蒙医脑-白脉调控针刺对卒中后抑郁模型大鼠行为及前额叶皮质NE、DA、5-HT含量影响*

李学勇姚哈斯苗 美乌 兰△

（1.北京中医药大学，北京 100029；2.内蒙古国际蒙医医院，内蒙古 呼和浩特 010065）

·研究报告·

蒙医脑-白脉调控针刺对卒中后抑郁模型大鼠行为及前额叶皮质NE、DA、5-HT含量影响*

李学勇1，2姚哈斯2苗 美2乌 兰2△

（1.北京中医药大学，北京 100029；2.内蒙古国际蒙医医院，内蒙古 呼和浩特 010065）

目的观察蒙医脑-白脉调控针刺对卒中后抑郁（PSD）模型大鼠行为及前额叶皮质单胺递质的含量影响。方法 32只SD雄性大鼠，随机分为假手术组、模型组、蒙医针刺组、盐酸氟西汀组，每组8只。用栓线法建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型，叠加慢性不可预见性刺激与孤养结合造成PSD动物模型。通过糖水偏爱实验和敞箱实验对大鼠行为学评价，采用酶联免疫法检测大鼠前额叶皮质去甲肾上腺素 （NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）等单胺递质的含量。结果 与假手术组比较，模型组大鼠糖水消耗量、敞箱实验中的水平活动次数和垂直运动次数明显下降（P＜0.05），前额叶皮质NE、DA、5-HT含量明显降低（P＜0.05）。与模型组比较，蒙医针刺组和盐酸氟西汀组大鼠糖水消耗量、敞箱实验中的水平活动次数和垂直运动次数明显增加（P＜0.05），前额叶皮质NE、DA、5-HT含量明显增加（P＜0.05）。蒙医针刺组和盐酸氟西汀组之间比较，无显著差异（P＞0.05）。结论 蒙医脑-白脉调控针刺改善卒中后抑郁大鼠行为异常，明显提高前额叶皮质NE、DA、5-HT单胺递质的含量，具有抗抑郁作用。

蒙医脑-白脉调控针刺 脑卒中后抑郁症 单胺递质

脑卒中后抑郁（PSD）是指在脑血管性疾病发生后出现以抑郁为特征或重性抑郁样发作的心境障碍，其发病率多在30%～60%，严重影响患者的生存质量和预后［1］。PSD会明显影响脑卒中患者在神经功能和认知功能方面的康复效果，同时会增加脑卒中患者的死亡率［2-3］。早期发现PSD并给予积极的干预治疗对患者躯体功能恢复、缩短病程、减少医疗资源的消耗具有重要意义［4］。一些研究人员提出的情绪障碍的单胺假说，5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺（NE）同属于单胺类神经递质，其对情绪、焦虑、睡眠等都有调节作用，对卒中后患者，大脑病变致使NE和5-HT含量下降而出现PSD［5］。在临床工作中，发现应用蒙医脑—白脉调控针刺可明显改善抑郁状态。为此，本实验研究PSD动物模型上，观察蒙医脑-白脉调控针刺对PSD模型大鼠前额叶皮质的多巴胺（DA）、NE、5-HT的含量影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取SPF级雄性SD大鼠32只，体质量280～300 g，由北京市海淀区兴隆实验动物养殖厂提供，许可证号：SCXK-（军）2012-0004。

1.2 药物及试剂 DA试剂盒、NE试剂盒、5-HT试剂盒（武汉华美生物工程有限公司）；盐酸氟西汀分散片（礼来苏州制药有限公司，批准文号：国药准字J20120001）；针灸针为华佗牌0.40 mm×13 mm毫针（苏州医疗用品厂有限公司）。

1.3 仪器与设备 Multiskan MK3-型自动多功能酶标仪（美国Thermo公司），ST16R型台式高速冷冻离心机（美国Thermo公司）YLS-19A型大鼠电动断头器 （济南益延科技发展有限公司），Thermo-991型超低温冰箱 （美国Thermo公司），OFT-100型自主活动视频分析系统（成都泰盟科技有限公司）。

