神经前体细胞表达下调蛋白9在胰腺癌组织中的表达及临床意义

吴铁龙， 薛丽莉， 戴圆圆， 盛颖玥， 王文远， 薛育政

(无锡市第三人民医院 消化科， 江苏 无锡 214000)

神经前体细胞表达下调蛋白9在胰腺癌组织中的表达及临床意义

吴铁龙， 薛丽莉， 戴圆圆， 盛颖玥， 王文远， 薛育政

(无锡市第三人民医院 消化科， 江苏 无锡 214000)

目的 检测神经前体细胞表达下调蛋白(NEDD)9在胰腺癌和癌旁组织的表达情况，分析其与胰腺癌进展、预后的关系。方法 收集2005年8月-2010年12月于无锡市第三人民医院治疗的98例胰腺癌患者的癌和癌旁组织样本，应用免疫组化技术检测患者胰腺癌和癌旁组织中NEDD9的表达，并对NEDD9表达与胰腺癌临床病理特征的关系进行分析。计数资料组间比较采用χ2检验。结果 胰腺癌组织中NEDD9的高表达率明显高于癌旁组织(57.1% vs 41.8%，χ2=4.592，P=0.032)。胰腺癌组织NEDD9的表达与患者TNM分期、分化程度及有无淋巴结转移相关(χ2值分别为45.02、20.41、36.21，P值均<0.001)；与性别、年龄、肿瘤部位、有无肝转移无相关性(P值均>0.05)。结论 NEDD9可能在胰腺癌的发展和侵袭转移中起着一定的作用，有可能作为评估胰腺癌预后的分子指标和治疗靶点。

胰腺肿瘤； 神经前体细胞表达下调蛋白9； 病理状态， 体征和症状

胰腺癌是我国常见的消化系统恶性疾病，具有恶性程度高、早期诊断困难、有效治疗手段缺乏、预后差等特点[1-2]。因此，探索新的有效的分子生物学检测指标和新的治疗靶点十分必要。神经前体细胞表达下调蛋白(neural precursor cell expressed developmen-tally down-regulated，NEDD)9是一种骨架蛋白分子，参与调控细胞迁移、分裂及凋亡，在多种恶性肿瘤如乳腺癌[3]、黑色素瘤[4]中均呈高表达，并与肿瘤的侵袭及转移密切相关。目前，关于NEDD9在胰腺癌中的表达情况了解甚少，故本研究检测NEDD9在胰腺癌和癌旁组织中的表达情况，并探讨NEDD9的表达与临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集2005年8月-2010年12月于本院行手术治疗的98例胰腺癌患者的癌和癌旁组织样本，所有患者术前未经过放、化疗及免疫治疗等，术后病理确诊为胰腺癌。肿瘤分期及临床病理分级参考《胰腺癌诊治指南(2014)》[5]。定义Ⅰ期和Ⅱ期胰腺癌患者为早期,Ⅲ期和Ⅳ期患者为晚期。

1.2 研究方法 采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化技术，按免疫组化试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)说明书进行操作。NEDD9 多克隆一抗稀释度为1∶300。二抗采用过氧化物酶标记，以DAB显色。常规石蜡包埋，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，微波抗原修复，PBS 代替一抗作为阴性对照。根据细胞不同部位着色深浅判断细胞染色的数量和强度。每个样本显微镜下观察10 个400倍放大视野，每次观察其中100个细胞。若阳性细胞<5%，则记为0分;阳性细胞占观察细胞总数的5%～25%,记为1 分，26%～50%记为2分；>50%记为3分。显微镜下观察染色强度：阳性细胞染色呈黄色为1分；棕黄色为2分； 棕褐色为3 分。采用乘法计算阳性细胞所占总观察细胞的比值和阳性细胞染色强度的交集以确定最终观察结果： 0分为阴性，1～4分为弱阳性，5～8分为中阳性，9～12分为强阳性；前两者为低表达，后两者为高表达。

1.3 统计学方法 采用SPSS22.0软件进行统计学分析。计数资料组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NEDD9 在胰腺癌和癌旁组织中的表达情况 免疫组化结果显示，NEDD9主要在细胞浆着色。NEDD9在胰腺癌组织中高表达56例(57.1%)，低表达42例(42.9%)；在癌旁组织中高表达4l例(41.8%)，低表达57例(58.2%)。NEDD9在胰腺癌组织中与癌旁组织中的表达程度差异有统计学意义(χ2=4.592，P=0.032)(图1)。

图1 NEDD9在胰腺癌和癌旁组织中的表达(×200)a：胰腺癌组织；b：癌旁组织

2.2 NEDD9的表达与患者临床病理特征的关系 胰腺癌组织NEDD9表达高低与患者临床分期、肿瘤分化程度以及淋巴结转移密切相关(χ2值分别为45.02、20.41、36.21，P值均<0.001)，与患者年龄、性别、肿瘤部位、有无肝转移无相关性(P值均>0.05)(表1)。

