夏天无滴丸的药效学研究

胡 佳，何 涛，王 闯

（辽宁省锦州市药品检验检测中心，辽宁 锦州 121000）

夏天无滴丸的药效学研究

胡 佳，何 涛，王 闯

（辽宁省锦州市药品检验检测中心，辽宁 锦州 121000）

目的 探讨夏天无滴丸的镇痛、抗炎、免疫增强作用。方法 采用热板法、醋酸扭体法、鼠耳肿胀法、大鼠炎性肉芽肿增生法、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。结果 夏天无滴丸对冰醋酸诱发的小鼠扭体反应均有明显的抑制作用；对小鼠的痛阈值有提高；对二甲苯所致的小鼠耳肿胀具有明显的抑制作用，并呈明显的量效关系；各剂量对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能均有明显的促进作用，作用呈一定的量效关系。结论 夏天无滴丸具有镇痛、抗炎与免疫增强的作用。

夏天无滴丸；镇痛；抗炎；免疫；药效学试验

夏天无又名伏地延胡索、无柄紫堇、一粒金丹，系罂粟科植物伏生紫堇 corydalis decumbens(Thunb．)Pers．的干燥块茎，具活血通络、行气止痛之功效，临床用于中风偏瘫、跌扑损伤、风湿性关节炎、坐骨神经痛[1]。其常用制剂包括注射剂、片剂和滴眼剂[2]。普通片剂常因崩解和药物溶出缓慢而影响药物的充分吸收，老人、儿童和吞咽困难的患者服用不便，当药品剂量、规格较大，或需一次服用片数较多时，问题尤为突出。液体制剂虽服用方便，但稳定性差，包装、运输、贮存均不便，且不易准确掌握服用剂量。滴丸剂系指固体或液体药物与适宜的基质加热熔融后溶解、乳化或混悬于基质中，滴入不相混溶、互不作用的冷凝液中，收缩冷凝而制成的制剂[3]，利用固体分散体的技术制备。当基质溶解时，体内药物以微细结晶、无定形微粒或分子形式释出，所以溶解快、吸收快、作用快、生物利用度高[4]。现就夏天无滴丸药效学研究报道如下。

1 仪器、试药与动物

1．1 仪器

HH－4型数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；打孔器，消毒手术器械一套、消毒棉球；K3100A型电子天平均购自上海天平仪器厂。

1．2 试药

夏天无滴丸（本课题组制备）；夏天无片（江西天施康中药股份有限公司，国药准字号Z36021951）；生理盐水（沈阳北方制药厂，国药准字H21021049），戊巴比妥（西安化学试剂厂，批号为200210100)；完全弗氏佐剂购于Sigma公司。鸡红细胞悬液[将鸡血置有玻璃珠的锥形瓶中，朝一个方向充分摇动，以脱纤维；用生理盐水洗涤2～3次，离心(2 000 r／min，10 min)，去上清，用生理盐水配成体积分数为20%(V／V)]。

1．3 动物

昆明种系小鼠，清洁级SD大鼠，雌性，未交配，购于辽宁长生生物技术有限公司(许可证号SCXK2010－0001号)。饲养条件：辽宁中医药大学实验动物中心，符合卫生检疫标准，室温（20±1）℃，湿度20%，照明昼夜明暗交替时间为12∶12，大鼠自由饮水、进食。饲料为标准饲料（沈阳市于洪区前民饲料厂，饲料配方：玉米面40%，白面26%，麸子10%，豆饼10%，鱼粉10%，骨粉2%，盐1%及复合维生素1%）。

2 方法与结果

2．1 镇痛作用

2．1．1 醋酸诱发小鼠扭体反应

取体重为（20±2）g的雄性小鼠50只，随机分为5组，每组10只。阴性对照组灌胃生理盐水0．5 mL，阳性对照组灌胃夏天无片药液464 mg／kg，低、中、高剂量组灌胃夏天无滴丸混悬液55，167，510 mg／kg，连续灌胃5 d。第5天，各组小鼠于给药1 h后，分别腹腔注射1%的冰醋酸溶液0．2 mL，记录15 min内各小鼠有无扭体反应以及扭体的次数，计算各组扭体次数，计算镇痛百分率，并经方差分析作 q检验比较给药组与对照组的差异。扭体反应表现为腹部内凹、躯干和后退伸张、臀部抬高等[5]。腹腔注射冰醋酸溶液后，各组小鼠均出现扭体反应。结果见表1。