1.4 分组与造模 SD大鼠32只适应性饲养1周后随机分4组分为假手术组、蒙医针刺组、模型组、盐酸氟西汀组，每组8只大鼠。大鼠术前禁食、不禁水12 h，改进Longa法［6］制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。假手术组手术操作步骤基本同模型组，但无栓线插入、不进行应激和孤养。大鼠苏醒后根据Bederson［7］评分来给分，有神经功能缺损的大鼠（评分≥1）入组。预防术后感染连续3 d腹腔注射4万U青霉素。术后常规饲养1周，第8天开始除假手术组外其他组给予慢性不可预见温和刺激结合孤养。慢性温和刺激包括：昼夜颠倒12 h、鼠笼倾斜45°24 h、潮湿垫料24 h、禁食24 h、禁水24 h、夹尾3 min、振荡40 min、束缚2 h。每天随机给予一种刺激，持续2周。

1.5 干预方法 慢性温和刺激14 d后蒙医针刺组采用蒙医顶会穴，额叶组穴进行针刺治疗，使用华佗牌

0.40 mm×13 mm毫针，均为斜刺，深度约为0.2 mm，每次留针20 min，每日1次，连续干预2周。盐酸氟西汀组经胃灌注用蒸馏水配成氟西汀悬浮液，每日1次4.06 mg/kg，连续给药2周。模型组经胃灌注蒸馏水2周。假手术组不做任何干预。

1.6 观察项目 1）糖水偏爱实验。造模前、造模后、治疗后共3次，测每只大鼠糖水消耗量。将大鼠禁水24 h后给予1%蔗糖水溶液150 mL，1 h后计算每只大鼠1%蔗糖水的饮用量。该实验观测大鼠的快感反应。2）敞箱实验。干预结束后进行敞箱实验。实验所用敞箱是立柱体，四壁黑色，地等面积划分9块，上方放置摄像机。将大鼠放置于底面中心方格，记录5 min内水平活动和垂直运动次数。3）取样品及检测。实验结束后将大鼠断头快速取脑，在冰盘上剥离脑组织，剪去前额叶皮质后置于速冻管，用液氮快速冷冻并放入-80℃冰箱保存待测。用ELISA检测技术，按试剂盒说明进行检测大鼠前额叶皮质DA、NE、5-HT的含量。

1.7 统计学处理 应用SPSS19.00统计软件分析。计量资料以表示，组间比较采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠糖水消耗量的比较 见表1。各组大鼠造模前的糖水消耗量无显著差异（P＞0.05）。造模后与假手术组比较，模型组、蒙医针刺组、盐酸氟西汀组3个组的糖水消耗量降低（P＜0.01）。治疗后与假手术组比较，模型组大鼠糖水消耗量明显降低（P＜0.01）。与模型组比较，蒙医针刺组和盐酸氟西汀组大鼠糖水消耗量明显增加（P＜0.05）。蒙医针刺组和盐酸氟西汀组之间比较，无显著差异（P＞0.05）。

表1 各组大鼠糖水消耗量比较（g，）

表1 各组大鼠糖水消耗量比较（g，）

与假手术组比较，**P ＜ 0.01；与模型组比较，△P ＜ 0.05。下同。

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2.2 各组大鼠水平活动次数和垂直运动次数比较见表2。干预后做敞箱实验，与假手术组比较，模型组大鼠水平活动次数和垂直运动次数均明显下降 （P＜0.01）。与模型组比较，蒙医针刺组和盐酸氟西汀组大鼠水平活动次数和垂直运动次数均明显增加 （P＜0.05）。蒙医针刺组和盐酸氟西汀组之间比较，无显著性差异（P＞0.05）。

2.3 蒙医针刺对各组大鼠前额叶皮质的DA、NE、5-HT含量比较 见表3。与假手术组比较模型组大鼠前额叶皮质DA、NE、5-HT含量降低（P＜0.01）；与模型组比较蒙医针刺组和盐酸氟西汀组大鼠前额叶皮质DA、NE、5-HT含量显著增加（P＜0.05）；蒙医针刺组和盐酸氟西汀组之间比较，无显著性差异（P＞0.05）。

