免疫检测的干扰因素分析和控制措施研究

李璀

山东省济南市传染病医院检验科，山东济南 250021

免疫检测的干扰因素分析和控制措施研究

李璀

山东省济南市传染病医院检验科，山东济南 250021

免疫检测法在实际应用过程中，能够改变检测物浓度或者检测抗体结合能力，从而对检测结果造成不同程度的影响，具体会引起检测结果出现假性升高或降低的情况对医生临床疾病诊断评估产生影响。因此，检验人员和临场医生在实际检测工作中，如果试验检测结果与实际临床征象不相符合的情况，分析是否存在干扰因素，从而重新进行试验和检测，提升结果的正确性。

免疫检测；干扰因素；分析；对策

在实际试验过程中，免疫检测具有敏感性高、标本容易处理的特点。但是在一定条件下，免疫检测的准确性会受到不同程度的影响，从而影响到最终的试验结果。在上个世纪70年代的临床试验研究中，检测人员就已经发现免疫法检测中存在一定的干扰，很多医生尝试着制定解决方案。就目前而言，虽然制定了很多免检疫检测方法，但是仍然无法从根本上避免干扰。根据大量的实践证明，免疫检测干扰因素会导致检测物出现不同程度假性升高或者降低的情况，从而影响临床医生对病情的诊断和评估，增加不必要的检查，甚至出现错误的用药，导致用量过量，酿成严重的后果[1]。随着免疫检测技术的发展，在免疫检测方法和模式上都出现了新的进展，取得了一定的成果，对临床研究提供了科学的指导和借鉴。就当前的研究证明，人抗动物抗体、自身抗体等内源性抗体的干扰受到医学界的广泛关注，因此，该文在前人的研究基础上，首先分析免疫检验干扰的分类，接着针对免疫检测干扰因素和控制措施展开论述，从而为临床试验提供一定的参考和借鉴。

1 免疫检测的干扰分类

免疫检测会受到抗体特性、抗体原、试剂成分以及检测方法的影响。在通常情况下，免疫干扰因素主要分为检测物依赖和非依赖性干扰因素。检测依赖的干扰因素主要是被检测标本中成分与试剂中的抗体发生作用，或者检测物自身抗体与检测物产生相互作用，进一步影响到检测抗体与检测物的精确性[2]。检测物非依赖干扰因素主要是指常见的物质受到干扰的因素，具体包括溶血、黄疸以及抗凝物质，从而导致样本储存存在一定的差异。

1.1 改变被检测物浓度

对内源性免疫检测干扰因素而言，在实际检测过程中，与标本内物质特性有很大关系，需要改变被检测物的浓度，从而影响到到检测结果，具体包括激素结合蛋白和检测物自身抗体等。

1.1.1 激素结合蛋白 在标本中，急速结合蛋白可以通过被检测物或者进行解离，从而影响到激素的检测。比如类固醇能够有效结合性激素结合蛋白等，导致固醇出现游离的情况，降低生长激素检测结果[3]。在实际过程中，人体内最高有一半的生长激素与生长激素结合蛋白形成复合物，但是生长激素抗原表位就可能被遮盖，不能与检测检测抗体实现有效的结合，从而降低检测的浓度。因此，检测人员可以利用结合蛋白变性抑制激素和蛋白的结合，保证检测到真实的血清浓度。另外，在实际检测过程中，有的物质可以把被检测物从激素结合蛋白中替换出来，从而影响到物质检测的计算方法，导致被检测物出现升高或者下降的问题。

1.1.2 检测物自身抗体 在进行多种免疫检测方法中，对自身抗体会产生一定的影响，在通常情况下，自身抗体为IgG型，导致这类抗体亲和力高，对传功的免疫鉴定法产生较强的干扰，具体包括酶类、肌钙蛋白以及甲状腺激素等。其中血浆巨泌乳素主要由泌乳素和自身抗体形成的巨分子复合物，在患者无脑垂体疾病的情况下，血中巨泌乳素就会到泌乳素检测结果呈现出假性升高的现象，从而导致医生临床诊断为高泌乳素血症，从而采取不合理的处理方法，导致非常严重的后果[4]。因此，为了满足实际需要，在实际试验过程中，各个实验室要采用泌乳素检测系统受到巨泌乳素干扰受到实际情况的，对患者是否存在巨泌乳素进行精确判断。

1.2 通过改变被检测物与相应抗体结合影响检测结果

内源性干扰伊苏主要通过干扰抗原体，从而影响到最终的检测结果，具体包括异嗜性抗体、HAAA等。

①异嗜性抗体主要包括天然抗体和自然抗体，但是针对的抗原不算很明确，在通常情况，能够与2种或者以上其他物种抗体发生反应，亲和力比较低。并且独特型坑提能够结合到被检测抗原上，从而影响到免疫检测抗原抗体的结合以及后期的检测结果。在实际过程中，独特型抗体和自然产生的免疫源性的RF，是造成异嗜性干扰的重要因素[5]。RF是患者体内针对变形的lgG的内源性IgM抗体，可模拟异嗜性抗体作用在实际过程中，会直接连接ELISA法，进而捕获抗体和检测抗体，引起假阳性抗体。异嗜性抗体主要采用非竞争性机制，进行干扰免疫检测，传统的双位点免疫鉴定非免疫球蛋白抗原过程中，异嗜性抗体可以直接捕获和检测抗体，就会导致出现假阳性结果。并且实际检测过程中，同一种异嗜性抗体对不同测试剂中抗体组合反应就会出现不同的结果。因此，在利用不同监测试剂检测过程中，需要对异嗜性抗体干扰差异性进行分析。