镇痛百分率(%)＝(对照组平均扭体次数－给药组平均扭体次数)／对照组平均扭体次数×100%

表1 夏天无滴丸对醋酸诱发小鼠扭体反应的影响（n＝10）

2．1．2 热刺激小鼠痛阈值(热板法)

将作为热板的材料置入恒温水浴箱中，把恒温水浴箱调节至（55±1）℃，待热板温度恒定时开始试验。取体质量（20±2）g的雌性小鼠，置热板上，以小鼠舔后足或跳跃为观察指标，测定各小鼠的正常痛阈值。30 s以内者供试验用，过于敏感、反应迟钝、喜跳动者剔除[6]。取测试合格的雌性小鼠50只，随机分为5组，每组为10只。空白对照组灌胃生理盐水0．5 mL；阳性对照组按464 mg／kg的剂量灌胃夏天无片药液；低、中、高剂量组分别按55，167，510 mg／kg灌胃夏天无滴丸混悬液。分别在各组给药后15，30，45，60，90 min测定各组小鼠的痛阈值。如果小鼠在热板上停留超过60 s仍无痛反应，则即刻取出，按60 s计算。用测得的数值与同一时间间隔的阴性组痛阈值进行比较，并经方差分析作 t检验比较给药各组与对照组的差异情况。按下述公式计算各组镇痛百分率。结果见表2。

镇痛百分率(%)＝(用药后平均痛阈值－用药前平均痛阈值)／用药前平均痛阈值×100%

2．2 抗炎作用[7]

2．2．1 对小鼠二甲苯致炎的影响（鼠耳肿胀法）

取昆明种小鼠50只，体质量18～22 g，雄性，随机分成5组，每组10只，高、中、低剂量组灌夏天无滴丸混悬液 510，167，55 mg／kg，阴性对照组灌生理盐水0．5 mL，阳性对照组灌胃夏天无片溶液464 mg／kg。每天灌1次，连续7 d，于末次给药30 min后，于小鼠右耳两面涂二甲苯0．1 mL，致肿，左耳不涂为正常耳，1 h后脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9 mm打孔器冲下左耳及右耳同一部位的圆片，于分析天平上称重。右耳质量减去左耳质量为肿胀度，计算鼠耳肿胀度。结果见表3。对肿胀度进行分组 t检验，夏天无滴丸各组与模型组相比较，差异均不显著。

表2 夏天无滴丸对热刺激小鼠痛阈值的影响（n＝10）

抑肿率(%)＝（模型组－给药组差值）模型组差值× 100%

表3 夏天无滴丸对小鼠二甲苯致炎的影响（n＝10）

2．2．2 大鼠炎性肉芽肿增生的影响[8]

大鼠购回后适应性喂养1周，然后随机分为5组，每组10只，手术当日，给予大鼠腹腔注射1%戊巴比妥35 mg／kg麻醉，于胸部正中线用碘及75%酒精消毒后剪1～2 cm的小口，再用止血钳由切口处将灭菌棉球(重量为30 mg，经高压灭菌)塞入左、右腋窝处的皮下，每侧一个，而后将切口缝合。手术后第2天开始每组每日灌胃1次，阳性对照组给生理盐水3 mL，阳性对照组给夏天无片药液464 mg／kg，低、中、高剂量组分别予夏天无滴丸混悬液55，167，510mg／kg，连续7 d。第8天处死，分别剥离肉芽组织，80℃，3 h烘干，电子天平称重，减去棉球质量即为肉芽组织净重。所有数据用均数±标准差(s)表示，组间数据比较用 t检验。结果见表4。

表4 夏天无滴丸对大鼠棉球肉芽肿的影响(n＝10)

