双波长高效液相色谱法同时测定风湿安泰片中柚皮苷、淫羊藿苷含量

杨立志

（黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江 鸡西 158100）

双波长高效液相色谱法同时测定风湿安泰片中柚皮苷、淫羊藿苷含量

杨立志

（黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江 鸡西 158100）

目的 建立同时测定风湿安泰片中柚皮苷、淫羊藿苷含量的高效液相色谱法。方法 采用Agilent Extend C18色谱柱，流动相为乙腈－水梯度洗脱，流速为1．0 mL／min，柱温为30℃，柚皮苷和淫羊藿苷检测波长分别为283，270 nm。结果 柚皮苷、淫羊藿苷进样量分别在0．148 0～1．850 0 μg，0．432 0～5．400 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好，r＝0．999 5，1．000 0；平均回收率分别为97．38%，97．43%，RSD分别为0．84%，0．74%（n＝6）。结论 该方法简便、准确、灵敏、重复性好，可作为风湿安泰片中柚皮苷、淫羊藿苷的质量控制方法。

双波长高效液相色谱法；风湿安泰片；柚皮苷；淫羊藿苷

风湿安泰片为中药复方制剂，由生川乌、生草乌、马钱子（制）、羌活、乌梢蛇、红花、骨碎补（制）、乌梅、金银花、细辛、红参、鹿茸、黄柏、没药、广地龙、地枫皮、老贯草、五加皮、续断、麻黄、甘草、槲寄生、淫羊藿、牛膝、桂枝25味药材组方，具有舒筋活血、祛风镇痛的功效，用于治疗筋骨麻木、手足拘挛、腰腿疼痛、风湿性关节炎。原标准仅对方中个别药材进行了显微鉴别和薄层鉴别，无含量测定项[1]。为更好地控制风湿安泰片的质量，笔者参考文献[2－16]，采用双波长高效液相色谱梯度洗脱法测定了制剂中骨碎补所含柚皮苷及淫羊藿所含淫羊藿苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Waters e2695型高效液相色谱仪（包括2475二极管阵列检测器，LC solution色谱工作站，美国Waters公司）；AG285型电子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司)；KQ－400KDE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1．2 试药

柚皮苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号为110722－200610)；淫羊藿苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号为110737－200415)；风湿安泰片(吉林省辉南辉发制药股份有限公司，批号为20121102；通药制药集团股份有限公司，批号为131101，140604)。水为超纯水，乙腈为Merck公司生产的色谱纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Agilent Extend C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）－水（B），梯度洗脱（0～30 min，19．0%～50%A；30～40min，19．0%A）；流速：1．0mL／min；柱温：30℃；进样量：10 μL；检测波长：柚皮苷283 nm，淫羊藿苷270 nm。理论板数按柚皮苷、淫羊藿苷峰计算均不低于3 000。

2．2 溶液制备

混合对照品溶液：精密称取柚皮苷、淫羊藿苷对照品各适量，加甲醇制成每1 mL含柚皮苷0．074 0 mg、淫羊藿苷0．216 0 mg的混合对照品溶液。

供试品溶液：取本品10片，除去糖衣，精密称定（平均片重为0．387 7 g），研细，精密称取2．0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率400 W，频率40 kHz）30 min，取出，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜（0．45 μm）滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：按处方量并以相同工艺制备不含骨碎补、淫羊藿的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