②HAAA，就是具有很高亲和力特异性多克隆抗体。在实际应用过程中，主要包括人抗免疫球蛋白、人抗动物白蛋白。随着动物原型诊断和治疗机制的运用，证明了HAAA的存在，比如人抗小鼠抗体、抗兔、抗山羊体等。HAAA与抗原具有很强的结合性，在血清中滴度较高，可以在试剂中，根据抗体发生交叉反应，从而影响到最终的检测结果[6]。在进行多种物质检测过程中，就会受到HAAA的干扰，具体包括心脏标志物、甲状腺激素以及肿瘤标志等。采用双位点免疫分析分方法，更容易受到血清HAAA的干扰，当检测试剂中抗体的物种来源与血清中一样，就会产生更加明显的干扰，影响到检测的效果。

在实际检测试验过程中，其他影响抗体结合干扰免疫法检测的蛋白，具体包括补体、副蛋白等。补体主要通过结合免疫球蛋白的Fc段，从而阻断被检测与抗体的特异性结合位点，导致干扰被检测物，这种干扰可以有效抑制被检测物与捕获抗体和检测抗体的结果。

2 免疫检测干扰因素的分析

在实际检测过程中，受到各种干扰因素的影响，会产生过重假阳性和假阴性结果，从而导致医生对临床疾病产生误判和误诊，甚至进行错误的治疗。因此，为了满足实际需要，在要重视免疫检测中的干扰因素。当检测结果与临床征象出现不相符的情况时，临床医生要与检验师进行沟通和交流，从而全面了解免疫检验可能出现的干扰因素。作为检验医师，需要了解疾病临床知识和疾病治疗方案以及动员源性诊断和治疗性抗体等病史。在实际鉴别过程中，可以采用以下方法，①采用标本稀释液方法，就是按照一定比例进行稀释以后，再进行检测，然后对被检测物进行观察，是否存在线性的变化。②利用另外一物种来源的检测抗体进行，或者选择另外一种检测方法，从而有效降低干扰。③针对实际的标本，采用不同浓度的阻断剂和不同物种来源的混合阻断剂，在进行阻断以后，再进行检测。④可以直接检测自身抗体或者异嗜性抗体是否存在。⑤在标本中加入一定的标准品以后，然后进行回收，再进行试验。

在实际检测过程中，如果检测方案会得出被检测物具有不同的浓度，从而表明被检测方案中，存在一定的干扰因素。作为医生和检验而言，虽然大部分检测系统能够得到相似的检测结果，也不能从根本上排除其他干扰对检测结果的影响。因此，在临床实际工作过程中，医生要结合患者实际身体结合能力出现的缺陷情况，进行科学合理的分析，控制好最终的检测结果。

3 减少免疫检测干扰控制措施

随着当前检测技术的发展，新的方法和技术不断应用到实际免疫检测过程中，最大限度地减少免疫检测干扰。就目前而言，如何减少消除免疫检测中的干扰因素成为当前检验工作面临的重要问题。

①采用物理化学以及免疫学方法。通过凝胶色谱层析法，从待检标本中提取被检测物以后，在进行相应的检测。利用聚乙二醇可以去除HAAA的干扰。对热稳定的被检测物，需要进行加热，才能满足实际检测需要。另外，检测人员还可以利用三氟乙酸沉淀法和阳离子交换层析法，从而消除自身抗体的干扰。

②加入相应的阻断剂。在实际试验过程中，针对异嗜性抗体，在通常情况下，可以采用正常动物血清的混合物，阻断非特异性，从而有效地吸收异嗜性抗体，有效减少检测干扰。但是在实际过程中，异嗜性抗体具有较弱的亲和力和结合力的，采用上述方法免疫干扰效果不理想。另外，由于不同个体来源标准干扰因素干扰程度不同，在实际检测过程中，很难确定所有标本精确的阻断剂用量。

综上所述，当前对免疫检测干扰因素作用机制进行一定研究，但是没有一种方案能够完善消除所有的干扰因素。检测人员要结合实际情况，充分认识到干扰的可能性，采用有效的抗干扰措施，避免导致严重的后果。

[1]何淑琴,刘艳琳,张丽铃.人输注静注人免疫球蛋白后对TP-ELISA法检测梅毒的干扰因素初探[J].中南药学,2015 (12)：1256-1258.

[2]吴春龙,陈超超,袁远,等.酶联免疫反应加速仪法检测含干扰因素的HBsAg低值阳性血清的分析与评价[J].中国卫生检验杂志,2013(17)：3376-3378.

[3]林天浩,莫恒勤.免疫比浊法检测糖化血红蛋白的性能评价[J].现代医院,2013(11)：60-62.

[4]王伟佳,张秀明,阚丽娟,等.降钙素原检测在感染性疾病诊断中的干扰研究[J].中华医院感染学杂志,2013(13)：3048-3050，3053.

[5]刘蕊,李刚,崔小璠.胆红素和血红蛋白对不同尿白蛋白检测方法结果干扰的研究[J].检验医学,2012(7)：564-567.

[6]陈金超,刘涤瑕,王丽,等.免疫学检测方法中的干扰因素和对策[J].现代中西医结合杂志,2009(21)：2575-2576.

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1672-5654（2017）04（c）-0049-02

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.12.049

2017-01-26）

李璀(1976-)，女，山东济南人，本科，主管检验师，研究方向：免疫检验。