替加环素联合亚胺培南对多重耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性研究*

单靖岚，郑贵星，邓穗燕，黄 俊

（1．广州医科大学附属第一医院，广东 广州 520000； 2．广州医科大学附属第三医院，广东 广州 520000；

3．广州医科大学基础医学院，广东 广州 520000）

替加环素联合亚胺培南对多重耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性研究*

单靖岚1，郑贵星1，邓穗燕2，黄 俊3

（1．广州医科大学附属第一医院，广东 广州 520000； 2．广州医科大学附属第三医院，广东 广州 520000；

3．广州医科大学基础医学院，广东 广州 520000）

目的 探讨替加环素（tigecyclin）联合亚胺培南对多重耐药鲍曼不动杆菌体外抗菌的效果，探索多药联合应用对多重耐药鲍曼不动杆菌的临床用药新途径。方法 收集临床分离的40株多重耐药鲍曼不动杆菌，采用微量肉汤稀释法、棋盘法分别检测替加环素、亚胺培南单独及联合使用的最低抑菌浓度（MIC），计算药物联合使用抑菌浓度（FIC）指数，利用FIC指数判定替加环素和亚胺培南联用时对多重耐药鲍曼不动杆菌体外抗菌的效果。结果 替加环素联合亚胺培南能显著降低各自的MIC值，其中表现为协同作用的菌株占70．00%，表现为相加作用的菌株占25．00%，发生无关作用的占5．00%，无拮抗作用发生。结论 替加环素联合亚胺培南可对多重耐药鲍曼不动杆菌的感染进行治疗。

替加环素；亚胺培南；多重耐药；鲍曼不动杆菌

鲍曼不动杆菌为医院内获得性感染的常见病原菌，尤其是免疫缺陷和在重症监护室（ICU）的患者，而大量使用广谱抗菌药物、糖皮质激素、免疫抑制剂及鲍曼不动杆菌有着强大的体外长期生存能力及易繁殖播散等特点是导致这一现象发生的主要原因[1－3]。研究表明，鲍曼不动杆菌感染患者病死率较高[4]，其原因有待探究。大量研究显示，鲍曼不动杆菌有强大的克隆传播及获得耐药性能力，且多重耐药、广泛耐药及全耐药鲍曼不动杆菌出现了世界性流行现象[5]。替加环素为新开发的新一类静脉用抗菌药物，是半合成四环素类药物米诺环素的衍生物[6－7]。亚胺培南为碳青霉烯类治疗鲍曼不动杆菌的抗菌药物[8－9]。本研究中用替加环素联合亚胺培南对抗耐药鲍曼不动杆菌进行体外抗菌试验，以期为临床治疗提供参考。

1 材料与方法

1．1 仪器、材料与试药

1．1．1 仪器与试药

Muller－Hinton肉汤（浙江杭州天和微生物试剂有限公司）；血琼脂平板（江门市凯林贸易有限公司）。VITEK－2型细菌鉴定仪（法国生物梅里埃公司）。注射用替加环素（江苏豪森药业股份有限公司，国药准字H20123394，规格为每支50 mg）；亚胺培南（山东新时代药业有限公司，国药准字H20090182）。

1．1．2 菌株来源

住院患者送检的痰液、尿液、血液、脓液、脑脊液、胸腔积液、腹腔积液、咽拭子、胆汁、插管等标本中分离所得的40株多重耐药鲍曼不动杆菌。所有菌株均经VITEK－2细菌鉴定仪鉴定。质控菌株为铜绿假单胞菌（ATCC27853）、大肠埃希菌（ATCC25922）均购自广东省临床检验中心。

1．2 方法

1．2．1 菌悬液配制

选取已经鉴定的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株，并将其接种在血琼脂培养基上，放入（35±2）℃温箱中培养16～18 h后取出，在血琼脂培养基上挑取合适的菌落放于2 mL无菌生理盐水中，然后利用比浊仪校正浊度为0．5麦氏浊度，再用无菌生理盐水将0．5麦氏浊度的菌液稀释至3×105cfu／mL。