2．3 免疫作用

2．3．1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验

小鼠的巨噬细胞可通过聚集、识别和吞入消灭3个步骤完成吞噬异体物质鸡红细胞[9]。利用小鼠的巨噬细胞对光滑表面（如玻璃表面）具有黏附能力的特性，将鸡红细胞经腹腔注射入小鼠体内后，用生理盐水洗脱小鼠腹腔，将含有巨噬细胞的腹腔液滴于载玻片上，孵育一定时间后，冲洗掉无黏附能力或粘附力差的巨噬细胞，固定染色，在显微镜下计数吞噬鸡红细胞的小鼠巨噬细胞数，按下列公式算出吞噬指数和吞噬率，据此判定夏天无滴丸对小鼠巨噬细胞吞噬能力的影响。

吞噬指数＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数／巨噬细胞数×100%

吞噬率(%)＝被吞噬的鸡红细胞数／巨噬细胞数× 100%

将受试组和对照组的小鼠连续灌胃7 d后，（给药后第6天，每鼠腹腔注射5%灭菌淀粉溶液1．0 mL），末次给药后1 h，每只小鼠腹腔注射5%鸡红细胞悬液1．0 mL。于注射鸡红细胞后1．5 h，将小鼠脱颈椎处死，仰卧固定于鼠板上，腹腔注射生理盐水1．0 mL，轻轻按摩小鼠腹部1 min，然后剪开腹壁，抽取小鼠腹腔液滴于2片干净的载坡片上，每片0．2 mL涂片。将涂片放在垫有湿纱布的塘瓷盘中，置于恒温37℃孵育箱中温育40 min，使载坡片上腹腔洗液干燥。干燥后用乳头吸管抽取生理盐水轻轻冲洗，以洗去未贴片的细胞，晾干，用姬母萨－瑞特氏液染色15 min，用蒸馏水轻轻冲洗，晾干，在油镜下每片计数200个巨噬细胞，计数出已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞个数及各巨噬细胞吞噬鸡红细胞的总数。按下列公式计算每鼠巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数。对吞噬百分率及吞噬指数进行组间 t检验，评价对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果见表5。

表5 夏天无滴丸对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响（s，n＝10）

表5 夏天无滴丸对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响（s，n＝10）

注：与阴性对照组比较，**P＜0．05。

组别阴性对照组阳性对照组低剂量组中剂量组高剂量组剂量（mg／kg）464 55 167 510吞噬百分率(%) 39．60±4．86 70．60±2．86 51．30±4．22 95．40±3．08**63．45±4．67吞噬指数0．97±0．27 0．41±0．032 0．50±0．042 0．58±0．044**0．54±0．039

2．3．2 佐剂型关节炎大鼠的影响[10]

大鼠购回后，喂养1周，然后随机分为6组，A（空白组）、B(模型组)、C(阳性对照组)、D(夏天无滴丸高剂量组)、E(夏天无滴丸中剂量组)、F(夏天无滴丸低剂量组)，每组8只，各组大鼠体质量经统计学处理，无显著性差异（P＞0．05）。结果见表6。

表6 各组大鼠体质量比较（s，n＝8，g）

表6 各组大鼠体质量比较（s，n＝8，g）

组别A组B组C组平均体质量163．7±15．2 163．2±11．2 163．3±10．5组别D组E组F组平均体质量163．5±12．5 163．0±16．3 163．8±10．3

大鼠在灭菌条件下经鼠右后跖皮下一次性注射CFA0．1 mL，48 h后，灌胃给药，每日1次，连续30 d，阴性对照组不灌胃，阳性对照组给生理盐水2 mL，组给夏天无片药液464 mg／kg，低、中、高剂量组分别给夏天无滴丸混悬液55，167，510 mg／kg。造膜及给药期间，观察各组大鼠精神状态、饮食、体重变化、毛色等；观察关节原发病变及继发损害情况，如皮肤充血、红肿、皮温升高、结节等。

行为状态：造模18 h后，大鼠出现竖毛、喜卧、活动减少，第3天开始出现摄食减少，1周后饮食基本恢复正常。造模13 d后，随着继发关节肿胀加重，再次出现活动摄食减少，体质量增长较空白组慢，毛色泛黄无光泽，精神不振，18 d达高峰，至第30天基本恢复。A组试验期间精神状态，摄食活动均无明显变化，体重增加较快。30天其余各组体质量比较见表7。

