NF-κBp65、EGF与EGFR在口腔扁平苔藓和口腔鳞癌中的表达及临床意义*

周 骢，伍宝琴，张齐梅，王忠朝

(西南医科大学附属口腔医院口腔内科，四川泸州 646000)

NF-κBp65、EGF与EGFR在口腔扁平苔藓和口腔鳞癌中的表达及临床意义*

周 骢，伍宝琴，张齐梅，王忠朝

(西南医科大学附属口腔医院口腔内科，四川泸州 646000)

目的 研究口腔扁平苔藓(OLP)及口腔鳞状细胞癌(OSCC)中核因子-κBp65(NF-κBp65)、表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGFR)的表达及临床意义。方法 采用免疫组织化学SP法检测口腔黏膜组织中NF-κBp65、EGF与EGFR的表达，包括20例正常口腔黏膜(NOM)组织，20例OLP组织，20例OSCC组织。结果NF-κBp65在NOM、OLP、OSCC的表达率分别为10%、65%、75%，3组间差异有统计学意义(P<0.05)。EGF在NOM、OLP、OSCC中的表达率为25%、45%、65%，3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；EGFR在NOM、OLP、OSCC的表达为20%、55%、70%，3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。NF-κBp65的表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。EGFR表达与OSCC组织学分型有关(P<0.05)。NF-κBp65与EGFR在OLP中的表达呈正相关(P<0.05)。NF-κBp65、EGF和EGFR在OSCC中表达呈正相关(P<0.05)。结论NF-κBp65、EGF和EGFR蛋白的表达在OLP向OSCC的转变中作为OSCC早期诊断的客观指标之一。

癌，鳞状细胞；扁平苔藓,口腔；口腔肿瘤；黏膜；表皮生长因子；受体，表皮生长因子；NF-κBp65

口腔扁平苔藓(oral lichen planus，OLP)是发生于口腔黏膜的慢性炎性疾病，临床分型中糜烂型OLP癌变率约为0.5%。核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)是具有多向性转录调节作用的转录因子，在细胞信号传递中起着非常重要的作用，在一些免疫性疾病中均有表达，在OLP中也有报道[1]。免疫化学研究发现NF-κB p65在口腔癌的早期就被激活[2]。表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)是一种强有力的角质形成细胞分裂剂，通过表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)介导对多种组织细胞具有促进增殖作用。EGFR是一种具有酪氨酸蛋白激酶活性多功能跨膜糖蛋白，在细胞生长、增殖和分化中起着重要的作用，EGFR与口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的关系也曾有报道[3]。NF-κB p65、EGF、EGFR三者在由OLP向OSCC转变过程中所起的作用目前研究较少，本文采用免疫组织化学SP法联合检测NF-κB p65、EGF、EGFR在OLP和OSCC中的表达和分布情况，为探索OLP向OSCC发展提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集本院2011-2012年临床资料完整的病理标本40例，其中OLP 20例，OSCC 20例，另取创伤清创取得正常口腔黏膜组织20例为对照。纳入、排除标准：OLP、OSCC患者都经病理确诊；所有患者近6个月内均未接受局部或全身肾上腺皮质激素治疗，并且OSCC患者未接受放疗、化疗。20例OLP患者(糜烂型11例，非糜烂9例)中女13例，男7例；平均年龄57.7岁，≥50.0岁的13例，<50.0岁7例。20例OSCC标本患者中女9例，男11例，平均年龄62.6岁，≥50.0岁15例，<50.0岁5例。OSCC依据国际上TNM分类标准临床分期高分化8例，中分化7例，低分化5例。本研究前经伦理委员会审查批准，所有患者都签写知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 所有标本经过4%中性甲醛固定，常规石蜡包埋，进行4 μm切片，分别用苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化和免疫组织化学(SP法)染色观察蛋白表达情况。NF-κB p65小鼠抗人单克隆抗体，兔抗人EGF、EGFR单克隆抗体、SP免疫组织化学试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色、苏木素复染液均购自北京中杉金桥生物科技有限公司。严格按试剂盒说明书方法染色，所有切片染色均在相同条件下进行。用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗做阴性对照，肺鳞癌组织做NF-κB p65、EGF、EGFR的阳性对照。

1.2.2 结果判断 所有免疫组织化学染色结果均由两位病理医师在不知病例资料的情况下盲法阅片判断。医师对每张切片在高倍镜下观察，高倍镜下选取5个视野(每个视野观察细胞数不少于200)，按阳性细胞所占百分比及着色深浅进行结果判定。NF-κB p65蛋白阳性着色为细胞质出现棕黄色颗粒物质，EGF和EGFR蛋白阳性着色均为棕黄色颗粒样物质，位于细胞质和细胞膜表面。免疫组织化学的评分标准分为4级，(1)按切片中细胞着色深浅评分：0分，无显色；1分，浅黄色；2分，棕黄色；3分，棕褐色。(2)按阳性细胞数占同类细胞数的百分比分为4级，阳性细胞数小于10%为0分，10%～<30%为1分，30%～70%为2分，>70%为3分。两种评分相加，0～<2分为(-)，2～<4分为(+)，3～<5分为(++)，5～6分为(+++)；统计时(-)为阴性，其余为阳性。

