响应面法优化溶剂热法提取酸枣仁总黄酮工艺

□ 吴修利 姜 雪 郭春香 王 西 王 祺 钱晓萍 长春大学 食品科学与工程学院

响应面法优化溶剂热法提取酸枣仁总黄酮工艺

□ 吴修利 姜 雪 郭春香 王 西 王 祺 钱晓萍 长春大学 食品科学与工程学院

采用溶剂热法优化酸枣仁中总黄酮的提取条件。通过单因素试验，选取料液比、乙醇体积分数、提取温度和时间作为的影响因子，以酸枣仁总黄酮的提取率为响应值，应用响应面分析试验。最佳提取酸枣仁总黄酮条件为：料液比1∶57（g/mL），乙醇体积分数74%，提取温度93 ℃、提取时间4.2h，在此条件下，3次提取酸枣仁总黄酮的得率可达16.761 mg/g。建立的二次数学模型，对酸枣仁中总黄酮的提取具有较好的预测作用。

响应面法；溶剂热法；酸枣仁；总黄酮

酸枣仁是酸枣的种子，主要产自吉林、辽宁、河北等地，作为我国首批批准的药食同源材料[1]，酸枣仁具有养心补肝、宁心安神、生津敛汗等功效[2-3]，是较为常用的镇定安眠中草药。酸枣仁中含有总黄酮、皂苷、多糖和脂肪酸挥发油等功效成分[4]。考察单因素试验，采用响应面法对酸枣仁总黄酮溶剂热法提取工艺进行优化，并建立预测模型，设计合理实验，利用多元二次回归方程因素与响应值间的函数关系进行拟合，得到最佳提取工艺参数。

实验

实验材料及仪器

酸枣仁：购买于长春永新药房，粉碎过4 0目筛，脱脂晾干。标准品芦丁：购于中国药品生物制品检定所；乙醇、Al（N O）3、NAN O2、NAoH等均为分析纯。K H-5 0/100不锈钢反应釜、GZ X-9070M B E电热恒温鼓风干燥箱、U V751Gd 紫外可见分光光度计。

方法

1酸枣仁总黄酮的提取

将脱脂后的酸枣仁粉末1.0000g和一定体积分数的乙醇加入聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中，密封置于干燥箱中，设定一定温度和时间加热，然后冷却至室温，取出反应釜，抽滤提取液，即得到分析液。

2标准曲线的制备

总黄酮含量的测定采用NAN O2-Al（N O3）3比色法，以芦丁作为标准品，250n m处测定吸光度，绘制标准曲线，得线性回归方程A=1 9.921C+0.055 9，其中R2=0.9 979。

3 酸枣仁总黄酮含量分析

精确移取0.1 m L提取液，确保吸光度在0.2～0.3。按公式（1）计算提取率。

4 溶剂热提取总黄酮单因素设计

精密称取1.0000g脱脂酸枣仁粉，选择料液比1∶20、1∶3 0、1∶4 0、1∶5 0和1∶6 0，乙醇体积分数5 0%、6 0%、7 0%、8 0%和9 0%，提取温度7 0、8 0、9 0、100 ℃和1 10℃，提取时间1、2、3、4 h和5 h，提取1次进行单因素试验，考察各因素对酸枣仁总黄酮提取率的影响。

5 响应面优化分析酸枣仁总黄酮提取工艺

根据单因素试验结果，设计试验见表1。

表1 水平因素表

结果与讨论

单因素试验结果分析

1 料液比对总黄酮提取率的影响

提取温度100 ℃，乙醇体积分数7 0%，改变料液比提取2h，酸枣仁总黄酮含量的变化如图1所示。随料液比的增加酸枣仁中黄酮含量增加，当料液比超过1∶5 0（g/m L）时，总黄酮提取量反而呈现下降。因为当扩散达到平衡时，提取剂的增加不会促进酸枣仁总黄酮提取率的增加，本实验选取料液比为1∶5 0（g/m L）。

图1 料液比对提取率的影响

2乙醇体积分数对总黄酮提取率的影响

在100 ℃下按照1∶5 0的料液比加入不同的乙醇体积分数提取2h，观察酸枣仁总黄酮得率的变化，如图2所示。由图2可知，乙醇体积分数为7 0%时，黄酮提取率最高。这是因为较低乙醇体积分数含水较高，不利于黄酮提取率。但乙醇体积分数过高，脂溶性物质的溶出量增加，导致总黄酮类物质溶解度明显下降，总黄酮提取量下降。所以最佳的乙醇体积分数为7 0%。

图2 乙醇体积分数对提取率的影响

酸枣仁总黄酮提取响应面法优化分析

按照单因素的试验结果，选取4个因素作为自变量进行响应面优化试验，自变量分别为料液比（X1）、乙醇体积分数（X2）、提取温度（X3）和提取时间（X4），试验设计和方差分析结果见表2。

采用d eSi GnexPert8.0.5软件对试验结果进行多元回归拟合，得到二次回归模型方程为：

总黄酮提取率

通过方差分析和相关系数考察模型的可靠性，模型相关系数R2=0.909 8，说明该模型拟合效果较好，试验数值与预测值比较接近。

表2 方差分析结果

结语

以脱脂后的酸枣仁为材料，采用溶剂热法提取酸枣仁总黄酮，根据单因素试验结果，设计相关响应面试验，建立回归模型，并对试验结果进行验证，回归模型较好地预测酸枣仁总黄酮的提取率。最佳工艺为：料液比1∶5 7（g/m L），乙醇体积分数7 4%，提取温度93℃，提取时间4.2h，提取三次酸枣仁总黄酮提取率1 6.761 m g/g。

[1]程晓卫,张须学.酸枣仁功用古今谈[J].中医药管理志,2006,14(11):66-68.

[2]康健.酸枣仁汤治疗失眠60例临床观察[J].实用中医内科志,2014,28(6):53.

[3]谢晓亮.河北省太行山区野生酸枣资源及利用的调查[J].河北林业科技,1989(3):40-42.

[4]高群.酸枣仁黄酮对糖尿病大鼠肾损伤的保护作用[J].安徽农业科学,2013,41(6):2355-2357.

吉林省教育厅吉教科合字[2014]第288号。

吴修利（1974-），吉林长春人，博士，副教授。研究方向：天然产物的开发利用。