Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小细胞肺癌中的表达及临床意义

张舸 薛雷 赵晓龙 杜海荣

(秦皇岛市第一医院胸外科，河北 秦皇岛 066000)



Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小细胞肺癌中的表达及临床意义

张舸 薛雷 赵晓龙 杜海荣

(秦皇岛市第一医院胸外科，河北 秦皇岛 066000)

目的 通过免疫组化法实验观察Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小细胞肺癌中的表达，探讨其在表达的意义及其与临床特点的相关性。方法 采用S-P免疫组化法检测160例有完整资料的非小细胞肺癌术后肿瘤标本和100例距离肿瘤5 cm以上的正常肺组织中Foxp3蛋白的表达情况。分析Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小细胞肺癌组织中的表达差异；分析其与不同病理类型原发肿瘤直径、淋巴结转移等病理特征相关性。并且通过Kaplan-Meier生存曲线法比较阳性组和阴性组患者的预后情况。结果 在非小细胞肺癌中Foxp3阳性表达率为51.8%显著高于癌旁组织中的37.0%；Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小细胞肺癌组织中的阳性表达与肿瘤的原发肿瘤大小，淋巴结转移情况有显著的相关性(P<0.05)。 Kaplan-Meier生存曲线分析显示患者术后5年无瘤生存率随Foxp3阳性表达呈现下降趋势。结论 Foxp3在非小细胞肺癌组织中的表达明显增加，提示 Foxp3表达增加促使肺癌细胞发生肿瘤逃逸、对促进肺癌的形成发挥重要作用。Foxp3阳性表达5年无瘤生存率低。

Foxp3； 老年非小细胞肺癌； 早期肺癌； 预后

随着老龄人口比例逐渐增加，呼吸系统疾病也相应增多，约1/3的非小细胞癌发生于65岁以上的老年人群中。调节性T细胞(Treg)为免疫抑制中重要的T细胞亚群之一。叉头样转录因子3(Foxp3)是Treg细胞中目前明确的标志性转录因子，其功能包括促进Treg发育以及帮助Treg发挥免疫抑制作用[1]。Treg细胞在自身免疫反应中具有抑制免疫性炎症损害的中药作用，而Treg在肿瘤免疫中被发现能对机体抗肿瘤免疫应答机制起到阻碍作用，帮助肿瘤在机体发展。本文通过免疫组化法检测并分析Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小细胞肺癌中的表达与病理特征及肿瘤预后的相关性，探讨其在癌组织中的增殖活性，为评估老年非小细胞癌的生物学行为，预后以及直到术后治疗方案的选择提供参考依据。

1 材料和方法

1.1 一般资料 患者标本均来自2006年1月至2010年1月期间秦皇岛市第一医院病理科，实验组均为非小细胞癌石蜡标本，共收集160例，对照组为肿瘤5 cm以外的正常肺组织，共收集100例。实验组标本中，来自男性96例，女性64例，年龄65～78岁，中位年龄69岁，平均年龄(71.15±15.75)岁，患者资料显示术前均未接受放、化疗。按照WHO肺癌分型及UICC(2014年)肺癌分期标准判断，有腺癌标本97例，鳞癌标本63例；Ⅰ期标本70例，Ⅱ期标本90例。

1.2 材料 标本均来源我院病理科，Foxp3兔抗人单克隆抗体(美国e Bioscience)，S-P超敏免疫组织化学试剂盒(福州迈新生物技术公司)和二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(福州迈新生物技术公司)，倒置显微镜(Olympus，日本)。

1.3 方法 对实验组患者进行电话随访，均获得较完整符合研究进行的资料。本研究中复发患者定义为手术日至出现复发或转移日，无复发或转移患者为手术日至随访当日(具体记录形式为2015年1月)；总生存期(OS)为：死亡患者为手术日至死亡日，未死亡患者为手术日至随访日(具体记录形式为2015年1月)。所有随访结束后，160例中随访137例(85.6%)，失访(14.3%)，存活89例，复发53例。FoxP3的表达采用免疫组化S-P法。

1.4 结果判定 Foxp3的阳性染色标准为细胞核着色，镜下可见细胞核表达棕黄色或棕褐色颗粒物。在显微镜高倍镜下随机10个视野，共100×10个肿瘤细胞。根据染色程度和染色细胞比例综合评分：染色情况0分，基本不着色为：1分，淡棕色；2分，较明显棕黄色或棕褐色；3分，深棕黄色或棕褐色；着色比例：0分，计数细胞中显色细胞比例≤5%；1分，6%～25%；2分，26%～50%；3分，>50%。将每个视野着色程度和比例相乘，计算每个标本情歌视野平均得分：1分，阴性(-)；2～3分，着色(+)；4～6分，着色(++)；>6分，着色(+++)。本研究中阴性表达为(-)和(+)，阳性表达为(++)和(+++)。

1.5 统计学处理方法 应用 SPSS 19.0统计软件，计数资料采用率表示，不同组间比较χ2检验，生存率的组间比较采用Kaplan-Meier生存曲线法及Log-rank检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 免疫组织化学检测结果 Foxp3在癌旁正常肺组织中阳性表达为37.0%(37/100)；在非小细胞肺癌组织中其性表达率是51.8%(83/160)，阳性着色部位均为细胞核，Foxp3蛋白在非小细胞肺癌组织和癌旁正常肺组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 组织表达与临床病理特征关系 老年Ⅰ/Ⅱ期非小细胞肺癌组织中Foxp3表达与临床分期，分化程度及家族史均无明显相关性(P>0.05)。与原发肿瘤大小、淋巴结转移情况及无瘤生存时间均具有相关性(P<0.05)，与淋巴结转移成正相关(r=0.423，P=0.000) ，见表1。

