白花蛇舌草氯仿部位的化学成分研究Δ

于 亮，姜 洁，刘 勇，付小凯，黄祝刚，容 蓉，蒋海强，巩丽丽，吕青涛#（.山东中医药大学药学院，济南 25055；2.山东省药学科学院中医药研究所，济南 2500；.山东大学齐鲁医院，济南 25002）

白花蛇舌草氯仿部位的化学成分研究Δ

于 亮1，2＊，姜 洁3，刘 勇1，付小凯1，黄祝刚1，容 蓉1，蒋海强1，巩丽丽1，吕青涛1#（1.山东中医药大学药学院，济南 250355；2.山东省药学科学院中医药研究所，济南 250101；3.山东大学齐鲁医院，济南 250012）

目的：研究白花蛇舌草氯仿部位的化学成分。方法：采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和薄层色谱对白花蛇舌草氯仿部位化合物进行分离纯化，根据理化性质和波谱数据分析鉴定化合物结构。结果：从白花蛇舌草氯仿部位中分离得到11个化合物，分别鉴定为2-羟基-3-甲基蒽醌（1）、2-羟基-1-甲氧基-3-甲基蒽醌（2）、2-羟基-1-甲氧基蒽醌（3）、邻苯二甲酸二丁酯（4）、甲基异茜草素（5）、熊果酸（6）、耳草酮B（7）、莨菪亭（8）、2，6-二羟基-3-甲基-4-甲氧基蒽醌（9）、2-羟基-3-羟甲基蒽醌（10）、正十六烷（11）。结论：化合物4、7、10、11为首次从白花蛇舌草植物中分离得到，本研究为白花蛇舌草质量评价奠定了一定基础。

白花蛇舌草；邻苯二甲酸二丁酯；耳草酮B；2-羟基-3-羟甲基蒽醌；正十六烷

白花蛇舌草为茜草科Rubiaceae耳草属Hedyotis L.植物白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.的全草，具有清热、解毒、消肿、止痛之功效[1]，现临床主要用于抗癌治疗[2]，其主要含有三萜类、蒽醌类、环烯醚萜类、甾醇类、香豆素类、黄酮类、烷烃类等化学成分[3]。前期药理实验已表明白花蛇舌草氯仿部位具有较强的抗子宫内膜癌Ishikawa细胞的活性，为探究其活性成分，本试验对该植物氯仿部位的化学成分进行了系统分离，以为白花蛇舌草资源的开发利用提供一定参考。

1 材料

1.1 仪器

MAT-212型质谱仪（美国Varian公司）；Bruker AM-400/600型核磁共振仪（德国Bruker公司）；XRC-1型显微熔点仪（四川大学科教仪器开发公司）；1200型高效液相色谱（HPLC）仪，包括二极管阵列检测器（美国Agilent公司）；AZL-600Y型粉碎机（永康市艾泽拉仪器有限公司）；EYELA型旋转蒸发仪（日本东京理化器械株式会社）。

1.2 试剂

柱色谱硅胶（规格：100～200、200～300目）、薄层层析硅胶均购自青岛海洋化工有限公司；Sephadex LH-20凝胶（瑞典Pharmacia公司）；甲醇、四氢呋喃（THF）为色谱纯，乙醇、三氯甲烷、二氯甲烷、石油醚为分析纯，水为超纯水。

1.3 药材

白花蛇舌草药材购自济南建联中药店（产地：江西，批号：20120730、20130201）经山东中医药大学中药鉴定教研室李峰教授鉴定为真品。

2 提取与分离

取干燥白花蛇舌草药材15 kg，粉碎，70%乙醇回流提取3次（药材与乙醇质量比为1∶7），每次1.5 h。抽滤、减压浓缩、离心弃去沉淀，依次用石油醚、氯仿萃取，减压浓缩，依次得到石油醚部位浸膏8 g、氯仿部位浸膏75 g。