1.3 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件进行分析，计数资料用率表示，组间采用χ2检验；相关性检验采用Spearman相关分析，检验水准α=0.05，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

NF-κB p65在正常口腔黏膜(normal oral mucosal，NOM)、OLP及OSCC中细胞质或细胞核中表达。EGF和EGFR在NOM、OLP及OSCC中细胞质和(或)细胞膜表面表达。NF-κB p65、EGF和EGFR蛋白分别在NOM、OLP 及OSCC中的表达差别有统计学意义(P<0.05)，但3种蛋白分别在OLP与OSCC中的表达差别没有统计学意义(P>0.05)，见图1～3和表1。NF-κB p65蛋白的表达与患者年龄、OLP是否糜烂型、OSCC组织学分型无关(P>0.05)，但与淋巴结转移有关(P<0.05)。EGF的表达与患者年龄、OLP是否糜烂、OSCC组织学分型、淋巴结转移无关(P>0.05)。EGFR表达与患者年龄、OLP是否糜烂型、OSCC淋巴结转移无关(P>0.05)，但与OSCC组织学分型有关(P<0.05)，见表2。NF-κB p65、EGF 与EGFR在OLP，OSCC中表达的相关性分析表明，在OLP中NF-κB p65与EGFR的表达呈正相关(r=0.471,P=0.036)。在OSCC中NF-κB p65与EGF的表达呈正相关(r=0.560,P=0.010)，NF-κB p65与EGFR的表达呈正相关(r=0.545,P=0.013)，EGF与EGFR的表达呈正相关(r=0.661,P=0.001)。

表1 NF-κB p65、EGF和EGFR蛋白在NOM、OLP及OSCC中的表达[n(%)]

A:NOM(×200)；B：OLP(×200);C:OSCC(×400)。

图1 NF-κB p65在NOM、OLP、OSCC组织中的表达(SP)

A:NOM(×200)；B：OLP(×200);C:OSCC(×400)。

图2 EGF在在NOM、OLP、OSCC组织中的表达(SP)

A:NOM(×200)；B：OLP(×200);C:OSCC(×400)。

图3 EGFR在在NOM、OLP、OSCC组织中的表达(SP)

3 讨 论

OLP是一种原因不明的口腔黏膜慢性炎症性免疫性疾病。OLP是一种癌前状态，长期糜烂病损有恶变可能。OSCC在颌面部的恶性肿瘤中占有80%以上，本研究通过NF-κB p65、EGF与EGFR在OLP和OSCC中的表达，对于OLP可能转变成OSCC的早期诊断提供可能的理论依据。

本研究显示NF-κB p65从NOM、OLP到OSCC的表达阳性率逐渐升高，说明NF-κB p65的活化可促使OLP炎症反应加重，有研究也显示NF-κB p65是主要免疫应答的调节器，在导致OLP炎性反应迁延不愈的过程中起到了重要作用[4]；Balkwill等[5]研究发现所有癌症中估计15%～20%与炎症有关，特别是慢性炎症，本研究在OSCC中表达最高，可能是炎症使NF-κB p65被不恰当的激活发生癌变，但具体的百分率还有待进一步研究。NF-κB p65蛋白的表达与淋巴结转移有关，说明NF-κB p65不仅在炎症表达中起作用，也可能在口腔肿瘤的转移中起一定的作用；在OLP中糜烂型比非糜烂型阳性率高，OSCC中有淋巴结转移者较无转移者阳性率高，随着分化程度的降低其阳性率表达降低，推测NF-κB p65在口腔黏膜早期癌变过程中起了一定作用。

EGF与EGFR结合的形式提高肿瘤浸润[6]，EGFR在肿瘤中高表达，及其在肿瘤细胞生长、分化中起着重要作用[7]，使EGFR成为具有良好前景的肿瘤诊断和治疗靶点[8]。本研究发现，EGF在OLP和OSCC中的阳性表达差异无统计学意义(P>0.05)，提示EGF可能在OLP向OSCC转变中起着重要的作用。EGF的表达与淋巴结转移无关，这与许野等[9]研究相反，可能是所取样本量不足所致，有待进一步研究。EGF阳性表达率随着年龄的增长，糜烂型增加，淋巴结转移者增加，但差别无统计学意义(P>0.05)，可能是EGF只为EGFR其中的一种配体，在肿瘤发生中只起到部分作用。EGFR蛋白表达与OSCC组织学分型有关，可能是异常活化的EGFR通路可以改变细胞生长的特性，以EGF等配体依赖的方式促进细胞的恶性化及肿瘤的发生，肿瘤又能以自分泌或旁分泌的形式产生EGF特异配体，从而抑制肿瘤细胞的凋亡，进而促进EGFR高表达于肿瘤[10]。