表2 各组大鼠水平活动次数和垂直运动次数比较（）

表2 各组大鼠水平活动次数和垂直运动次数比较（）

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表3 各组大鼠前额叶皮质DA、NE、5-HT含量比较（g/L，）

表3 各组大鼠前额叶皮质DA、NE、5-HT含量比较（g/L，）

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3 讨 论

国外流行病学调查显示PSD在急性期的发病率为33%，在恢复期的发病率在34%［8］，国内的总发生率34.2%［9］，可见PSD的发病率高。发病机制至今尚未明确，但多数学者认为，单胺能递质环路在抑郁发病中发挥重要作用，抑郁症与低含量的单胺有关，特别是5-HT、NE和DA［10］。缺血性病变可能阻断了来自中脑和脑干的投射，致使5-HT、NE和DA下降，导致PSD的发生［2，11］。蔡金亚等［12］认为卒中后脑组织中单胺类递质如DA、5-HT、NE及其代谢产物浓度降低，加之脑部血液供应不足，蛋白质合成发生变化和葡萄糖代谢缓慢，使机体代谢所需能量减少，进一步影响神经递质的代谢与合成；去甲肾上腺素能和5-羟色胺能神经元位于脑干向上的辐射通路通过丘脑下部、基底节，最终投射到大脑皮质，病变累及上述部位可影响5-羟色胺能和去甲肾上腺素能神经通路，导致NE和5-HT含量下降而引起抑郁。20世纪50年代发现抑郁症与脑内单胺类神经递质（NT）有关，并且抑郁症发病机制及其抗抑郁药的研制中起主导作用［13］。临床工作中，发现应用蒙医脑-白脉调控针刺可明显改善抑郁状态，提高卒中后抑郁患者生活质量。蒙医脑-白脉调控针刺是按大脑皮层功能分区进行区域性头皮针治疗 （主要有运动区、感觉区、平衡区、足运感区、语言区等）和根据白脉走形及支配肌群选择相应的穴位进行抗痉挛体针针刺治疗。目前治疗家庭社会的支持、心里治疗外，药物治疗尤其重要［14］之外针刺作为一种安全、有效的治疗方法，越来越多地被医者与患者接受［15］。针刺疗法作为较理想的治疗方法，在改善抑郁程度的同时能促进患者神经功能的康复；众多研究显示，针刺可以通过升高5-HT、NE、及BDNF的水平发挥抗抑郁的功效［12］。

卒中后抑郁动物模型制备的关键是更接近于人类抑郁症的病理过程，一定程度上反映了类似于人类抑郁症的一些临床表现。本研究中我们利用卒中后抑郁动物模型，糖水消耗量、敞箱实验的水平次数和垂直运动次数以及前额叶皮质单胺递质的含量为观察指标初步探究蒙医脑-白脉调控针刺的抗抑郁作用。结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠糖水消耗量、敞箱实验中的水平活动次数和垂直运动次数明显下降，前额叶皮质NE和DA、5-HT的含量降低，与模型组比较，蒙医针刺组和盐酸氟西汀组大鼠糖水消耗量、敞箱实验中的水平活动次数和垂直运动次数以及前额叶皮质NE、DA、5-HT的含量均显著增加。因此，我们认为这可能增加大鼠前额叶皮质NE、DA、5-HT含量是蒙医脑-白脉调控针刺对卒中后抑郁大鼠发挥抗抑郁作用机制之一。

［1］ Schneider MA，Schneider MD.Recognizing poststroke depression［J］.Nursing，2012，42（12）：60-63.

［2］ Loubinoux I，Kronenberg G，Endres M，et al.Post-stroke depression：mechanisms，translation and therapy［J］.Cell Mol Med，2012，16（16）：1961-1969.

［3］ Hadidi N，Treat-Jacobson DJ，Lindquist R.Post-stroke depression and functional outcome：A critical review of literature［J］.Heart Lung，2009，38（2）：151-162.