表1 非小细胞肺癌中Foxp3的表达与病理参数的关系

2.3 组织中表达与术后5年无瘤生存的关系 对160例患者进行Kaplan-Meier生存曲线分析，本组患者有23例失访，2例术后出现意外死亡，结果显示在非小细胞肺癌组织中Foxp3表达(-)组5年无瘤生存率为41.7%；Foxp3表达(+)组患者5年无瘤生存率为26.3%，阴性组中位无瘤生存时间为38个月，阳性组中位无瘤生存时间为28个月，提示患者术后无瘤生存期随Foxp3的阳性表达显著下降，Log-rank检验结果显示两者差异有统计学意义(χ2=7.160，P=0.007)。结果显示在非小细胞肺癌组织中Foxp3表达(-)组总生存率为71.4%；Foxp3表达(+)组患者总生存率为48.7%，阴性组中位总生存时间未达及，原因考虑为样本量较小，及随访时间较短造成，阳性组中位总生存时间为35个月，提示患者术后总生存期随Foxp3的阳性表达显著下降，Log-rank检验结果显示两者差异有统计学意义(χ2=7.594，P=0.006)。

3 讨 论

非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌的80%～85%。既使患者的临床分期相同，术后生存率也不一样，说明有影响NSCLC预后的其他因素，需要通过研究找到判断、预示NSCLC发生、发展的新标志物。Foxp3属于脊椎动物叉头样转录因子家族，人类Foxp3基因定位在Xp11.23，有11个外显子和10个内含子，cDNA长度1869 bp，可编码2类mRNA亚型，包括全长和缺少第3外显子(Δ3亚型)型[2]。同时，编码中可产生Scurfin蛋白，其含有431个氨基酸，N端为一个锌指结构和亮氨酸拉链，为转录抑制区域，C端为叉头螺旋样结构。Scurfin蛋白经Rorkhead区域同DNA结合，发挥基因活化和表达作用[3]。本研究发现，Foxp3在癌旁正常肺组织中阳性表达为17.5%(7/40)；在非小细胞肺癌组织中其性表达率是51.8%(83/160)，经统计分析其在非小细胞肺癌组织中的阳性表达明显高于癌旁正常肺组织。Foxp3不仅在肺癌中过表达，其在胃癌、宫颈癌、淋巴瘤等多种恶性肿瘤组织及转移灶中过表达[4-5]。

Foxp3在乳腺癌新辅助化疗有效率评估发面，是独立影响因素，因化疗在降低Treg细胞水平同时抑制Foxp3 mRNA表达，达到肿瘤治疗的目的。F.Liu等[6]发现在乳腺癌中对化疗敏感性高的患者体内可测得阳性Foxp3，可见Foxp3在乳腺癌患者中的表达可预测化疗敏感性，帮助乳腺癌患者制定有效治疗方案。以上研究证明，Foxp3对乳腺癌的治疗方案选择有指导意义，但它是否对其他肿瘤的治疗方案的选择同样有指导意义。有学者[7]通过对肺癌患者外周血Foxp3的测定，研究其在化疗前后的变化，发现，化疗后CD4+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例较化疗前显著降低。本研究发现，Foxp3阳性组的5年无瘤生存率及总生存率均较阴性组显著降低，并且其阳性表达与原发肿瘤大小、淋巴结转移情况及无瘤生存时间均具有相关性，与淋巴结转移成正相关，表明Foxp3阳性率越高，淋巴结转移越多，发生远端转移的几率越大。

[1] Kryczek I, Liu R, Wang G, et al. Foxp3 defines regulatory T cells in human tumor and autoimmune disease [J]. Cancer Res, 2009, 69 (9):3995-4000.

[2] 陆威,李永翔,张尚鑫,等. 胃癌患者外周血及癌组织中CD4+CD25+调节性T细胞转录因子Foxp3的表达及临床意义 [J] 安徽医科大学学报,2013,48(7):790-793.

[3] Mahmoud SM, Paish EC, Powe DG, et al. An evaluation of the clinical significance of Foxp3+infiltrating cells in human breast cancer [J]. Breast Cancer Res Treat, 2012, 127(1):99-108.

[4] Li C, Yang W, Gai X, et al. Foxp3 overexpression decreases sensitivity to chemotherapy in mouse Lewis lung cancer cells [J]. Mol Med Rep, 2012, 6(5):977-982.

[5] 马宁耶,张瑶,张淑兰. FOXP3在宫颈癌组织中的表达及意义[J].现代肿瘤医学,2014,22(5):1146-1149.

[6] Liu F, Li Y, Ren M, et al. Peritumoral FOXP3+regulatory T cell is sensitive to chemotherapy while intratumoral FOXP3+regulatory T cell is prognostic predictor of breast cancer patients[J]. Breast Cancer Res Treat, 2012, 135(2):459-467.

[7] 孙来林,马金栋,王焕信,等. 肺癌患者外周血Foxp3检测及临床意义 [J]. 中华实用医刊,2013,40(23):28-29.

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