取氯仿部位浸膏75 g，以二氯甲烷-甲醇（300∶0、300∶1、60∶1、30∶1、15∶1、3∶1、0∶1，V/V）梯度洗脱，得7个流分（Fr.1～Fr.7）。其中，流分Fr.4减压浓缩后有黄色沉淀产生，此黄色沉淀用HPLC柱（流动相：THF-水，40∶60，V/V）洗脱，得化合物1（26 mg）。流分Fr.3以石油醚-乙酸乙酯（60∶1、30∶1、9∶1、3∶1、1∶1、1∶3，V/V）梯度洗脱，得Fr.3-1～Fr.3-4；流分Fr.3-3在薄层色谱上点样，以石油醚-乙酸乙酯（2.5∶1，V/V）为展开剂展开，色谱带成分经Sephadex LH-20凝胶柱分离，得化合物2（35 mg）、化合物3（6 mg）；流分Fr.3-4在薄层色谱上点样，先以石油醚-乙酸乙酯-甲酸（2∶1∶0.01，V/V/V）为展开剂展开，后以石油醚-乙酸乙酯（1∶1，V/V）为展开剂展开，得化合物4（5 mg）。流分Fr.4以石油醚-乙酸乙酯（60∶1、30∶1、15∶1、8∶1、4∶1、2∶1、1∶1、0∶1，V/V）梯度洗脱，得Fr.4-1～Fr.4-4；流分Fr.4-2减压浓缩后有黄色沉淀产生，此黄色沉淀用HPLC柱（流动相：甲醇-水，70∶30，V/V）洗脱，得化合物5（11 mg）；Fr.4-3以石油醚-乙酸乙酯（60∶1、30∶1、15∶1、8∶1、4∶1、2∶1、1∶1、0∶1，V/V）梯度洗脱，得化合物6（52 mg）、化合物7（20 mg）；Fr.4-4为针状结晶，纯化后得化合物8（9 mg）。流分Fr.5以石油醚-乙酸乙酯（100∶0、100∶1、50∶1、30∶1、10∶1、3∶1，V/V）梯度洗脱，得Fr.5-1～Fr.5-6；Fr.5-3以石油醚-乙酸乙酯（30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、8∶1、5∶1、3∶1，V/ V）梯度洗脱，得Fr.5-3-1～Fr.5-3-4；将Fr.5-3-1中28、30号流分的沉淀分别纯化，得化合物9（10 mg）、化合物10（10 mg）；Fr.5-4以二氯甲烷-甲醇（200∶1、100∶1、60∶1、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1，V/V）梯度洗脱，取出2号流分的结晶，得化合物11（5 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色针状结晶；经薄层色谱板展开，氨熏后显红色；Borntrager’s反应呈阳性；mp：234～235℃。EI-MS：m/z 238[M]+；1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：11.014（1H，s，OH），8.125（2H，m，H-5，8），7.910（1H，s，H-1），7.876（2H，m，H-6，7），7.516（1H，s，H-4），2.271（3H，s，CH3）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：181.77（C-9），182.97（C-10），161.81（C-2），134.78（C-7），134.33（C-6），133.64（C-8a），133.59（C-10a），133.51（C-4a），132.37（C-3），130.29（C-1），126.96（C-5），126.92（C-8），125.43（C-9a），111.70（C-4），16.64（CH3）。与文献[4]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为2-羟基-3-甲基蒽醌（2-Hydroxy-3-methylanthraquinone）。

化合物2：黄色针状的结晶；经薄层色谱板展开，氨熏后显红色；mp：220～222℃。EI-MS：m/z 268[M]+；1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ：8.245（2H，m，H-5，8），7.985（1H，s，H-4），7.753（2H，m，H-6，7），4.025（3H，s，OCH3），2.406（3H，s，CH3）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：182.52（C-10），182.41（C-9），153.78（C-2），146.03（C-1），134.49（C-8a），133.74（C-7），133.64（C-6），132.96（C-10a），131.34（C-3），126.96（C-8），126.76（C-5），126.66（C-4），126.48（C-4a），123.52（C-9a），62.15（OCH3），16.32（CH3）。与文献[4]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为2-羟基-1-甲氧基-3-甲基蒽醌（2-Hydroxy-1-methoxy-3-methylanthraquinone）。

化合物3：黄色针状的结晶；经薄层色谱板展开，氨熏后显红色；mp：178～179℃。EI-MS：253 m/z[M-H]—；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：3.838（3H，s，OCH3），7.330（1H，d，J＝8.4 Hz，H-3），7.870（2H，m，H-6，7），7.930（1H，d，J＝8.4 Hz，H-4），8.126（2H，m，H-5，8），10.824（1H，s，OH）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：60.98（OCH3），121.82（C-4），125.35（C-3），126.20（C-9a），126.56（C-5），127.03（C-4a），127.17（C-8），132.09（C-10a），134.31（C-6），134.52（C-7），134.93（C-8a），148.08（C-l），158.31（C-2），181.88（C-9），182.52（C-10）。与文献[5]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为2-羟基-1-甲氧基蒽醌（2-Hydroxy-1-methoxyanthraquinone）。