［4］ 纪法敬.脑卒中后抑郁对神经功能康复的影响［J］.中国实用神经疾病杂志，2013，16（18）：52.

［5］ 翁小容.加味四逆颗粒对卒中后抑郁症患者血清去甲肾上腺素和5-羟色胺的影响［J］.中医临床研究，2015，7（33）：29-30.

［6］ Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats［J］. Stroke，1989，20：84-91.

［7］ Bederson JB，Pitts LH，Germano SM，et al.Evaluation of 2，3，5-triphenyltetrazolium chloride as astain for detect ion and quantification of experimental cerebral cerebral infarction in fats［J］.Stroke，1986，17（6）：1304-1308.

［8］ Garod-Artal FJ.Post-stroke depression：can prediction help prevention［J］.Future Neurol，2010，5：569-580.

［9］ 龙洁，蔡焯基，刘永珍，等.卒中后抑郁状态的发生率及相关因素研究［J］.中华神经科杂志，2011，24（3）：145-148.

［10］Krishnan V，Nestler EJ.The molecular neurobiology of depression［J］.Nature，2008，455（7215）：894-902.

［11］于佳，贺祝英，张建玲，等.抗抑郁证中药制剂的研究进展［J］.贵阳中医学院学报，2012，34（1）：127-129.

［12］蔡金亚，孙建华，徐修竹.中风后抑郁的早期预防现状［J］.山东中医杂志2016，1（35）：77-79.

［13］张华军，毛晓薇.天然抗抑郁药物促进海马神经发生的研究进展［J］.中医药学报，2014，42（1）：99-102.

［14］毛森林，罗莎.舒肝解郁胶囊治疗卒中后抑郁的临床研究［J］.临床药物治疗杂志，2016，14（1）：54-56.

［15］张潇丹，何薇，贾敏，等.脑卒中后抑郁的病因病机及针刺治疗研究［J］.四川中医，2015，33（2）：184-185.

Effect of Mongolian Medicine Brain-White Pulse Regulating Acupuncture on Post-stroke Depression Model Rats Behavioral and Prefrontal Cortex NE，DA，5-HT Contenton

LI Xueyong，YAO Hasi，MIAO Mei，et al.

Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China.

Objective：To observe the effect of Mongolian medicine brain-white pulse regulating acupuncture on post-stroke depression（PSD）model rats behavioral and cortical monoamine neurotransmitters content.Methods：32 male SD rats were randomly divided into sham operation group，sample group，Mongolian medicine acupuncture group，fluoxetine hydrochloride group（drug group）.There were 8 rats in each group.PSD animal models were built by the establishment of focal cerebral ischemia rats with the bolt line method，under the conditions of chronic unpredictable stress and separation.By sugar water preference test and open box experiment for the evaluation of rats′behaviour，the content of prefrontal cortex norepinephrine（NE），and dopamine（DA），5-hydroxytryptamine（5-HT）monoamine neurotransmitters were tested by enzyme-linked immunoassay.Results：Compared with the sham group，model group rats sugar water consumption，the number of horizontal movement and vertical movement in the open box experiment decreased obviously（P＜0.05），the contents of prefrontal cortex NE，DA，5-HT of rats in model group decreased significantly（P＜0.05）.Compared with the model group，sugar water consumption，the number of horizontal movement and vertical movement in the open box experiment and the contents of prefrontal cortex NE，DA，5-HT of rats in acupuncture group and drug group increased significantly（P＜0.05）.There was no significant difference（P＞0.05）between the acupuncture group and the drug group.Conclusion：Antidepressant effect of Mongolian medicine brain-white pulse regulating acupuncture is related to the improvement of behavior in the rat model of depression after stroke and the contents of NE，DA，5-HT monoamine neurotransmitters in the brain tissue，which has antidepressant effect.

Mongolian medicine brain-white pulse regulating acupuncture；Post-stroke depression（PSD）；Monoamine neurotransmitters

·研究报告·

国家自然科学基金资助项目（81360577）

△（电子邮箱：wulan631226@163.com）

R245.3

A

1004-745X（2016）11-2029-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.11.003

（2016-08-10）