1．2．2 抗菌药物配制

用精密电子天平称取替加环素与亚胺培南（组合比例为1∶1），用无菌生理盐水和0．01 mol／L的磷酸盐缓冲液配制成最终质量浓度均为2 048 μg／mL的溶液备用。

1．2．3 单药最低抑菌浓度（MIC）测定

用微量肉汤倍比稀释法检测40株鲍曼不动杆菌对抗菌药物替加环素和亚胺培南的MIC，试验结果判断标准参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）标准。

无菌操作，将100 μL微量肉汤分别加入无菌96孔板中。将质量浓度为2048 μg／mL的亚胺培南药液100μL按每横排方式加入无菌96孔板中，每横排的第1孔加入抗菌药物原液100 μL，混匀，然后吸取100 μL至第2孔，混匀后再吸取100 μL至第3孔，如此连续倍比稀释至第11孔，并从第11孔中吸取100 μL弃去，第12孔为不含药物的生长对照。

根据抑菌浓度的需要，取质量浓度为2 048 μg／mL的替加环素原液100 μL加入700 μL的Muller－Hinton肉汤中，此时替加环素药物质量浓度稀释为256 μg／mL，按亚胺培南药液的加入方法加入96孔板中。将浓度为3×105cfu／mL的菌悬液100 μL加入孔中，孔中菌的最终质量浓度为1．5×105cfu／mL。此时每横排各孔的亚胺培南药物质量浓度依次为512，256，128，64，32，16，8，4，2，1，0．5 μg／mL。每横排各孔替加环素药物质量浓度依次为 64，32，16，8，4，2，1，0．5，0．25，0．125，0．06 μg／mL。将完成上述操作的96孔板放入（35±2）℃温箱中过夜，培养16～18 h观察结果，观察两药单独应用时的MIC，并记录。

1．2．4 联合药物敏感性试验

根据替加环素与亚胺培南两单药微量肉汤稀释法测定的MIC来决定棋盘稀释法联合抗菌试验的药物稀释浓度。分别把替加环素与亚胺培南2种药物倍比稀释（配制药物的方法及倍比稀释方法同单药试验中的方法）按横向及纵向分别加入96孔板中。本试验横向为亚胺培南的降梯度方向，共为12个浓度梯度；纵向为替加环素的降梯度方向，共8个浓度梯度。分别将2种抗菌药物以50 μL体积两两组合加入96孔板中，最后将100 μL的3×105cfu／mL的菌液加入96孔板中。再次将操作完成的 96孔板放入（35±2）℃温箱中过夜，孵育18～24 h，观察两药联合应用时各药的MIC。

1．2．5 联合抑菌指数（FIC）的确定

记录组合中2种药物单独应用时的MIC及2种药物联用后的MIC，并计算出2种药物联用的FIC。FIC为联用时各药的MIC值分别除以单药时MIC值的商的和。相互作用解释：FIC≤0．5代表协同作用，0．5＜FIC≤1代表相加作用，1＜FIC≤2代表无关作用，FIC＞2代表拮抗作用[6]。

