试剂交叉污染对生化分析仪测定总胆汁酸的影响

赵 利，陈红娟

(1.扶风县中医医院，陕西 宝鸡722200;2.扶风县妇幼保健医院)

试剂交叉污染对生化分析仪测定总胆汁酸的影响

赵 利1，陈红娟2

(1.扶风县中医医院，陕西 宝鸡722200;2.扶风县妇幼保健医院)

目的:分析生化分析仪测定总胆汁酸产生试剂交叉污染的原因，并提出相应的对策。方法:随机选取混合血清标本，采用交叉污染的项目筛选方法，对总胆汁酸测定干扰项目进行筛查，并分析生化分析仪试剂间交叉污染对总胆汁酸测定的影响。结果:本实验室常规检测项目中甘油三酯、尿酸、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇及总胆固醇5个项目对总胆汁酸(total bile acid，TBA)的测定有干扰(P＜0.05)，通过设置特殊清洗程序后，各组的交叉污染能被有效消除，与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论:在进行总胆汁酸测定时，应尽量避免试剂间的交叉污染，减少测定结果的干扰，加强仪器维护，通过特殊清洗程序，减少测定结果影响因素。

试剂交叉污染;生化分析仪;总胆汁酸

总胆汁酸(total bile acid，TBA)作为胆固醇的代谢物，是胆汁的主要成分［1］。TBA是一项十分敏感的肝功生化指标，通过测定TBA，能够有效的获得肝脏病变的相关信息。全自动生化分析仪是一种检测分析生命化学物质的仪器，具有快速、准确、重现性好、微量并能同时检测多项指标的优点，近年来被广泛应用于医院的检验及实验工作中，TBA就是常用全自动生化分析仪进行检测分析的化学成分之一［2］。然而，在日常检验工作中，笔者发现TBA的测定会由于多种因素干扰，导致其分析结果出现偏高现象。为了寻找其出现的原因及有效的解决方法，我们采用OLYMPUS AU 400全自动生化分析仪进行了一系列相关实验，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 试剂 总胆汁酸(total bile acid，TBA)酶循环法测定，高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)直接法测定，低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)直接法测定，总蛋白(total protein，TP)双缩脲法测定，白蛋白(albumin，ALB)透射比浊法测定，总胆红素(total bilirubin，TBIL)钒酸氧化法测定，直接胆红素(bilirubin direct，DBIL)钒酸氧化法测定，肌酐(creatinine，CREA)苦味酸法测定，总胆固醇(total cholesterol，TCHOL)酶比色法测定，甘油三酯(triglyceride，TG)酶比色法测定，丙氨酸氨基转移酶(alanine amino transferase，ALT)连续监测法测定，天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amino transferase，AST)连续监测法测定，载脂蛋白A/B(apolipoprotein A/B，ApoA/B)免疫透射比浊法测定，葡萄糖(glucose，GLU)己糖激酶法测定，尿酸(uric acid，UA)酶比色法测定，γ-谷胺酰转移酶(γ -glutamyl transferase，γ-GT)速率法测定，测定所用试剂均购自上海丰汇生物研究有限公司，均采用OLYMPUS AU 400全自动生化分析仪进行分析检测。

1.2 方法

1.2.1 干扰项目筛查 将无溶血、无乳浊及无黄疸的新鲜血清充分混合后在无污染的条件下连续测定血清TBA浓度10次作为对照管。实验管用同一份血清，分别进行HDL-C、LDL-C、TP、ALB、TBIL、DBIL、CREA、TCHOL、TG、AST、ALT、ApoA/B、GLU、UA、γ-GT等生化检测项目，并逐一与TBA配对测定10次(先进行测定常规生化检测项目，再进行TBA测定)。通过实验结果分析筛查发现干扰项目。

1.2.2 交叉污染的试剂确认 将0.8 mL混合血清与0.2 mL生理盐水混合作为对照管，分别用0.8 mL的混合血清与0.2 mL TG、UA、HDL-C、LDL-C及TCHOL试剂的R1、R2混合作为实验管(TG与TCHOL均无R2试剂)，每份样本重复进行10次TBA浓度测定，并进行统计学分析。