表1 NEDD9的表达与临床病理特征的关系(例)

3 讨论

NEDD9作为一种细胞骨架蛋白分子，主要包括SH3 结构域、底物结构域、富含丝氨酸的序列及进化非常保守的C末端结构域，能与多种功能性蛋白相互作用，在细胞黏附、趋化、迁移和侵袭、浸润、凋亡和细胞周期以及上皮-间质转化中发挥着重要的作用[6]。NEDD9在胃癌[7]、宫颈癌[8]、肝癌[9]等恶性肿瘤中均有高表达且与肿瘤的迁移、浸润密切相关。然而，NEDD9在胰腺癌的表达情况不是十分清楚。

本研究结果显示，NEDD9在胰腺癌组织呈高表达，在癌旁组织呈低表达，两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。与Zhang等[7]对胃癌、Sima等[8]对宫颈癌及Kozyulina等[10]对乳腺癌的研究结果类似。同时胰腺癌组织中NEDD9的高表达与肿瘤临床特征如分期、分化程度及淋巴结转移等相关，提示NEDD9可能参与胰腺癌的侵袭转移过程。关于NEDD9参与肿瘤迁移和侵袭的机制，目前研究[11]认为，NEDD9被Src和FAK磷酸化后直接与接头分子Crk相互作用，正向调节Src-FAK-Crk迁移开关，促进钙黏蛋白降解，减慢黏着斑分解，促进整合素受体激活和上皮-间质转化。体外实验[12]发现，过表达NEDD9可以促进细胞的迁移，细胞随机迁移的速度和趋向性反应都有所增强；降低NEDD9的表达可以导致细胞化学趋向性降低。Sima等[8]研究发现，过表达NEDD9能够促进宫颈癌细胞迁移和侵袭；张思森等[13]研究发现，RNA干扰沉默NEDD9能够抑制胃癌细胞迁移和侵袭，诱导其凋亡。另外，尽管本研究显示NEDD9表达与有无肝转移无明显相关性，但未来仍需要大量标本证实。

综上所述，NEDD9 在胰腺癌组织中高表达，可能与胰腺癌浸润、侵袭相关。NEDD9的检测方法简单，临床易于操作，有可能成为评估胰腺癌患者预后的分子生物学指标和新的分子靶向治疗靶点。此外，NEDD9参与胰腺癌细胞生物学行为的具体机制还需要进一步探讨。

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引证本文：WU TL, XUE LL, DAI YY, et al. Expression of NEDD9 and its clinical significance in pancreatic cancer[J]. J Clin Hepatol, 2017, 33(1): 130-132. (in Chinese) 吴铁龙， 薛丽莉， 戴圆圆， 等. 神经前体细胞表达下调蛋白9在胰腺癌组织中的表达及临床意义[J]. 临床肝胆病杂志, 2017, 33(1): 130-132.

(本文编辑：葛 俊)

Expression of NEDD9 and its clinical significance in pancreatic cancer

WUTielong,XUELili,DAIYuanyuan,etal.

(DepartmentofGastroenterology,TheThirdPeople′sHospitalofWuxi,Wuxi,Jiangsu214000,China)

Objective To investigate the expression of neural precursor cell-expressed, developmentally down-regulated 9 (NEDD9) in pancreatic cancer tissues and adjacent tissues and its association with the progression and prognosis of pancreatic cancer. Methods A total of 98 patients with pancreatic cancer who were treated in The Third People′s Hospital of Wuxi from August 2005 to December 2010 were enrolled, and the samples of pancreatic cancer tissues and adjacent tissues were collected. Immunohistochemistry was used to measure the expression of NEDD9 in pancreatic cancer tissues and adjacent tissues. The chi-square test was used for comparison of categorical data between groups. Results The high expression rate of NEDD9 in pancreatic cancer tissues was significantly higher than that in adjacent tissues (57.1% vs 41.8%,χ2=4.592,P=0.032). The expression of NEDD9 in pancreatic cancer tissues was significantly associated with TNM stage, degree of tumor differentiation, and lymph node metastasis (χ2=45.02, 20.41, and 36.21, allP<0.001) and not associated with sex, age, tumor location, or presence or absence of liver metastasis (allP>0.05). Conclusion NEDD9 may play a role in the progression and invasion/metastasis of pancreatic cancer and can be used as a prognostic marker and a therapeutic target for pancreatic cancer.

pancreatic neoplasms； NEDD9； pathological conditions, signs and symptoms

10.3969/j.issn.1001-5256.2017.01.028

2016-08-09；

2016-08-20。

江苏省“六大人才高峰”基金(WSN-066)；江苏省“333工程”科研项目(CAE01101-06)；无锡市医院管理中心科研项目(YGZXQ1310)；无锡市社会发展科技支撑项目(CSE31N1415)

吴铁龙(1990-)，男，主要从事胰腺癌侵袭浸润的分子机制研究。

薛育政，电子信箱：xueyz001@163.com。

R735.9

A

1001-5256(2017)01-0130-03