实验猕猴感染弓形虫及衣原体血清学检测

黄翠琴 ， 陈仁锋 ， 王 琨 ， 温福利 ， 王寿昆 ， 杨小燕

(1.龙岩学院生命科学学院 福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室 ， 福建 龙岩 364012 ； 2.福建农林大学动物科学学院 福建省动物药物工程实验室 ， 福建 福州 350002 ; 3.福建龙岩闽雄生物科技有限公司 ， 福建 龙岩 364000)

弓形虫(Toxoplasmagondii)是感染包括鸟类、人类及海洋兽类在内的几乎所有温血动物的机会致病性原虫。该病呈全球范围流行，全世界约有1/3的人感染，严重危害人类健康。衣原体(Chlamydia)是一类专性胞内寄生的革兰阴性菌，能够引起动物包括肠炎、肺炎、关节炎、脑炎、结膜炎、不孕不育甚至流产等多种临床病症，人类感染也可导致失明及呼吸道和泌尿生殖道的多种病症，鹦鹉热衣原体感染也可导致人死亡。福建省计划生育科学技术研究所拥有全省最大的猕猴养殖及实验基地，定期对猕猴病原体的调查及净化工作，将有利于猕猴物种的保存及今后科学实验工作。弓形虫病和衣原体病均缺乏明显的临床症状且危害极大，给患病动物的诊断带来极大的挑战，因此，弓形虫及衣原体感染的调查显得尤其重要。本试验采用改良凝集试验(MAT)和正向间接血凝试验(IHA)，分别对福建省计划生育科学技术研究所123只实验猕猴血清进行弓形虫抗体(IgG)和衣原体抗体(IgG)检测，为综合防治猕猴衣原体病及弓形虫病提供依据。

1 材料与方法

1.1 检测动物血样 采集福建省计划生育科学技术研究所实验猕猴血液123份。无菌采集动物的静脉血，分离血清后-20 ℃保存。

1.2 检测试剂 弓形虫改良凝集试验(MAT)试剂盒(由中国农业科学院兰州兽医研究所朱兴全教授惠赠)，衣原体(IHA)抗体检测试剂盒，购自中国农业科学院兰州兽医研究所。

1.3 主要仪器 台式离心机(上海安亭公司生产)，37 ℃恒温培养箱、96孔U型有机玻璃反应板、96孔V型(110°)有机玻璃反应板、移液枪一套(德国Eppendorf公司)；漩涡混匀器、掌上离心机、超净工作台。

1.4 方法

1.4.1 弓形虫改良凝集试验(MAT) 分别设置阴性和阳性对照，阳性抗体滴度大于1∶200说明本试验有效，被检血清抗体效价达到或大于1∶20者判为阳性，无蓝色沉淀为阳性，有蓝色沉淀为阴性。

1.4.2 衣原体正向间接血凝试验(IHA) 在96孔V型(110°)有机玻璃反应板上进行血清中的衣原体抗体的检测。操作步骤和结果判定严格按照衣原体IHA抗体检测试剂盒说明书进行。在阴、阳性及空白对照、对照各孔均成立的条件下，对待检血清进行判定：待检血清1∶4孔出现“+”以下者为阴性；1∶4孔“++”至1∶16孔“+”以下者为可疑；1∶16孔出现“++”以上者为阳性。

1.4.3 数据分析 弓形虫抗体和衣原体抗体滴度分布采用Excel 2010分析。

2 结果

实验猕猴弓形虫与衣原体抗体阳性率分别为4.88%(6/123)和3.25%(4/123)。弓形虫与衣原体抗体总阳性率差异不显著(P>0.05)。

弓形虫抗体滴度在1∶20～1∶40之间，衣原体抗体滴度均在1∶16。弓形虫与衣原体抗体的平均滴度(几何平均数)分别为23.47和17.00，方差值分别为5.16和1.00，弓形虫与衣原体抗体滴度的方差值均小于平均值，其滴度分布为均匀分布。

3 讨论

本试验采用MAT方法调査了福建省计划生育科学技术研究所猕猴弓形虫抗体阳性率为4.88%，抗体滴度在1∶20～1∶40之间，该结果高于广西和广东非人灵长类实验中心猕猴阳性率0%(0/120)和2.1%(5/240)[1]。野生动物弓形虫阳性率不仅与动物种属有关，主要还在于饲养管理，猕猴主要通过食入含有弓形虫包囊的肉类而感染弓形虫病[2]。

衣原体是一种可在人和多种动物间广泛传播的病原体，并引起人的健康危害及对多数濒临灭绝的野生动物造成巨大的威胁。正向间接血凝实验(IHA)是常用的衣原体检测方法之一。国内对野生动物感染衣原体的报道较少，本研究运用IHA方法对猕猴感染衣原体进行了血清学调查，结果发现，猕猴衣原体阳性率达3.25%，衣原体抗体滴度均在1∶16。

弓形虫与衣原体抗体滴度的方差值均小于平均值，其滴度分布为均匀分布，说明实验猕猴体内感染弓形虫与衣原体相对稳定。定期对猕猴弓形虫与衣原体的调查及净化工作，将有利于猕猴物种的保存及今后科学实验工作。总之，本次血清学调查结果表明，福建省计划生育科学技术研究所实验猕猴存在一定程度的弓形虫和衣原体感染，需采取措施进行预防或治疗；该结果也丰富了国内实验猕猴弓形虫病和衣原体病的流行病学数据。

[1] Li H, Yan C, Li J,etal. Seroprevalence ofToxoplasmagondiiin Bred Cynomolgus Monkeys (Macaca fascicularis) in China[J]. Journal of parasitology, 2010, 96(4): 807-808.

[2] Zarnke R L, Dubey J P, Kwok O C,etal. Serologic survey forToxoplasmagondiiin selected wildlife species from Alaska[J]. Journal of wildlife diseases, 2000, 36(2): 219-224.