1.2.3 交叉污染的影响因素 实验管利用仪器自带的防交叉污染清洗程序，在测定TG、UA、HDL-C、LDL-C及TCHOL后，用碱性洗液清洗比色杯及吸样针后，再行测定TBA浓度10次，并将测定结果与对照管比对，观察交叉污染的情况是否依然存在。

1.3 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件对数据进行统计学分析，计量资料用均数±标准差进行表示，采用t检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 干扰项目筛查实验结果 实验管中TG、UA、HDLC、LDL-C、TCHOL检测后血清 TBA测定值分别为(17.55±0.38)(22.17±0.54)、(37.28±1.37)、(36.84 ±1.27)、(19.65±0.46)μmol/L，与对照管中TBA测定值(13.34±0.33)μmol/L比较差异有统计学意义(P＜0.05)，即此5个项目对TBA测定有干扰。

2.2 交叉污染的试剂确认结果 对TG、UA、HDL-C、LDL-C及TCHOL5个项目的试剂R1和R2进行干扰试剂确认，见表1。

表1 5种试剂中TBA的测定值

2.3 设置特殊清洗 设置特殊清洗程序后，各组的交叉污染能被有效消除，实验管中TG、UA、HDL-C、LDL-C、TCHOL检测后血清TBA测定值分别为(13.03±0.30)、(12.87±0.26)、(13.11±0.28)、(12.93±0.35)、(13.29±0.17)μmol/L，与对照管中TBA测定值(13.34 ±0.33)μmol/L比较差异无统计学意义(P＞0.05)，即通过防交叉污染清洗程序可以有效避免试剂间出现交叉感染。

3 讨论

随着全自动生化分析仪及测定试剂盒的广泛使用，给日常的检验工作带来了极大的便利［3，4］。但在试剂操作中，试剂间的交叉污染的现象却难以避免，影响了检测结果的同时，也给工作带来了不小的麻烦［5］。通常试剂间交叉污染的原因主要来自于3个方面:(1)由于设备的长期使用，造成对吸样针、搅拌棒、比色杯的清洗能力下降，从而因上述部件的试剂残留造成污染;(2)某种试剂中恰好含有下一个要检测项目的底物，结果使得该试剂的成分同样被当做底物测定出来，测定值加成于下一组检测项上，造成试剂间的交叉污染;(3)某种试剂中所含物质对下一组的检测项目的反应进程有所影响，从而带来间接干扰。

本研究表明，本实验室常规检测项目中TG、UA、HDL -C、LDL-C及TCHOL5个项目对TBA的测定有干扰，因此，在进行分析仪参数设定时，应将上述5种项目设定在总胆汁酸项目测定后，若不可避免的设定总胆汁酸测定之间，则可以采用特殊清洗的方法，对比色杯和吸样针进行清洗，尽量避免试剂间出现交叉感染的情况。

综上所述，在进行总胆汁酸测定时，应尽量避免试剂间的交叉污染，减少测定结果的干扰，加强仪器维护，通过特殊清洗程序，减少测定结果影响因素。

［1］ 文春蓉，渠巍，赵胜兵.血清甘胆酸测定在妊娠期肝内胆汁淤积症中的临床意义［J］.现代医药卫生，2011，27 (14):2104-2106.

［2］ 余书武，王霞.生化试剂污染对全自动生化分析仪检测结果的影响和分析［J］.国际检验医学杂志，2013，34(24): 3403-3404.

［3］ 邓述欢.胆固醇对总胆汁酸在自动分析中是否存在交叉污染的探讨［J］.检验医学与临床，2011，8(5):604-605.

［4］ 孙金莲.试剂交叉污染对血清总胆汁酸测定结果的影响［J］.临床合理用药杂志，2012，5(28):133-134.

［5］ 吕伟标，黄倩婷，贾璋林，等.常用生化试剂间交叉污染调查及测试顺序的研究［J］.海南医学，2011，1(6):100-102.

2015-07-07)