化合物4：无色油状液体。ESI-MS：m/z 301[M+ Na]+；1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.720（2H，dd，J＝6.0，3.2 Hz，H-3，6），7.670（2H，dd，J＝6.0，3.2 Hz，H-4，5），4.224（4H，t，J＝6.5 Hz，H-8，8′），1.643（4H，m，H-9，9′），1.370（4H，m，H-10，10′），0.907（6H，t，J＝7.2 Hz，H-11，11′）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：14.00（CH3-11，11′），19.12（C-10，10′），30.48（C-9，9′），65.48（C-8，8′），129.13（C-3，6），131.97（C-1，2），132.18（C-4，5），167.42（C-7，7′）。与文献[6]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为邻苯二甲酸二丁酯（Dibutyl phthalate）。

化合物5：黄色针状结晶，经薄层色谱板展开，氨熏后显红色；Borntrager’s反应呈阳性；mp：249～250℃。ESI-MS：m/z 253[M-H]—；1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.248（1H，s，H-4），8.140（1H，d，J＝7.2 Hz，H-5），7.899（2H，m，H-6，7），8.210（1H，d，J＝7.2 Hz，H-8），2.080（3H，s，CH3），13.162（1H，s，1-OH），11.357（1H，s，3-OH）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：8.57（C-11），108.25（C-4），109.20（C-9a），117.73（C-2），126.82（C-8），127.17（C-5），132.26（C-8a），133.42（C-10a），133.65（C-4a），134.82（C-7），135.02（C-6），162.97（C-3），164.08（C-1），182.47（C-10），186.40（C-9）。与文献[7]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为甲基异茜草素（Rubiadin）。

化合物6：白色片状结晶；经薄层色谱板展开，10%硫酸-乙醇显色为紫红色；Liebermann-Burchard反应呈阳性；mp：239～240℃。ESI-MS：m/z 456[M]+；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：0.677（3H，s，Me-24），0.750（3H，s，Me-25），0.810（3H，d，J＝6.0 Hz，Me-29），0.867（3H，s，Me-23），0.913（3H，d，J＝7.6 Hz，Me-30），0.979（3H，s，Me-26），1.041（3H，s，Me-27），2.110（1H，d，J＝11.2 Hz，H-18β），2.999（1H，m，J＝4.4 Hz，H-3），4.280（1H，d，J＝4.4 Hz，OH），5.13（1H，s，H-12），11.933（1H，s，COOH）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：15.70（C-24），16.54（C-25），17.39（C-26），17.48（C-29），18.48（C-6），21.45（C-30），23.33（C-11），23.75（C-27），24.29（C-16），27.47（C-2），28.02（C-15），28.73（C-23），30.67（C-21），38.72（C-1），38.92（C-4），38.98（C-8），38.98（C-19），38.85（C-20），42.12（C-14），47.30（C-17），47.50（C-9），52.86（C-18），55.27（C-5），77.31（C-3），125.05（C-12），138.66（C-13），178.72（C-28）。与文献[8]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为熊果酸（Ursolic acid）。

化合物7：青色六面体块状结晶；经薄层色谱板展开，荧光灯（365 nm）下显蓝光；mp：149～150℃。ESIMS：m/z 245[M+H]+；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：1.752（3H，s，H-3′），3.130（1H，dd，J＝16.2，8.1 Hz，H-9a），3.513（1H，dd，J＝16.2，10.0 Hz，H-9b），4.955（1H，s，H-2′a），5.122（1H，s，H-2′b），5.434（1H，t，J＝8.8 Hz，H-8），6.193（1H，d，J＝9.2 Hz，H-3），6.936（1H，s，H-5），7.900（1H，d，J＝9.6 Hz，H-4），9.675（1H，s，OH）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：17.27（C-3′），31.56（C-9），87.56（C-8），112.17（C-5），113.00（C-4a），113.13（C-3），113.88（C-2′），114.49（C-9a），139.17（C-1′），143.63（C-6），144.83（C-4），145.11（C-9b），152.01（C-6a），160.82（C-2）。与文献[9]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为耳草酮B（Hedyotiscone B）。

