s，冲洗，稀释复红复染2 min，冲洗，中性树胶封片，油镜观察。

1.2.4 结果判定

1.2.4.1 MIF、MMP-9免疫组织化学结果判断[4]MIF、MMP-9均定位于细胞质，阳性为细胞质内出现棕黄色颗粒，按染色强度及阳性细胞数占肿瘤细胞的百分比综合计分。染色强度；无染色0分；淡黄色1分；棕黄色2分；棕褐色3分。阳性细胞数：0～5% 0分；>5%～25% 1分；>25%～50% 2分；>50% 3分。把染色强度得分与阳性细胞数得分相加：0～3分为阴性，≥3分为阳性。

1.2.4.2 Hp-L检测结果判断[5]油镜下(10×100)阅片并计数，每例观察10～15个视野，取其平均数，均数大于或等于20为阳性，<20或未查见为阴性，革兰染色阳性呈蓝紫色，阴性呈红色，Hp及其L型多呈革兰染色阴性。

2 结 果

2.1 两组受试者Hp-L感染情况 经革兰染色镜检，观察组中Hp-L感染阳性者有38例，感染率为76.00%，明显高于对照组12例(24.00%)，差异有统计学意义(P<0.01)。

2.2 两组受试者组织中MIF、MMP-9的表达 观察组胃组织中MIF、MMP-9的表达强于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

2.3Hp-L感染阳性与Hp-L感染阴性组织中MIF、MMP-9的表达情况比较 在观察组中，合并Hp-L感染阳性者组织中MIF、MMP-9的表达强于Hp-L感染阴性者，差异有统计学意义(P<0.01)，而在对照组中，MIF、MMP-9的表达差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表1 两组受试者组织中MIF、MMP-9的表达情况

表2 Hp-L感染阳性与Hp-L感染阴性组织中MIF、MMP-9的表达情况比较

2.4 两组受试者血清中炎症因子的浓度比较 观察组患者血清IL-1β、IL-6的浓度高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，见表3。

表3 两组受试者血清中IL-1β、IL-6的浓度比较

2.5Hp-L感染阳性与Hp-L感染阴性血清中炎症因子的浓度比较 在观察组中，合并Hp-L感染阳性者IL-1β、IL-6的浓度高于Hp-L感染阴性者，差异有统计学意义(P<0.05)，而在对照组中，IL-1β、IL-6的浓度差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表4 Hp-L感染阳性与Hp-L感染阴性患者血清中IL-1β、IL-6的浓度比较

3 讨 论

随着社会的进步，医学的发展，预防和控制胃癌已成为人类关注的问题之一。研究指出，Hp是人体内最常见的细菌病原体之一，寄居于人体胃幽门部[6]。很多人受到过Hp的感染，这种细菌感染人体后，首先引发慢性胃炎，导致胃萎缩和胃溃疡，严重者则发展成胃癌。据统计，在较早年龄初次感染Hp的人群发生萎缩性胃炎及胃癌的概率较高，且胃癌病死率的高低与Hp感染呈平行关系。据此，专家们认为，及早发现Hp感染者，及时而有效地杀灭Hp，可以有效预防和控制胃癌的发生[7-8]。

有研究发现，MIF在参与胃部炎症发生的过程与Hp-L感染有有一定的联系[9]。主要体现在胃黏膜炎症组织中，Hp-L型可刺激巨噬细胞与T细胞分泌MIF，增加MIF的表达。

而包泱等[10]研究显示，MMP-9是一种基质金属蛋白酶，在血管形成过程中具有强力的酶催化作用，其表达水平与胃癌的发生、发展有关，其在胃癌细胞的侵袭转移中起关键性作用。对此，本研究通过观察胃癌患者和正常人员的MIF、MMP-9表达变化及其血清炎症因子的浓度变化，发现观察组胃组织中MIF、MMP-9的表达强于对照组，且胃癌合并Hp-L感染阳性者组织中MIF、MMP-9的表达强于Hp-L感染阴性者，此结果与已有研究基本相符，表明二者的表达与胃癌的发生、发展有关，且Hp-L感染可上调胃癌组织中MIF、MMP-9的表达[11]。本研究结果提示，胃癌在癌变过程中，患者在感染Hp-L后，Hp-L可合成分泌大量的毒性细胞因子，引起胃部的炎症反应及损伤胃黏膜组织，进而使胃部微环境平衡进一步受到破坏，使正常细胞更易发生癌变。而MIF是体内一种重要的多功能细胞因子，主要由T细胞、单核细胞、巨噬细胞分泌，可以抑制单核细胞和巨噬细胞的移动，使巨噬细胞活化从而提高巨噬细胞的黏附、吞噬和破坏能力，故在癌变过程中，可能由于癌细胞引起巨噬细胞的吞噬反应，使MIF的分泌增多，随着MIF表达水平上升，它又可以激活巨噬细胞，使其释放氧自由基和NO，损害正常细胞，使细胞发生恶性病变，从而形成恶性循环，进一步促进胃癌的发生、发展。而MMP-9是基质金属蛋白酶家族中相对分子质量最大的酶，被激活后可以产生Ⅳ型胶原酶，破坏靠近正常细胞表面的细胞外基质中Ⅳ型、Ⅴ胶原蛋白，可以降解血管基底膜，促进内皮细胞的移动迁徙，使血管形成加快，故在癌变过程中，可能由于需要生成肿瘤血管，癌细胞促使大量MMP-9的合成与分泌以促进血管的生成，从而进一步促进癌细胞的发生、发展[12]。因此，胃癌病变可引起组织中MIF、MMP-9表达上升，而Hp-L感染可进一步促使胃癌的发生、发展，引起更剧烈的恶性病变，使MIF、MMP-9表达水平更高。

此外，本研究还发现观察组患者血清中IL-1β、IL-6的浓度高于对照组，胃癌合并Hp-L感染阳性者血清中IL-1β、IL-6的浓度高于Hp-L感染阴性者，说明Hp感染后炎性反应释放各种细胞因子，如IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10等，从而促进了胃癌的发展。此结果提示，在胃癌发生、发展过程中，由于损害了周围的正常细胞，可引起机体的炎症反应、免疫反应等一系列病理反应变化。而IL-1是一种重要的炎性介质，具有介导炎症发生的作用，主要在细胞免疫激活过程中起作用，其活性主要由IL-1β介导，IL-1β则是一种多效性、促炎性细胞因子，是体内调节免疫和炎症反应的核心介质，主要由单核细胞和巨噬细胞分泌，在炎症信号刺激下，其合成和分泌水平会迅速升高[13-14]。IL-6是白细胞介素家族中的一员，由活化T细胞和成纤维细胞产生，可通过促进原始骨髓源细胞的生长和分化，刺激参与至炎症反应、免疫反应的细胞增殖和分化，进而介导炎症反应和免疫反应[15-16]。因此，胃癌病变由于引起机体的炎症反应、免疫反应，故可引起患者血清中IL-1β、IL-6的上升，而Hp-L感染可通过损伤胃黏膜组织引起炎症反应，故患者合并Hp-L感染可使IL-1β、IL-6表达水平进一步上升，因此检测患者体液中IL-的6水平可反映患者的病情变化。

综上所述，MIF、MMP-9、血清炎症因子(主要是IL-1β、IL-6)与胃癌的发生、发展有关，也与Hp-L感染有关。检测患者体内MIF、MMP-9、血清炎症因子表达水平的变化，有利于医师进一步诊治胃癌及掌握患者病情。

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陈晓露(1977-)，副教授，本科，主要从事病理学、免疫学方面研究。△

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