“瘦肉精”沙丁胺醇常见检测方法

宋瑞

（河北省石家庄市畜产品质量监测中心河北石家庄050041）

“瘦肉精”沙丁胺醇常见检测方法

宋瑞

（河北省石家庄市畜产品质量监测中心河北石家庄050041）

饲喂畜禽沙丁胺醇可以促进其骨骼肌生长，同时减少脂肪沉积，因此有不法分子在养殖场非法使用本类药物。本文从酶联免疫法、液相色谱法等阐述检测沙丁胺醇的方法。

沙丁胺醇；酶联免疫；液相色谱；气相色谱串联质谱；液相色谱串联质谱

沙丁胺醇（Salbutamol），是一种具有选择性的β受体激动剂，能够选择性激动支气管平滑肌的β受体，扩张支气管。临床上常用于预防治疗支气管哮喘。饲喂畜禽沙丁胺醇可以促进其骨骼肌生长，同时减少脂肪沉积，因此有不法分子在养殖场非法使用本类药物。尤其是在我国对盐酸克伦特罗、莱克多巴胺的非法使用进行了严格限制后，作为新的替代品沙丁胺醇常被不法分子使用。如果在促生长饲料中添加沙丁胺醇，且添加量超过正常的治疗量，就会造成动物体内沙丁胺醇的残留，老百姓误食含有沙丁胺醇的动物产品会引发中毒。目前沙丁胺醇的残留检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱－质谱联用法（GC－MS）和液相色谱－质谱联用法（LC－MS）等。

1 酶联免疫吸附法（ELISA）

近年来应用酶联免疫吸附法越来越广泛,其具有操作简便、耗时较短、检测结果较为准确的特点。国外相关学者使用酶联免疫法检测猪肝中沙丁胺醇，分别使用0.2 μg/kg、1 μg/kg以及2 μg/kg3个不同浓度给猪静注，1 h后屠宰，取肝脏，用蛋白酶消化并纯化样品后，用ELISA检测试剂盒进行测定。毛丽莎等[1]用酶联免疫法检测猪、羊肉、猪肝等动物源性食品后，对阳性样品采用液相色谱串联质谱法进行验证。用酶联免疫法测定沙丁胺醇的线性范围为0.06～410 μg/kg，标准曲线系数为0.996～0.999，回收结果为71.2%～87.2%。杨正涛等学者[2]采用ELISA法对兔肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇、盐酸克伦特罗3种β受体激动剂进行检测，经测定沙丁胺醇抗血清除对沙丁胺醇具有100%的反应外，还对克伦特罗具有128%的交叉反应性。王建平等学者[3]建立了能够同时检测沙丁胺醇和克伦特罗的间接竞争酶联免疫法，此方法明确了沙丁胺醇和盐酸克伦特罗的检测范围为0.48～8.0 mg/kg和0.43～7.3 mg/kg，沙丁胺醇和克伦特罗的检测灵敏度分别为0.48 mg/g和0.43 mg/g。同时该学者还检测了回收率和相对标准偏差，在猪肝、猪尿中添加1～50 ng/g的沙丁胺醇和克伦特罗，测得回收率分别为72.2%～84.8%和84.3%～103.4%，样品间相对标准偏差分别为4.2%～28.3%和0.3%～35.5%。

2 高效液相色谱法（HPLC）

由于沙丁胺醇含有苯环属于共轭结构，因此可采用紫外、荧光进行检测，近来使用高效液相色谱法定量检测沙丁胺醇的报道较多。金雁等学者[4]使用高效液相色谱法（紫外检测器）能够同时测定禽肉中克伦特罗和沙丁胺醇的残留，检出限分别为3 μg/kg和1 μg/kg，样品回收率在61.5%～90.6%，样品的相对标准偏差均低于10%。尚红霞等研究员[5]用高效液相色谱法（二极管阵列检测）测定了饲料中克伦特罗和沙丁胺醇，检出限分别为0.31 μg/kg和0.24μg/kg，样品加标回收率范围为91.2%～92.0%和91.9%～93.0%。王炼等学者[6]建立了奥西那林、克伦特罗、沙丁胺醇和非诺特罗的高效液相色谱法（二极管阵列检测器），样品的最低检出限分别为0.07 mg/kg、0.04 mg/kg、0.10 mg/kg和0.08mg/kg，样品加标回收率在60.1%～88.0%之间。李伟红等学者[7]建立了高效液相色谱法（荧光检测器）检测畜禽肉中的沙丁胺醇，此方法的最低检出限为0.01 mg/kg，回收率不低于60%，样品间相对标准偏差低于10.7%。安洪泽等学者[8]建立了饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和非诺特罗的高效液相检测方法（荧光检测器），最低检出限为17 ng/g，定量限50 ng/g，回收率范围为88.6%～107.1%，样品间最低相对标准偏差0.5%。林奕芝等学者[9]建立了肉与肉制品中沙丁胺醇高效液相色谱的测定方法，其检出限为6 ng/g，回收率为99.8%。高效液相色谱法具有灵敏度高、重复性好等优点，但是具有样品前处理较复杂、特异性较差缺点。