化合物8：青色针状结晶；经薄层色谱板展开，荧光灯（365 nm）下显蓝光；紫外收光谱：λEtOHmax：228、253、298、347 nm；λEtOH-NaOHmax：242、400 nm。ESI-MS：m/z 191 [M-H]—；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：3.792（3H，s，OCH3），6.122（1H，d，J＝9.6 Hz，H-3），6.704（1H，s，H-8），7.133（1H，s，H-5），7.869（1H，d，J＝9.6 Hz，H-4）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：161.37（C-2），110.56（C-3），144.97（C-4），109.5（C-5），146.42（C-6），154.23（C-7），103.18（C-8），150.68（C-9），109.72（C-10），56.36（OCH3）。UV数据与文献[10]对照完全一致，可确定该化合物不是异莨菪亭；核磁共振数据与文献[11]对照基本一致，可确定该化合物为莨菪亭（Scopoletin）。

化合物9：黄色片状的结晶；经薄层色谱板展开，氨熏后显红色；Borntrager’s反应阳性；mp：226～228℃。ESI-MS：m/z 284[M]+，266[M-H2O]+，255[M+H-OCH3]+；1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：10.898（1H，s，2-OH），10.145（1H，s，6-OH），7.987～8.001（1H，d，J＝8.4 Hz，H-8），7.800（1H，s，H-1），7.434～7.438（1H，d，J＝2.4 Hz，H-5），7.15（1H，dd，J＝8.4，2.4 Hz，H-7），3.786（1H，s，4-OCH3），2.291（1H，s，3-CH3）。13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：182.02（C-10），180.71（C-9），162.93（C-6），154.97（C-2），146.98（C-4），136.69（C-8a），131.96（C-3），129.33（C-8），125.61（C-1），125.46（C-10a），124.76（C-9a），124.34（C-4a），121.07（C-7），112.25（C-5），61.32（OCH3），16.75（CH3）。与文献[12]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为2，6-二羟基-3-甲基-4-甲氧基蒽醌（2，6-Dihydroxy-3-methyl-4-methoxyanthraquinone）。

化合物10：黄色片状的结晶；经薄层色谱板展开，氨熏后显红色；Borntrager’s反应呈阳性；mp：310～315℃；ESI-MS：m/z 253[M-H]—；1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：11.115（1H，s，1-OH），8.233（1H，s，H-4），8.132～8.170（2H，m，H-5，8），7.864～7.897（2H，m，H-6，7），7.531（1H，s，H-1），5.423（1H，s，CH2OH），4.587（2H，s，CH2OH）。13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：182.82（C-9），181.69（C-10），159.83（C-2），136.58（C-9a），134.62（C-6），134.15（C-7），133.61（C-8a），133.43（C-10a），133.29（C-3），126.80（C-5），126.73（C-8），126.39（C-4），125.24（C-4a），111.41（C-1），58.05（CH2OH）。与文献[13]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为2-羟基-3-羟甲基蒽醌（2-Hydroxy-3-hydroxymethylanthraquinone）。

化合物11：无色沙状结晶。ESI-MS：m/z 226[MI+，212[M-CH2]+，198[M-CH2-CH2]+，184[M-CH2-CH2-CH2]+；1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：1.1～1.4（28H，m），0.88（6H，t，J＝6.6 Hz）。13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：14.15（C-1，C-16），22.71（C-2，C-15），29.39（C-4，C-13），29.68（C-5，C-12），29.72（C-6，C-7，C-8，C-9，C-10，C-11），31.95（C-3，C-14）。与文献[14]对照，其碳谱数据基本一致，可确定该化合物为正十六烷（n-Hexadecane）。

4 讨论

本试验从白花蛇舌草全草中分离得到了11个化合物，分别鉴定为2-羟基-3-甲基蒽醌（1）、2-羟基-1-甲氧基-3-甲基蒽醌（2）、2-羟基-1-甲氧基蒽醌（3）、邻苯二甲酸二丁酯（4）、甲基异茜草素（5）、熊果酸（6）、耳草酮B（7）、莨菪亭（8）、2，6-二羟基-3-甲基-4-甲氧基蒽醌（9）、2-羟基-3-羟甲基蒽醌（10）、正十六烷（11），其中化合物4、7、10、11为首次从白花蛇舌草植物中分离得到。本研究结果对白花蛇舌草植物的质量标准及开发具有一定参考价值。

[1] 黄建荣，刘咏海，喻志标，等.白花蛇舌草化学成分和药理活性研究进展[J].中成药，2005，27（11）：1329-1331.