阴性干扰试验：取2．2项下3种溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果阴性对照品溶液色谱图中，在柚皮苷、淫羊藿苷色谱峰相应位置处无干扰峰出现，表明阴性样品中其他组分对柚皮苷、淫羊藿苷的测定无干扰，见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取混合对照品溶液2，5，10，15，20 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程，柚皮苷 Y＝2．000 0×106X＋5．578 5× 103，r＝0．999 5（n＝6）；淫羊藿苷 Y＝1．000 0×106X＋5．400 1×103，r＝1．000 0（n＝6）。结果表明，柚皮苷、淫羊藿苷进样量分别在0．148 0～1．850 0 μg和0．432 0～5．400 0 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取同一混合对照品溶液10 μL，连续进样6次，记录平均峰面积。结果柚皮苷、淫羊藿苷的峰面积值分别为1 357 476和2 582 938，RSD分别为0．57%和0．64%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批（批号为20121102）样品，分别依法制备6份供试品溶液，并测定含量。结果柚皮苷、淫羊藿苷的平均含量为每片0．080和0．085 mg，RSD分别为0．71%和0．82%（n＝6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别于配制0，2，4，8，12，16，20，24 h时各进样10 μL。结果柚皮苷、淫羊藿苷峰面积的平均值分别为150 071．5和103 337．5，RSD分别为0．43%和0．52%（n＝8），表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

加样回收试验：称取已知含量的同一批样品（批号为20121102，柚皮苷和淫羊藿苷每片含量为0．079 mg和0．084 mg）样品6份，每份约0．1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，共3组，每组分别精密加入质量浓度为20 μg／mL和21 μg／mL的柚皮苷和淫羊藿苷对照品溶液各0．8，1．0，1．2 mL。依法制备供试品溶液，并按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

2．4 样品含量测定

取风湿安泰片3批，按2．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定本品中柚皮苷、淫羊藿苷的含量。结果见表2。

3 讨论

选择测定波长时，对柚皮苷和淫羊藿苷对照品溶液在 240～300 nm波长处进行光谱扫描，结果柚皮苷在270 nm波长处有最大吸收，淫羊藿苷在283 nm波长处有最大吸收。故选择270 nm及283 nm作为测定波长。

本试中验以甲醇、40%甲醇、稀乙醇为提取溶剂，结果以甲醇为提取溶剂时柚皮苷含量明显高于40%甲醇和稀乙醇。

表1 加样回收试验结果（n＝6）

表2 3批样品每片药品含量测定结果（n＝6，mg）

对甲醇－0．1%磷酸溶液、甲醇－0．1%冰醋酸、乙腈－水等流动相进行了考察，结果发现以乙腈－水为流动相能很好地改善分离度和柱效，柚皮苷峰及淫羊藿苷峰与其他组分均能实现完全分离，经过优化选择，确定了乙腈－水梯度洗脱为流动相。

样品提取时，分别超声提取20，30，40 min，结果超声30 min提取完全，故采用超声提取30 min作为本试验提取方法。

方中骨碎补、淫羊藿为主药，柚皮苷和淫羊藿苷为其主要成分，且含量高，易于测定，故采用测定处方中柚皮苷和淫羊藿苷的量来控制该制剂的质量。该方法简便准确，专属性强，灵敏度和精密度均能达到测定要求，可为控制风湿安泰片质量和深入研究其药效物质基础提供了参考。

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Content Determination of Naringin and Icariin in Fengshi Antai Tablets by Dual－Wavelength HPLC

Yang Lizhi
(Jixi Center for Food and Drug Inspection,Jixi,Heilongjiang,China 158100)

Objective To establish a HPLC for the simultaneous content determination of Naringin and Icariin in Fengshi Antai Tablets．M ethods HPLC assay was carried out on a Agilent Extend－C18column with a column temperature at 30℃．The mobile phase used Acetonifrile －Water as gradient elution with flowing rate 1．0 mL／min．The detection wavelength was 283 nm and 270 nm for naringin and icariin respectively．Results The linear ranges of naringin and icariin were in the range of 0．148 0－1．850 0 μg and 0．432 0－5．400 μg respectively(r＝0．999 5,r＝1．000 0),and the average recovery was 97．38%,97．43%(RSD＝0．84%,0．74%,n＝6)．Conclusion The method is convenient,accurate,sensitive and repeatable,and could be used in the content control of naringin and icariin in Fengshi Antai Tablets．

dual－wavelength HPLC;Fengshi Antai Tablets;naringin;icariin

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)23－0071－03

杨立志（1977－），男，大学本科，副主任药师，主要从事食品药品检验检测工作，（电子信箱）Lizhi669＠sohu．com。

2016－07－13；

2016－09－11)