尿标本前处理对测定尿微量清蛋白的影响

2017-01-06李全双任思坡韩光宇

国际检验医学杂志 2016年24期

关键词：浊法徐州市微量

谭昆，李全双，徐湛，任思坡，韩光宇，吴燕，梁军

(1.江苏省徐州市医学科学研究所 221006;2.江苏省徐州市中心医院 221006;3.江苏省徐州市糖尿病研究所 221006)

·临床研究·

尿标本前处理对测定尿微量清蛋白的影响

谭昆1，李全双1，徐湛1，任思坡1，韩光宇1，吴燕1，梁军2,3△

(1.江苏省徐州市医学科学研究所 221006;2.江苏省徐州市中心医院 221006;3.江苏省徐州市糖尿病研究所 221006)

目的探讨标本前处理对免疫透射比浊法测定尿微量清蛋白(mALB)的影响。方法患者尿液标本54例，其中清澈组25例，浑浊组29例。清澈组、浑浊组均分为3组，未离心组、离心1 min组及离心5 min组，用免疫透射比浊法检测mALB。结果清澈组3组之间差异均无统计学意义(P>0.05)；浑浊尿标本中mALB检测未离心组与离心1 min和5 min组差异均有统计学意义(P<0.05)，而2组离心标本之间mALB检测差异无统计学意义(P>0.05)。结论清澈尿标本可直接用于mALB检测，而浑浊尿标本需离心1 min后测定结果较准确。

尿微量清蛋白；透射免疫比浊法；尿液；离心

尿微量清蛋白(mALB)是指在尿液中含有的微量清蛋白，其浓度的正常范围小于20 mg/24 h[1]，是临床上发现早期肾损伤的一种重要的预示因子之一[2]。透射免疫比浊法测定mALB操作简便、快速，可随时进行标本相关检测，已在临床实验室得到广泛应用[3-4]。但由于受患者饮食、疾病等影响导致患者尿标本浑浊程度不一。浑浊尿标本较为复杂，常含有微颗粒、细胞碎片等，常会对mALB测定产生，本研究通过对患者尿标本进行不同时间离心处理，探讨对mALB检测的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2014年徐州市中心医院住院患者尿液标本54份，每份标本尿液6 mL，mALB浓度10～180 mg/L。

1.2 方法与仪器将尿液标本分为清澈组25例，浑浊组29例，每例标本平均分为3份，每份2 mL，分别标记为未离心组、离心1 min组、离心5 min组，离心速度3000 r/min；用透射免疫比浊法分组检测mALB，先检测清澈组后检测浑浊组，分别按离心5 min组、1 min组和未离心组顺序测定。奥林巴斯AU400全自动生化分析仪，试剂上海科华生物科技公司。批量选择mALB检测项，仪器自动检测并显示结果。

2 结果

清澈组中3组间mALB水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；浑浊组中，未离心组与离心1min组及离心5min组差异有统计学意义(P<0.05)，而离心1min和5min组，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 清澈组和浑浊组mALB测定结果

3 讨论

正常状态清蛋白很难通过肾小球滤过膜，只有极少量的清蛋白可通过尿液排出到体外，但随着肾小球滤过膜功能与结构的异常改变，导致清蛋白的排出增加，灵敏地反映出肾脏开始出现异常，渗漏蛋白质。尿清蛋白是肾脏疾病的一个重要指标，在某些肾病疾病的早期，用尿常规测定蛋白常为阴性，但此时尿中蛋白含量实际已有增加。一旦发现糖尿病、高血压、心血管等疾病对肾脏造成损害，可以对尿中的mALB进行相应检测，达到早期诊断、监控，有效地预防并发症的发生和发展[5]。糖尿病的病程和年龄与mALB的发生有密切关系[6]。一般发现mALB时，糖尿病的病程至少5年以上，糖尿病临床肾病多发生在糖尿病发病后10～15年，随着病程的发展，若血糖得不到有效控制，部分患者将最终发展成尿毒症期，有效地控制糖尿病患者的血糖，推迟发病时间，能降低糖尿病代谢对自身肾脏等器官的损害和并发症的出现。糖尿病肾病的发生、发展与脂代谢发生紊乱有密切关系。血脂的异常与mALB有一定的关系。糖尿病患者由于血糖升高明显，胰岛素相对缺乏，胰岛抵抗，使游离脂肪酸升高，卵磷脂胆固醇转肽酶等活性降低，肝脂酶活性升高等，从而出现三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇升高等脂代谢的紊乱。糖尿病肾脏严重程度与糖化血红蛋白的增高有一定的关联，长期糖化血红蛋白增高，会增加mALB的排出。

目前，国际上十分重视mALB的测定，认为尿mALB的测定不仅是对糖尿病肾病的早期诊断和改善预后具有重要意义，评估并发症的危险，而且对高血压、肾病及心血管疾病等都有极其重要的诊断价值[7-8]。免疫透射比浊法的原理是可溶性抗原与相应抗体反应后形成的免疫复合物，使介质浊度发生了改变，光线通过抗原抗体反应后的溶液时，被其中免疫复合物微粒吸收，在保持抗体过量的情况下，吸光度(A值)与免疫复合物呈正相关。与已知浓度的抗原标准品相比较，可确定标本中抗原的含量。免疫透射比浊法测定mALB具有灵敏度高、特异性强、测定范围宽、试剂稳定性好及操作简便快速易于自动化等优点[9]，影响透射免疫比浊法检测灵敏度和特异度的主要因素有以下两个方面：(1)反应体系中抗原抗体复合物浓度和特性；抗体特异性高、亲和力强，反应的特异性强。(2)反应体系中的基质会影响光散射。反应体系的基质影响主要来源于标本，如血清标本高脂血会对结果产生影响。本方法的mALB浓度范围在10～180mg/L，如果浓度超过500mg/L，会受到前带现象的影响，结果可能呈假性降低，分析前用0.9%NaCl稀释使它的浓度处于10～180mg/L。留尿前，患者应避免锻炼或运动，若不能及时测定，向尿液中加入防腐剂，贮存于2～8 ℃,另外分析前的质量控制对标本准确检测也有重要的意义[10]。郭蔚等[11]比较了尿液留取的时间对检测mALB的影响；刘新华等[12]探讨了低温保存对mALB检测结果的影响。而尿液中微颗粒等对测定的影响尚未有研究探讨。本研究是通过对不同浑浊程度的尿液标本进行测定前处理，以此来探讨尿液微颗粒等对测定的影响情况。从数据可以看出，尿液标本清澈的标本无需离心(均P>0.05)，可以直接检测；而浑浊尿液标本，微颗粒对测定结果有显著影响，需要先离心后检测，离心速度3 000r/min，时间可以由5min缩短到1min。从而得出结论，使用透射免疫比浊法检测mALB时，清澈尿液标本的标本无需离心，可以直接检测；使用透射免疫比浊法检测mALB时存在微颗粒干扰，使mALB测量值偏高，因此，对临床浑浊的尿液标本，应先离心后测量。离心速度在3 000r/min时，离心5min和离心1min对检测mALB结果无影响，可以将离心时间缩短至1min，提高检测效率。

本实验通过优化尿液标本前处理操作步骤，消除尿液标本中微颗粒等物质对mALB检测的影响，减少标本测量误差对疾病诊疗的影响。

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