本研究发现在OLP中NF-κB p65与EGFR有相关性；在OSCC中NF-κB p65分别与EGF和EGFR都呈正相关性，随着EGF阳性率的增加，NF-κB p65的活化明显增加，推测NF-κB p65与EGF及EGFR在OLP发展成为OSCC过程中有着协同作用，调节肿瘤细胞的过度增殖与分化，具体机制有待进一步研究。本研究发现EGF的表达由NOM、OLP到OSCC是一个渐进增加的过程，推测口腔黏膜中EGF的增高有发生癌变的可能。EGFR在OLP及OSCC中的表达差别不显著，这提示EGFR在OLP向OSSC过程中起作用，这为EGFR可能成作为早期检查OSCC提供了的依据。有研究发现NF-κB p65、EGF与EGFR间相互影响造成肿瘤的形成[11]，本研究发现在OSCC中NF-κB p65、EGF与EGFR的表达相互呈正相关性，这可能是EGFR可通过多条信号传导通路激活NF-κB p65，促进肿瘤的发生[12]；OLP从非糜烂型至糜烂型最后成为OSCC是可能的，在OLP发病过程中具有协同作用。NF-κB p65、EGF与EGFR联合表达在组织分型中随着分化程度的降低，NF-κB p65阳性率的表达降低，在淋巴结转移者比非转移者的阳性率高，可能是NF-κB p65的活化参与癌细胞早期的浸润和转移；EGF与EGFR随分化程度降低阳性率升高，在淋巴结转移者比非转移者的阳性率高，推测随着由OLP至OSCC的进展，EGF与EGFR的联合表达呈现出一种增高的趋势，有利于肿瘤的浸润和转移，高表达的EGF与EGFR一定程度上激活NF-κB p65信号转导通路。

总之NF-κB p65、EGF与EGFR的活化在OLP向OSCC发生、发展中起到重要的作用。对OLP患者进行回访并有效监测，明确3种蛋白在癌变过程中的具体机制有待进一步研究。

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Expression and clinical significance of NF-κB p65,EGF and EGFR in oral lichen planus and oral squamous cell carcinoma*

ZhouCong，WuBaoqin，ZhangQimei，WangZhongchao

(DepartmentofOralMedicine,AffiliatedStomatologyHospital,SouthwestMedicalUniversity,Luzhou,Sichuan646000,China)

Objective To investigate the expressions and significances of nuclear factor kappa B p65(NF-κB p65),epidermal growth factor(EGF) and epidermal growth factor receptor(EGFR) in oral lichen planus (OLP) and oral squamous cell carcinoma(OSCC).Methods The immunohistochemical technique with SP method was used to detect the expression of NF-κB p65,EGF and EGFR of oral mucosa in 20 cases of normal oral mucosa(NOM)tissue,20 cases of OLP tissue,and 20 cases of OSCC tissue.Results The expression rates f NF-κB p65 protein in NOM,OLP and OSCC were 10%,65% and 75% respectively,the difference among 3 groups were statistically significant(P<0.05).The expression rates of EGF in NOM,OLP and OSCC were 25%,45% and 65% respectively,the difference among 3 groups were statistically significant(P<0.05).The expression rates of EGFR in NOM,OLP and OSCC were 20%,55% and 70% respectively,the difference among 3 groups were statistically significant(P<0.05).The NF-κB p65 expression was correlated with lymph node metastasis(P<0.05).The EGFR expression was correlated with the histological grades(P<0.05).There was a positive correlation between expression of NF-κB p65 and EGFR in OLP(P<0.05).There was a positive correlation between NF-κB p65 and EGF with EGFR in OSCC (P<0.05).Conclusion NF-κB p65,EGF and EGFR might be one of the objective indicators of the early diagnosis of OSCC.

carcinoma,squamous cell；lichen planus,oral；mouth neoplasms；mucous membrane；epidermal growth factor；receptor,epidermal growth factor；NF-κB p65

��·临床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.02.013

四川西南医科大学资助项目(200903)。

周骢(1975-)，主治医师，硕士，主要从事口腔黏膜及牙周病的临床及教学方面研究。

R

A

1671-8348(2017)02-0187-04

2016-07-28

2016-08-19)