2 结果

2．1 药物单用与联合使用的MIC50和MIC90

结果见表1和表2。

表1 单用抗菌药对多重耐药鲍曼不动杆菌的MIC（μg／mL）

表2 联合使用抗菌药物对多重耐药鲍曼不动杆菌的MIC（μg／mL）

2．2 联合用药的FIC分布

替加环素和亚胺培南联合使用，表现为协同作用的菌株占70%，表现为相加作用的占25%，表现为无关作用的占5%，无拮抗作用发生，详见表3。

表3 替加环素和亚胺培南联合使用的FIC分布（n＝40）

3 讨论

鲍曼不动杆菌是造成医院感染的常见病原菌。近年来，其耐药性日益严重且感染增多，已引起临床医生和微生物研究人员的重点关注。鲍曼不动杆菌主要会导致呼吸道感染，但也可引发泌尿系感染、败血症及继发性脑膜炎等。鲍曼不动杆菌在医院的环境中分布很广且可长期存活，严重威胁了危重患者和冠心病重症监护室(CCU)及综合性重症监护室(ICU)患者的生命健康。据报道，鲍曼不动杆菌在无活性惰性物质表面可存活超过5个月[10]。在其长期的进化过程中，不动杆菌属能形成一系列自身特有的耐药基因，如碳青霉烯酶基因，而这些基因能过度表达来应对抗菌药物的治疗；在分子水平上，其拥有从外界捕获耐药基因的能力，并能整合人自己的基因组，使之得到表达能力，从而获得新的耐药性。随着医疗技术的发展，广谱抗菌药物、糖皮质激素及免疫抑制剂的大量使用，使该菌的耐药情况更加严重。此外，鲍曼不动杆菌还有易克隆及传播的特点。正是由于以上原因及其快速获得和耐药性的能力，导致鲍曼不动杆菌感染不断出现[11－12]。

《2012中国鲍曼不动杆菌感染诊治与防控专家共识》中提出，对于鲍曼不动杆菌感染的治疗应采用两药联合甚至是3种药物联合的方案。其中提出以替加环素为基础，联合舒巴坦或含舒巴坦的复合制剂、碳青霉烯类抗菌药物、氨基苷类抗菌药物、喹诺酮类抗菌药物、多黏菌素E[13]。而碳青霉烯类抗菌药物被推荐用于初治鲍曼不动杆菌感染患者，但2010年中国细菌耐药性监测(CHINET)显示，使用碳青霉烯类抗菌药物致院内鲍曼不动杆菌感染率接近60%[14]，故此类抗菌药物治疗鲍曼不动杆菌感染时要权衡利弊。抗菌药物单独使用对多重耐药菌株感染治疗时易诱导病原菌产生耐药性，且其作用有限[15]，故联合用药治疗成为临床上解决多重耐药细菌感染较有效的途径之一。

本研究中利用替加环素联合亚胺培南，测定联合用药后对40株多重耐药鲍曼不动杆菌MIC的影响。结果显示，替加环素和亚胺培南联合使用，表现为协同作用的菌株占70．00%，相加作用的菌株占25．00%，无关作用占5．00%，无拮抗作用发生。

综上所述，替加环素联合亚胺培南对多重耐药鲍曼不动杆菌多表现为协同或相加作用，有良好的抗菌活性。本研究为临床应用替加环素联合亚胺培南治疗多重耐药鲍曼不动杆菌感染提供了试验依据。

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In VitroActivityofTigecyclineCombined with Imipenem againstM ultidrug－Resistant Acinetobacter Baumann

Shan Jinglan1，Zheng Guixing1，Deng Suiyan2，Huang Jun3
（1．First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou，Guangdong，China 520000； 2．Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou，Guangdong，China 520000；3．Guangzhou Medical University Primary Hospital，Guangzhou，Guangdong，China 520000）

Objective To investigate the in vitro activity of tigecycline combined with imipenem against multi drug－resistant Acinetobacter baumann，and to explore the new way of clinical medicine administration against multi drug－resistant Acinetobacter baumann．M ethods Agar dilution method and checkerboard method were used for the MIC testing of tigecycline combined with imipenem against 40 multi drug－resistant Acinetobacter baumannii strains，and MIC value was used to calculate the fractional inhibitory concentration（FIC）index．Results The MIC of tigecycline and imipenem were reduced significantly when using by tigecycline combined with imipenem．The FIC results showed that the main interaction was synergism （70．00%）and additivity（25．00%），with only 5．00% of inefficiency．No antagonism was observed．Conclusion Tigecycline combined with imipenem can be used to treat the infection of multi drug－resistant Acinetobacter baumann．

tigecycline；imipenem；multi drug－resistant；acinetobacter baumann

R969．3；R945；R978．1

A

1006－4931(2016)10－0012－03

单靖岚（1983－），女，大学本科，检验师，研究方向为医院感染，（电话）020－83062961；黄俊（1976－），男，教授，博士研究生，研究方向为感染免疫学，本文通讯作者，（电话）020－37103216（电子信箱）hj165＠sina．com。

2015－09－10；

2015－12－20)

*广东省医学科学技术研究项目，项目编号：A2015436。