青海地区犬感染棘球绦虫的调查

阚威，赵全邦，马睿麟，沈艳丽，马占全，胡广卫，李静，马世春，蔡金山

(1．青海省动物疫病预防控制中心，青海西宁810000;2．中国动物疫病预防控制中心，北京朝阳100125)

青海地区犬感染棘球绦虫的调查

阚威1，赵全邦1，马睿麟1，沈艳丽1，马占全1，胡广卫1，李静1，马世春2，蔡金山1

(1．青海省动物疫病预防控制中心，青海西宁810000;2．中国动物疫病预防控制中心，北京朝阳100125)

包虫病也称棘球蚴病，是由带科(Taeniidae)棘球属(Genus Echinococcus)和泡球属(Genus Alveococcus)绦虫的中绦期(幼虫)引起的人兽共患寄生虫病，有棘球蚴病(Echinococcosis)和泡球蚴病(Alveococcosis)两种［1］。棘球蚴病在以畜牧业为主的国家和地区多见，在我国，主要流行于西北、华北、东北，以及西南广大农牧区，是严重危害人畜健康和妨碍畜牧业生产发展的地方病［2］。青海省是棘球蚴病的高发流行区，其疫病分布之广，疫情之重，危害之大已成为主要的动物疫病，病原主要有细粒棘球绦虫(E-chinococcus granulosus)、多房棘球绦虫(Echinococcus multiloclaris)、少节棘球绦虫(Echinococcus oligarthrus)和伏氏棘球绦虫(Echinococcus vogeli)4个虫种［3］。主要寄生于狐、犬、猫等食肉动物的小肠中，青海省牧区内有数量众多的牧羊藏犬，此外有野犬和其他犬类及狼、狐狸等食肉动物存在［4］。棘球绦虫的终末宿主(犬)是棘球蚴病的重要传染源，棘球绦虫的虫卵随牧羊犬粪排出，污染食物、饮水和周围环境，所以及时、准确地检测流行区终末宿主棘球绦虫的感染情况和对感染动物进行强制驱虫，对控制棘球蚴病的流行、综合防控措施实施和防治效果等均具有重要的意义［5］。

鉴于青海省是棘球蚴病的主要流行区，为掌握犬棘球绦虫病的流行情况，遏制家畜棘球蚴病的流行，中国动物疫病预防控制中心制定了《棘球蚴病综合防控技术集成与示范项目》，对包括青海省在内的5省(区)进行家畜棘球蚴病流行病学调查，以建立棘球蚴病综合防控模式，形成棘球蚴病防控技术规范及防控水平评估标准，并加以示范推广。本文对青海省境内的牧羊犬棘球绦虫(包虫)病感染情况已进行调查和研究，旨在从终末宿主着手，制定有效的防控措施，以降低棘球蚴病在人畜之间的流行。

1 材料与方法

1．1 调查地区全省40个县(市)。

1．2 实验动物2000年至2014年全省40县(市)牧民定居点牧羊犬或藏犬。

1．3 试验试剂及药品氢溴酸槟榔碱、犬粪抗原检测试剂(天津天之泰有限责任公司)、蔗糖、剖检手术器械。

1．4 方法

1．4．1 氢溴酸槟榔碱泻下法1958年来自新西兰的盖摩教授首次提出了氢溴酸槟榔碱泻下法，从此槟榔碱泻下就成为犬感染细粒棘球绦虫重要的检测方法之一。对全省各县(市)的牧羊犬或藏犬，按0.5 mL/kg体重的剂量，将1.5%氢溴酸槟榔碱溶液注入口腔，服药后约40～60 min，会排出黏性液体粪样，收取其1/3粪样，用3%福尔马林溶液轻洗于搪瓷盘中沉淀片刻，弃去上清液，再进行肉眼检查。

1．4．2 剖检法犬棘球绦虫病感染的定性定量调查依据最准确的就是剖检法，同时剖检法也是检测棘球绦虫感染的最准确方法，是WHO规定的棘球绦虫感染检测的金标准。其操作为收集调查动物，剖检，取小肠，两端结扎，置于已编号的塑料袋或容器中。低温保存，待检。如要长距离运送样品，应该用冷藏车或冰块运输。剖检时。可将小肠分为数段，置于托盘，用剪刀剪开后浸入温生理盐水中。然后，直接取样或者对样品进行富集后用肉眼和显微镜观察用肉眼观察或寄生虫学常规方法收集虫体，统计结果，并计数。