[2] 王顺启，陈力，倪虹，等.白花蛇舌草对肝癌细胞SMMC-7721基因表达的影响[J].中药材，2007，30（10）：1285-1287.

[3] 于亮，吕青涛，黄祝刚，等.HPLC法比较不同产地白花蛇舌草中两种香豆素类成分的含量[J].现代仪器与医疗，2015，21（3）：85-87.

[4] 周应军，吴孔松，曾光尧，等.白花蛇舌草化学成分的研究[J].中国中药杂志，2007，32（7）：590-592.

[5] 吴孔松，张坤，谭桂山，等.白花蛇舌草化学成分的研究[J].中国药学杂志，2005，40（11）：817-819.

[6] 罗扬婧，左月明，张忠立，等.栀子化学成分研究：Ⅲ[J].中药材，2014，37（7）：1196-1198.

[7] 陈红，陈敏，黄泽豪，等.巴戟天的化学成分研究[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（21）：69-71.

[8] 王宁辉，马养民，康永祥，等.白檀化学成分的研究[J].时珍国医国药，2014，25（11）：2624-2626.

[9] Chen YH，Chang FR.New cytotoxic 6-oxygenated 8，9-dihydrofurocoumarins，hedyotiscone A-C，from Hedyotis biflora[J].Planta Med，2006，72（1）：75-78.

[10] 谢韬，梁敬钰，刘净，等.滨蒿化学成分的研究[J].中国药科大学学报，2004，35（5）：15-17.

[11] Wu YB，Zheng CJ，Qin LP，et al.Antiosteoporotic activity of anthraquinones from Morinda officinalis on osteoblasts and osteoclasts[J].Molecules，2009，14（1）：573-576.

[12] Kang XD，Li X，Zhao CC，et al.Two new anthraquinones from Hedyotis diffusa W[J].J Asian Nat Prod Res，2008，10（2）：193-195.

[13] 黄艳丽，项伟，宋启示.美丽蛇根草的化学成分研究[J].中草药，2009，40（4）：519-521.

[14] Lawrence B Alemany.Exceptional resolution and new signals detected in the13C-NMR spectra of alkanes[J].Magn Reson Chem，1989，27（11）：1065-1068.

Study on the Chemical Constituents of the Chloroform from Hedyotis diffusa

YU Liang1，2，JIANG Jie3，LIU Yong1，FU Xiaokai1，HUANG Zhugang1，RONG Rong1，JIANG Haiqiang1，GONG Lili1，LYU Qingtao1（1.School of Pharmacy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2.Institute of Traditional Chinese Medicine，Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences，Jinan 250101，China；3.Qilu Hospital of Shandong University，Jinan 250012，China）

OBJECTIVE：To study the chemical constituents of the chloroform from Hedyotis diffusa.METHODS：Silica gel，Sephadex LH-20 column chromatography and preparative thin layer chromatography were conducted to classify and purify of chemical constituents of the chloroform from H.diffusa，the chemical structures were analyzed and identified based on physicochemical properties and spectral data.RESULTS：Totally 11 compounds were obtained from the chloroform of H.diffusa，namely 2-hydroxy-3-methylanthraquinone（1），2-hydroxy-1-methyl-3-methoxyanthraquinone（2），2-hydroxy-1-methoxyanthraquinone（3），dibutyl phthalate（4），rubiadin（5），ursolic acid（6），hedyotiscone B（7），scopoletin（8），2，6-dihydroxy-3-methyl-4-methoxyanthraquinone（9），2-hydroxy-3-hydroxymethylanthraquinone（10）and n-hexadecane（11）.CONCLUSIONS：Compound 4，7，10，11 are firstly obtained from H.diffusa，the study had laid certain foundation for the quality evaluation of H.diffusa.

Hedyotis diffusa；Dibutyl phthalate；Hedyotiscone B；2-Hydroxy-3-hydroxymethylanthraquinone；n-Hexadecane

R284.1

A

1001-0408（2017）03-0390-04

2016-02-07

2016-09-27）

（编辑：张 静）

国家自然科学基金资助项目（No.81173614）

＊硕士研究生。研究方向：药物化学。E-mail：yulianger777@163. com

#通信作者：教授，博士。研究方向：天然药物化学成分及化学分析。E-mail：luqingtao9@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.03.29