改良龙胆紫快速染色法检测阴道分泌物真菌的研究应用

张 玲,陈艳文,周碧云,李淑嘉,赵 望,巫小莉

(广州金域医学检验中心 510168)



·临床研究·

改良龙胆紫快速染色法检测阴道分泌物真菌的研究应用

张 玲,陈艳文,周碧云,李淑嘉,赵 望,巫小莉△

(广州金域医学检验中心 510168)

目的 研究一种简易快速染色法，提高阴道真菌的检出率，为临床提供诊断依据。方法 改良龙胆紫快速染色法：于白带常规的试管中加入生理盐水约0.3 mL，龙胆紫(革兰Ⅰ液)1滴，室温染2 min，1滴悬液均匀涂于玻片中镜检。结果 孢子无色而夹膜则呈亮黄绿色，真菌菌丝着色不均匀呈紫色或无色，上皮细胞、白细胞、球菌、加德纳菌、线索细胞染成紫色，滴虫、乳酸杆菌不上色，红细胞呈暗红色。孢子检出率高于革兰快速染色法和生理盐水悬液湿片法。结论 改良龙胆紫快速染色法，融合了传统生理盐水悬液湿片法和革兰快速染色法的优点，快速、简单，易掌握，涂片色差大，孢子易于辨认，检测准确性高，实用性强，有临床应用价值。

改良龙胆紫快速染色法; 革兰快速染色法; 生理盐水悬液湿片法; 真菌

真菌、细菌及滴虫性阴道炎、子宫炎是妇科的常见病和多发病，但这3种病患者的临床表现常无区别[1]。阴液(白带)常规是妇科炎症一种常见的常规检查手段，检查结果准确与否直接影响临床医生对患者的诊断、用药和治疗，如何能快速准确给临床提供诊断依据，是检验界一直探讨的问题。常用的生理盐水悬液湿片法干扰因素多，体积细小的孢子混杂在分泌物中容易漏检，所以检出率低[2]；而革兰快速染色法操作繁琐检测时间长，难以应付大批量的门诊标本，为改变这种局面，作者尝试用龙胆紫(革兰第Ⅰ液)直接滴加到白带常规盐水悬液中染色，湿片镜检,收到理想的效果，作者称之为改良龙胆紫快速染色法。

1 材料与方法

1.1 材料 奥林巴斯BX-43双目显微镜、玻片、0.9%生理盐水、革兰染色液(贝索企业，批号415061)。

1.2 标本来源 376例来自广州中医药大学金沙洲医院2015年11月体检中心及妇科门诊患者阴液常规标本。

1.3 方法

1.3.1 0.9%生理盐水悬液湿片法 于阴液常规管内加入生理盐水约0.3 mL制成悬液，涂片高倍镜(40×)镜检(并留用于革兰染色)。

1.3.2 革兰快速染色法 上述涂片，按照《全国临床检验操作规程》进行初染、媒染、脱色、复染[3]，油镜(100×)镜检。

1.3.3 改良龙胆紫快速染色法 于上述0.9%生理盐水悬液(约0.3 mL)中加入龙胆紫(革兰Ⅰ液)1滴，室温染2 min，1滴悬液均匀涂于玻片中，高倍镜(40×)镜检。

2 结 果

2.1 生理盐水悬液法 背景杂质多，孢子不易辨认，特别是不典型的小孢子,很容易漏检；见图1。

2.2 革兰快速染色法 孢子、菌丝、乳酸杆菌染成紫色，上皮细胞、白细胞、加德纳菌、线索细胞、染成红色；见图2。

注：菌丝+孢子。

图1 生理盐水悬液法(高倍镜，40×)

注：菌丝+孢子。

图2 革兰快速染色法(油镜，100×)

2.3 改良龙胆紫快速染色法 孢子无色而夹膜则呈亮黄绿色，真菌菌丝着色不均匀呈紫色或无色，上皮细胞、白细胞、球菌、加德纳菌、线索细胞染成紫色，滴虫、乳酸杆菌不上色、红细胞呈暗红色，见图3。

2.4 3种方法结果对比 376例阴液常规标本，真菌检出率以改良龙胆紫快速染色法为首，革兰快速染色法为次，生理盐水悬液湿片法次之，结果见表1。

注：菌丝+孢子。

图3 改良龙胆紫快速染色法(高倍镜，40×)

3 讨 论

阴道分泌物检查真菌，是诊断女性生殖道真菌感染的一种最直接有效的方法，结果准确与否严重影响临床医生对患者的诊断、用药和治疗[4-7]。目前很多医院都在采用生理盐水湿片法或革兰快速染色法。生理盐水湿片法，背景杂质多，孢子不易辨认，容易漏检和误检，检出率低；革兰快速染色法经过固定、初染、媒染、脱色、复染等步骤，操作繁琐，检测时间长，难以应付大批量的门诊标本。而且在工作中发现，革兰快速染色法虽然有固定的步骤，孢子会在染片过程中因冲洗而流失部分不易找到，往往造成镜检时间长的局面；改良龙胆紫快速染色法，孢子无色而夹膜则呈亮黄绿色，真菌菌丝着色不均匀，呈紫色或无色。不仅孢子、菌丝易于辨认，而且还不影响不干扰阴液常规中其他项目的检查，上皮细胞、白细胞、球菌、乳酸杆菌、加德纳菌、线索细胞染成紫色、滴虫无色(滴虫在悬液中与盐水湿片法一样会游动)、红细胞呈暗红色。孢子与涂片颜色反差大，很容易辨别。但随着染色时间延长，镜检中也可以看到染成紫色的孢子，可能是孢子离体时间长，新陈代谢减弱，还原性减弱，渗透到孢子壁内的染液增多，故而染上色，作者认为这一类是死孢子；而活孢子细胞壁完整光滑，染液不易渗透至孢子体内[8]，故不上色。建议染色时间以2 min为宜，一般不超过10 min。

改良龙胆紫快速染色法检测阴道真菌，融合了传统生理盐水悬液湿片法和革兰快速染色法的优点，涂片色差大，孢子易于辨认，检测准确性高，实用性强，有较高的推广应用价值。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.24.035

A

1673-4130(2016)24-3473-02

2016-05-26

2016-07-29)

△通讯作者，E-mail:13725345142@126.com。