3 气相色谱串联质谱法

沙丁胺醇含有羟基、氨基等极性基团，在采用气相色谱串联质谱法测定时，需要衍生化，再用质谱或二级质谱进行检测。Ramos等学者[10]优化了沙丁胺醇检测中的衍生化条件，得到的最佳衍生化温度为55℃，时间为1 h。Spisso等[11]优化了沙丁胺醇的提取净化条件，用气相色谱串联质谱法测定，可得最低检测限为0.5 ng/g，样品的回收率在88%以上。孟娟等[12]采用内标法，使用气相色谱串联质谱检测动物组织样品中的沙丁胺醇、克伦特罗等的残留量，沙丁胺醇的检出限为0.5 μg/kg。朱坚等[13]测定了动物组织中的沙丁胺醇、费诺特等，测得最低检出限为0.5～2 μg/kg，样品的平均回收率为71%～94%，样品间相对标准偏差为4.6%～18.7%。

4 液相色谱串联质谱法

液相色谱串联质谱是近年来分析沙丁胺醇最有效的方法之一，此方法不需要进行衍生化步骤，其中液相色谱能够分离一些热不稳定的小分子极性物质，质谱对化合物的定性较准确。Fesser等使用了液相色谱串联质谱法测定了动物肝脏中的沙丁胺醇，测得样品的平均回收率为76%，样品间相对标准偏差为6%。孙雷等[14]建立了动物源性食品中沙丁胺醇的残留检测方法，获得沙丁胺醇的检出限为0.1 μg/kg。蔡欣欣等学者[15]使用内标法测定动物源食品中沙丁胺醇、盐酸克伦特罗等的三重四极杆质谱确证检测方法，测得最低定量限为0.2 μg/kg。液相色谱串联质谱法具有样品用量少、分析时间短、灵敏度高、分离能力强、选择性强的优点，是目前确证沙丁胺醇的最佳方法。但液相色谱串联质谱价格较贵，仪器结构非常复杂、重现性较差、样品易受污染等问题。

5 展望

目前测定沙丁胺醇的方法有很多种，但是在我国行业标准和国家标准中只使用气相色谱串联质谱法和液相色谱串联质谱法，这两种方法的灵敏度都较高，但样品前处理过程较为复杂，耗时较长，尤其是气相色谱串联质谱还需要衍生化。酶联免疫法测定样品操作简便，可同时检测40个样品，分析时间较短，非常适用于快速筛选。此外简化液相色谱串联质谱法和气相色谱串联质谱法的前处理过程也是一个非常重要的研究方向。■

［1］毛丽莎,刘红河,杨俊,等.酶联免疫法与液质联用法测定动物源性食品中沙丁胺醇和克伦特罗［J］.中国卫生检验杂志,2009,19(5):987-992.

［2］杨正涛,张乃生,史利军,等.β－激动剂多组分残留的酶免疫分析方法［J］.中国农学通报,2008,24(8):23-27.

［3］王建平,沈建忠.猪肝和猪尿中沙丁胺醇和克伦特罗残留的酶联免疫吸附检测法研究［J］.畜牧兽医学报,2005, 36(4):397-401.

［4］金雁,姚家彪,姜莉,等.高效液相色谱法同时测定禽肉中的克伦特罗和沙丁胺醇［J］.现代仪器,2005(5):34-36.

［5］尚红霞,卢业玉,黄宝华,等.固相萃取－高效液相色谱法同时测定克伦特罗和沙丁胺醇［J］.分析科学学报, 2003,19(2):123-125.

［6］王炼,黎源倩.高效液相色谱法测定动物性食品中4种β2－兴奋剂［J］.中国卫生检验杂志,2008,18(7): 1227-1230.

［7］李伟红,戴廷灿,熊艳.HPLC法测定畜禽肉中沙丁胺醇的残留量［J］.江西农业学报，2007，19(3):102－103

［8］安洪泽,张素霞,沈建忠,等.高效液相色谱法测定饲料中三种β-兴奋剂［J］中国饲料,2008(2):34-38.

［9］林奕芝,张世英,梁伟,等.HPLC法同时测定肉与肉制品中沙丁胺醇和8种雌激素残留量［J］.中国公共卫生, 2002,18(12):1499-1501.

［10］Ramos F，Santos C，Silva A，et al..β2－adrenergic agonist residues:simultaneous methyl－and butylboronic derivatization for confirmatory analysis by gas chromatography－mass spectrometry［J］.J Chromatogr B(Biomed Sci Appl), 1998,716:366-370.

［11］Spisso B F，Lopes C C，Marques M A，et al.Determination of β2－agonists in bovine urine:Comparison of two extraction/clean-up procedures for high -resolution gas chromatography-mass spectrometry analysis［J］.J Anal Toxicol, 2000,24:146-152.

［12］孟娟,邵兵,吴国华,等.气相色谱－质谱法同时测定动物性食品中8种β-兴奋剂的残留量［J］.中国卫生检验杂志,2005,15(6):641-643.

［13］朱坚,李波,方晓明,等.气相色谱-质谱法测定肝、肾和肉中11种β2-受体激动剂残留量［J］.质谱学报,2005, 26(3):129-137.

［14］孙雷,张骊,朱永林,等.超高效液相色谱-串联质谱法检测动物源性食品中残留的9种β2-受体激动剂［J］.色谱,2008,26(6):709-713.

［15］蔡欣欣,张秀尧.超高效液相色谱三重四极杆质谱法同时快速测定动物源食品中6种β-受体兴奋剂残留［J］.中国卫生检验杂志,2008,18(7):1252-1255.

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.03.012