Leptin及OB-R在宫颈癌中的表达及与临床病理参数的关系

聂 明，邢 静，毕彦芬，林凡忠

(1.山东省济宁市任城区第一妇幼保健院病理科，山东 济宁 272000；2.山东省济宁市市直机关医院，山东 济宁 272019；3. 济宁市妇女儿童医院，山东 济宁 272125；4.山东省济宁市第一人民医院病理科，山东 济宁272011)

Leptin及OB-R在宫颈癌中的表达及与临床病理参数的关系

聂 明1，邢 静2，毕彦芬3，林凡忠4

(1.山东省济宁市任城区第一妇幼保健院病理科，山东 济宁 272000；2.山东省济宁市市直机关医院，山东 济宁 272019；3. 济宁市妇女儿童医院，山东 济宁 272125；4.山东省济宁市第一人民医院病理科，山东 济宁272011)

目的 探讨瘦素(Leptin)及其受体(OB-R)在宫颈癌中的表达及与临床病理参数的关系。方法 选取2014年1月至2015年12月济宁市任城区第一妇幼保健院病理科宫颈癌石蜡包埋组织31例，慢性宫颈炎组织标本22例和宫颈上皮内瘤样病变20例，采用免疫组织化学技术检测各组织Leptin及OB-R表达。结果 宫颈癌组织中Leptin及OB-R阳性表达率为80.65%和77.42%，明显高于慢性宫颈炎和宫颈上皮内瘤样病变，差异比较有统计学意义(χ2值分别为26.36、18.23、20.95、16.19，均P<0.05)；慢性宫颈炎和宫颈上皮内瘤样病变Leptin及OB-R阳性表达差异无统计学意义(χ2值分别为0.32、0.02，均P>0.05)；Leptin表达与宫颈癌浸润深度和分化程度有关(χ2值分别为10.78、4.08，均P<0.05)，OB-R表达与宫颈癌浸润深度有关(χ2=5.28，P<0.05)。结论 Leptin及OB-R可能在宫颈癌发生发展中起着促进作用，值得进一步研究。

瘦素；瘦素受体；宫颈癌；免疫组织化学

宫颈癌是临床上发病率最高的妇科生殖系统恶性肿瘤，虽然细胞学、宫颈高危型人乳头瘤病毒等可以提高早期诊断水平，但仍然存在15%～25%的宫颈癌患者临床确诊时已处于中晚期，远期预后不佳[1-2]。 对于宫颈癌发生发展过程中相关生物学机制的探讨，可以为改善患者的远期生存预后提供理论参考。瘦素(Leptin)及其受体(Leptin receptor，OB-R)可以通过影响细胞内多种信号通路如PI3K/AKT、NOTCH/CYC等，抑制细胞凋亡、增强细胞增殖活性[3-4]。已经证实Leptin及OB-R在卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤中异常表达，并与疾病的生存预后具有一定的关系[5-6]，但在宫颈癌中的研究不足。本研究通过选取2014年1月至2015年山东省济宁市任城区第一妇幼保健院收治的宫颈癌患者术后标本，采用免疫组化分析，探讨Leptin及OB-R在宫颈癌中的阳性率表达水平以及并初步探讨了其与患者临床病理特征间的关系。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2014年1月至2015年12月在济宁市任城区第一妇幼保健院病理科保存的宫颈癌石蜡包埋组织31例，年龄46～61岁，平均年龄51.46±6.68岁。纳入标准：①经病理学证实；②临床资料保存完整；③术前均未接受放疗、化疗及免疫治疗；④患者知情同意并签署同意书。排除标准：临床资料欠缺。

同时选取慢性宫颈炎组织标本22例，年龄44～63岁，平均年龄52.20±5.87岁；宫颈上皮内瘤样病变20例，年龄43～66岁，平均50.73±6.02岁,作为对照组。

1.2实验方法

采用石蜡切片脱蜡至水，切片厚度3mm，3%双氧水室温孵育 5min，采用去离子水冲洗3次，每次3min，采用浓度为10% 牛奶蛋白(1g蛋白加入100mL纯水)封闭，室温孵育 5min，加入Leptin及OB-R抗体(鼠来源，南京碧云天生物科技有限公司)，37℃ 孵育2h，磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)冲洗3次，每次5min，滴加辣根过氧化物酶标记的二抗(兔来源，购自罗氏检测公司)，37 ℃ 孵育30min，PBS冲洗3次，每次5min，加入 碱性磷酸酯酶显色试剂盒(Alkaline Phosphatase Color Development Kit，BCIP/NBT)色剂显色5min，复染，脱水，透明，封片，镜下观察。Stemi 508OLIPICS电子显微镜显微镜购自上海精密仪器有限公司，配套试剂购自南京泰康生物科技有限公司。