1．4．3 粪抗原ELISA检测法棘球绦虫寄生于宿主的十二指肠处，其在宿主体内所产生的分泌物、代谢物、脱落的节片等随着宿主排泄物排出体外，称为粪抗原，常用的粪抗原检查法双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)因操作和结果观察容易，而被广泛的使用。通过粪抗原制备特异性的抗体，应用抗原－抗体特异性结合的原理，检测粪抗原，对终末宿主的感染情况进行检测。

1．4．4 饱和糖水漂浮法有时为了进行科学研究或达到准确诊断目的，常将检出虫卵作为实验室确诊的依据之一，利用寄生虫饱和蔗糖漂浮法，称取一定量的粪便，用饱和蔗糖溶液溶解，沾取漂浮液上部的溶液，镜检是否有虫卵。其过程是在500 mL水中加入650 g蔗糖溶解后，可到比重1.27的饱和蔗糖液。称取0.5 g粪便，放人15 mL离心管中，加少量饱和蔗糖液，充分搅拌后，加饱和蔗糖液至略隆起于试管口，静置30 min，镜检计数。

2 结果

2．1 氢溴酸槟榔碱泻下法结果2000年从德令哈、称多、甘德、泽库、贵南5个县采用氢溴酸槟榔碱泻下法，共检测306只牧羊犬，其中有110只藏犬患有细粒棘球绦虫的感染，感染率为35.95%。2012年在全省40县(市)基层兽医站同样采用氢溴酸槟榔碱泻下法，检测230只牧羊犬，其中22只牧羊犬患有细粒棘球绦虫的感染，感染率为9.57%。合计:2年采用氢溴酸槟榔碱泻下法共检测536只牧羊犬，132只感染有细粒棘球绦虫，平均感染率为22.76%。

2．2 剖检法结果2012年剖检玉树、刚察、同德、泽库、海晏、兴海、贵南7个县的28只犬，剖检结果显示，有18只牧羊犬感染细粒棘球绦虫，感染率为64.29%。

2014年对共和、刚察、贵南、都兰、泽库、互助6个县的34只牧羊犬进行剖检检查，剖检结果显示:6个县共有20只犬感染细粒棘球绦虫，感染率为58.82%。合计，2012、2014年共剖检96只牧羊犬，其中62只感染有细粒棘球绦虫，平均感染率为64.56%。

2．3 粪抗原ELISA检测法结果采用粪抗原ELISA检测犬粪3 887份，包括2009年刚察636份、2010年刚察644份、2011年全省县(市)1 017份、2012年全省基层兽医站1 590份，检出感染棘球绦虫犬粪496份，2009年刚察121份，感染率为33.80%，2010年刚擦196份，感染率30.43%、2011年全省40个县(市)111份，感染率为10.91%、2012年基层兽医站68份，感染率为4.30%，4年检测结果显示，犬棘球绦虫病的平均感染率为19.86%。

2．4 饱和糖水漂浮法结果采用饱和糖水漂浮法对2012年从海晏、贵南、同德、泽库、互助采集的102份犬粪进行检测，检测结果显示，仅有3份感染棘球绦虫病，感染率为2.93%。

3 讨论与小结

有史以来，氢溴酸槟郎碱泻下法是确定犬棘球绦虫病感染的经典方法之一，称之为“槟榔碱泻下检测法”，在牧医工作中具有较好的应用价值。此外，应用氢溴酸槟榔碱泻下法检测犬棘球绦虫病的感染，不仅工作难度大，既浪费时间又浪费精力，而且对畜牧兽医工作人员具有潜在的感染危险性，并造成对周围生活环境的污染，导致棘球蚴病的人畜感染。随着吡喹酮等高效驱虫药的问世和使用，槟榔碱作为驱虫药的历史已经过去，现仅用于绦虫感染流行病学基线调查。本试验在2000年和2012年采用此方法，共检测536只藏犬，2年平均感染率为22.76%，其中2000年为35.95%，2012年为9.57%，由此看出通过近几年牧区使用吡喹酮给牧羊犬驱虫，牧羊犬感染棘球绦虫比例有所下降。