1.3结果判断

Leptin、OB-R阳性细胞为细胞质和细胞核出现棕黄色或黄色颗粒细胞，>50%细胞着棕黄色或黄色、<50%细胞着棕黄色为阳性；<50%细胞着黄色或淡黄色或不着色为阴性。

1.4统计学方法

数据整理分析采用SPSS 19.0统计软件，计数资料比较使用卡方检验，以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2结果

2.1免疫组织化学染色

慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变组织Leptin及OB-R阳性表达分布在鳞状上皮层，染色呈黄色或淡黄色；宫颈癌组织中Leptin及OB-R阳性表达位于肿瘤细胞胞质、胞核和部分癌巢周围血管的内皮和基层，见图1。

2.2 瘦素及OB-R在不同宫颈组织中表达

宫颈癌组织中Leptin及OB-R阳性表达率为80.65%和77.42%，明显高于慢性宫颈炎和宫颈上皮内瘤样病变，差异比较有统计学意义(χ2值分别为26.36、18.23、20.95、16.19，均P<0.05)；慢性宫颈炎和宫颈上皮内瘤样病变Leptin及OB-R阳性表达差异无统计学意义(χ2值分别为0.32、0.02，均P>0.05)，见表1。

2.3 瘦素及OB-R表达与宫颈癌临床病理参数关系

Leptin表达与宫颈癌浸润深度和分化程度有关(均P<0.05)，OB-R表达与宫颈癌浸润深度有关(P<0.05)，见表2。

表1 Leptin及OB-R在不同宫颈组织中表达[n(%)]

Table 1 Expressions of Leptin and OB-R in different cervical tissues [n(%)]

表2 Leptin及OB-R表达与宫颈癌临床病理参数关系[n(%)]

3讨论

3.1宫颈癌背景分析

宫颈癌是我国现阶段发病率和死亡率较高的生殖系统疾病，相关研究显示在我国农村地区，宫颈癌的发病率可达0.05%以上，特别是在年龄介于35～55岁的人群中，发病率更高[7]。宫颈癌患者容易早期发生髂内淋巴结、闭孔淋巴结等的转移，宫旁组织的浸润程度较高。患者的远期生存指标较差，无瘤生存期及疾病的无进展生存期较短，中位生存时间不足32个月[8-9]。迄今为止临床上仍然缺乏有效的宫颈癌患者远期评估指标，宫颈HPV或者细胞学检查虽然可以提高早期诊断水平，但预测疾病远期预后的灵敏度不足35%，具有明显的局限性[10]。对于宫颈癌组织中Leptin及其受体的研究，可以为食管癌的综合性治疗提供新的生物学靶向治疗靶点，且可以为患者的远期预后提供生存评估指标。

3.2瘦素与宫颈癌发病关系研究

Leptin主要存在于脂肪细胞中，同时在上皮细胞、间质细胞、巨噬细胞等中也存在少量的表达，Leptin结构上包含了4个重复的脯氨酸结合区域，其羧基末端含有多个磷酸化的巯基结构，可以通过结合靶细胞膜上的糖蛋白受体OB-R，调节细胞内的第二信使如钙离子、环磷酸腺苷等的含量。Leptin结合配体OB-R后，可以上调PI3K/AKT、STATA、JAK等信号通路下游效应分子，促进细胞增殖、诱导不良细胞分化结局[11-13]。在卵巢癌、乳腺癌等组织中，Leptin的表达可平均上升25%以上，并与患者的细胞分化、临床分期等病理类型密切相关。本研究的创新性在于探讨了慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌这一连续性病理变化过程中的Leptin及其受体的表达，从而更有利于揭示Leptin在宫颈癌发病过程中的作用。

本研究采用免疫组化分析了Leptin及OB-R在宫颈病变组织中的异常表达，染色分析可以发现Leptin及OB-R主要表达于宫颈鳞状上皮层，且在细胞膜、细胞质等部位的富集较为明显，Leptin及OB-R可能主要通过影响细胞内的相关效应分子的含量，从而影响到细胞增殖和分化。阳性率分析可见Leptin及OB-R在宫颈癌中的存在明显的高表达表现，阳性率可达80%左右，表明Leptin及其受体可能在宫颈癌的发生发展过程中发挥了重要的作用。Leptin及OB-R的结合，在抑制细胞凋亡蛋白(B-apoptosis protein BAX)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，BCL-2)等表达的同时，可以促进肿瘤血管内皮生长因子的表达，促进新生血管形成，促进肿瘤病变的发展。

Yuan等[14]研究者通过回顾性分析了46例宫颈鳞状细胞癌术后标本的免疫组化资料，发现Leptin的平均阳性表达率接近75%，这与本研究的结论较为一致，且认为Leptin在宫颈癌组织中的表达明显强于宫旁组织。但本研究并未发现慢性宫颈炎组织及宫颈鳞状上皮内瘤变组织中的Leptin表达差异，这与Yuan等的研究结论并不完全一致，Yuan等认为鳞状上皮内瘤变的患者，其Leptin阳性率可较宫颈炎组上升15%左右，研究结论的差异考虑与样本量的不足、检测方法的不统一及上皮内瘤变的级别差异等有关。本研究总采用的浸润深度的分组根据Yuan等[14]研究者的临床荟萃分析结果提示进行，更能够提供宫颈癌的临床进展情况，临床病理特征分析可以发现，Leptin表达与宫颈癌浸润深度和分化程度有关，OB-R表达与宫颈癌浸润深度有关，Leptin及其受体的激活，可以促进表皮生长因子受体、络氨酸激酶受体等的表达，促进宫颈癌组织的浸润，导致细胞分化不良。Leptin及其受体与宫颈癌的临床特征的关系，提示其在疾病的预后或者临床转归的评价中可能发挥了重要作用。

综上所述，Leptin及OB-R在宫颈癌组织中异常高表达，并与宫颈癌患者的疾病浸润深度、细胞分化程度等密切相关，临床上可以通过随访宫颈癌患者术后的免疫组化结果，进而评估患者的远期预后。本研究的局限性在于对Leptin及OB-R的灵敏度、特异度等诊断学指标的分析不足，Leptin预测远期生存风险的价值仍然需要深入探讨。

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[专业责任编辑：张冠军]

Expressions of Leptin and OB-R in cervical carcinoma and their relationship with clinical pathological parameters

NIE Ming1, XING Jing2, BI Yan-fen3, LIN Fan-zhong4

(1.PathologyDepartment,FirstMaternalandChildHealthCareHospitalofRenchengDistrictinJiningCity,ShandongJining272000,China; 2.JiningMunicipalHospitalofShandongProvince,ShandongJining272019,China;3.JingningMaternalandChildren’sHospital,ShandongJining272125,China;4.PathologyDepartment,FirstPeople’sHospitalofJiningCity,ShandongJining272011,China)

Objective To investigate the expression of leptin (Leptin) and its receptor (OB-R) in cervical carcinoma and its relationship with clinical pathological parameters. Methods Altogether 31 specimens of paraffin embedded tissue of cervical cancer, 22 specimens of chronic cervicitis tissue and 20 specimens of cervical intraepithelial neoplasia in pathology department of First Maternal and Child Health Care Hospital of Rencheng District in Jining City from January 2014 to December 2015 were selected. Expression of Leptin and OB-R in different tissues was detected by immunohistochemistry technique. Results Positive expression rate of Leptin and OB-R in cervical cancer tissue was 80.65% and 77.42%, which was significantly higher than that in chronic cervicitis and CIN, and the differences were statistically significant (χ2value was 26.36, 18.23, 20.95 and 16.19, respectively, allP<0.05). There was no significant difference in expression of Leptin and OB-R between chronic cervicitis and CIN (χ2value was 0.32 and 0.02, respectively, bothP>0.05). Expression of Leptin was correlated with the invasive depth and differentiation degree of cervical cancer (χ2value was 10.78 and 4.08, respectively, bothP<0.05), and expression of OB-R was correlated with invasion depth of cervical cancer (χ2=5.28,P<0.05). Conclusion Leptin and OB-R may play a promoting role in development of cervical cancer, and it is worth further study.

Leptin; Leptin receptor (OB-R); cervical cancer; immunohistochemistry

2016-08-23

聂 明(1977-)，男，主治医师，主要从事瘦素受体在宫颈癌中表达的研究。

林凡忠，副主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.01.019

R711.74

A

1673-5293(2017)01-0054-03