早在1992年Allan［6］等，首次报道用兔抗细粒棘球绦虫成虫体粗提抗原的抗体做夹心ELISA检测感染犬细粒棘球绦虫粪抗原，敏感性为87.5%特异性为96.5%，且将保存于5.0%甲醛放置6个月以上的粪便标本检测效果不会发生改变。2008年，国内学者黄燕［7］等，研究了犬粪便棘球绦虫虫体抗原双抗体ELISA检测方法，通过与剖检结果比较系统的敏感性为92.3%特异性为80%，此方法可用于细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫感染的诊断，还可检出不同荷虫量自然感染狐狸多房棘球绦虫的粪抗原，最低可检出50条虫体感染的粪便样品，认为粪抗原夹心ELISA检测具有早期诊断价值和较好的疗效考核价值。由此可见，粪抗原检测法在诊断犬细粒棘球绦虫感染具有较高的敏感性和特异性，可作为棘球蚴病常规实验方法推广应用。粪抗原夹心ELISA检测不仅具有早期诊断价值，而且还有较好的疗效考核价值，将成为槟榔碱检测法的替代方法，已逐渐用于各个实验室。本试验使用天津天之泰有限责任公司生产的粪抗原ELISA检测试剂盒，操作简便省时，试验结果可信性强，可以作为实验室和临床诊断犬棘球绦虫病的方法，但是该试剂成本较高，且要求检测数量较大，因此仅能在动物疫控中心使用。

剖检法操作时，应尽快从剖检犬腹腔中取出小肠，两端结扎，置于已编号的塑料袋或容器中。低温保存，待检。如要长距离运送样品，应该用冷藏车或冰块运输。剖检时，可将小肠分为数段，置于托盘，用剪刀剪开后浸入温生理盐水中。然后，直接取样或者对样品进行富集后用肉眼和显微镜观察并计数。此次在全省部分县市共剖检96只藏犬，2010年34只，2012年28只，2014年34只，感染棘球绦虫犬62只，其3年平均感染率为64.57%，平均感染强度可达164 565，感染范围为0～220万。从剖检年份来看，3年感染棘球绦虫的犬只比列有所下降，同样说明近几年牧区采用吡喹酮给犬驱虫，达到一定的效果，对遏制棘球蚴病的流行起到了一定的作用。

对于饱和糖水漂浮法，是当下基层惯用的检测方法，其操作简单方便，但是检出率较低，就从本试验研究可以看出，在2012年采用饱和糖水漂浮法检测102份犬粪便，仅检出3份，比起以上3种方法相差甚远，因此，兽医工作者应综合考虑选择合适的检测方法，以达到对犬棘球绦虫病调查的准确性。

此次调查研究长达14年，综合分析试验结果得知，我们长期以来在牧区推广吡喹酮对牧羊犬驱虫试验，得到了一定的效果，连年来牧羊犬棘球绦虫病的感染率有所下降，这是对我们防控工作的肯定，也缓和了棘球蚴病在家畜与人类之间的传播。

［1］Eckert J，Gemmell MA，Meslin FX，et al．WHO/0IE Manual on Echinococcosis in Humans and Animals:A Public Health Problem of Global Concern［J］．World Organization yor Animal Health Paris France，2001．

［2］汪明主编．兽医寄生虫学［M］．北京:中国农业出版社，2007: 378-379．

［3］曹宏主编．青海省动物疫病流行病学调查［M］．西宁:青海人民出版社，2008:345．

［4］李春花，蔡进忠，贾万忠，等．青海牧区藏犬寄生虫病流行病学调查研究［J］．青海畜牧兽医杂志，2014，44(4):1-4．

［5］贾万忠，闫鸿斌，王玉朝，等．犬科动物棘球绦虫感染检测方法研究进展［J］．中国人兽共患病学报，2010，26(2):179-182．

［6］Allan J C，Craig P S，Garcia Noval J，et al．Coproantigen detection for immunodiagnosis of echinococcosis and taeniasis in dogs and humans［J］．Parasitology，1992，104(Pt 2):347-355．

［7］黄燕，Heath D D，Antone J C，等．犬粪便棘球绦虫抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法建立与应用［J］．预防医学情报杂志，2008，24(6):407-411．

S852．65+5;S852．73+4

B

0529-6005(2017)01-0045-02

2015-12-14

中国动物疫病预防控制中心棘球蚴病综合防控技术集成与示范项目

阚威(1986-)，男，兽医师，硕士生，主要从事动物防疫工作，E-mail:kanweind@163．com

蔡金山，E-mail:894569380@qq．com