表7 造模第30天各组大鼠体质量比较（s，n＝8，g）

表7 造模第30天各组大鼠体质量比较（s，n＝8，g）

A组B组C组平均体质量430．5±18．3 351．0±31．2 387．2±33．3组别D组E组F组平均体质量376．5±19．8 368．7±15．4 350．6±18．6

关节外观变化：造模数小时后，右后足出现局部皮肤充血，温度升高，24 h后，后足明显肿胀发红，第3天达高峰，后开始减轻。第13天，大多数造模大鼠右后足再次肿胀，逐渐累及全后肢及前肢，第18天达高峰，关节局部充血，足跖增厚出现跷足等。第30天C，D，E，F组基本恢复正常。B组恢复程度较差，仍有肿胀。

3 讨论

3．1 镇痛作用

根据疼痛所表现出的行为反应，应用的疼痛模型主要有:热刺激法(如热板法)、机械刺激法、化学刺激法(如醋酸扭体试验)、电刺激法等[11]。化学刺激法比较适用于筛选解热镇痛药的镇痛作用，机械刺激法、电刺激法及热刺激法主要用于筛选麻醉性镇痛药[12]。疼痛所引起的情绪反应、行为反应、生理功能障碍，是许多疾病的症状[13]。

由表1可见，夏天无片与夏天无滴丸对冰醋酸诱发的小鼠扭体反应均有明显的抑制作用，与阴性对照组比较具有显著性差异(P＜0．05)；中剂量组与阳性对照组比较有显著性差异(P＜0．05)；中剂量组灌胃给药可显著抑制醋酸诱导的扭体反应，且与阳性对照组比较，药品服用量显著减少。

由表2可见，给药组对小鼠的痛阈值均有提高，镇痛效果与阳性对照组相似；给药组在给药后15～60 min痛阈值没有明显变化，60 min后痛阈值略有提高，90 min后痛阈值下降。结果表明，夏天无滴丸具有提高小鼠痛阈值(热刺激)的作用，但未表现出良好的量效关系。

3．2 抗炎作用

由表3所示，给药组对二甲苯所致的小鼠耳肿胀具有明显的抑制作用，并呈明显的量效关系。

由表4所示，阳性对照组与阴性对照组之间比较有极显著性差异(P＜0．01)；低剂量组与阳性对照组间比较有极显著性差异(P＜0．01)；中剂量组与阴性对照组间比较有极显著性差异(P＜0．01)；高剂量组与阳性对照组间比较有极显著性差异(P＜0．01)。说明夏天无滴丸具有良好的抗炎作用[14]。

3．3 增强免疫

免疫是指机体接触“抗原性异物”“异己成分”的一种特异性生理反应，是机体在进化的过程中获得的“识别自身、排除异己”的一种重要生理功能[15]。在正常情况下，免疫反应通常对机体是有利的，但是在某些条件下（免疫异常）也可以是有害的，如注射异种动物血清引起的血清病，血型不符的输血引起的输血反应等。广义的免疫应答包括非特异性和特异性的识别，并排除异己成分以维持自身稳定的过程。机体的非特异性免疫功能主要是吞噬细胞的吞噬作用(主要包括两类吞噬细胞即中性粒细胞和巨噬细胞的作用)和自然杀伤细胞的作用。免疫应答多指抗原诱导的特异性免疫应答，主要是由淋巴细胞介导的缰胞免疫和体液免疫来完成。在生物繁衍过程中，吞噬是一种细胞功能，也是基本的防卫机制之一。人的血液中的吞噬细胞包括中性粒细胞和单核巨噬细胞两类，由于它们能非特异性地吞噬多种抗原，对机体起防御和保护作用，故称为非特异性免疫。巨噬细胞受抗原刺激后活化，使其吞噬功能增强，测定出它们的吞噬功能即反映了机体非特异性免疫功能的强弱。

由表5所示，夏天无滴丸各剂量对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能均有明显的促进作用，作用呈一定的量效关系。中剂量组与阴性对照组之间的方差分析结果表明，中剂量组与阴性对照组之间有显著性差异，各剂量组能显著地提高小鼠巨噬细胞活性功能。

本试验中，仅对佐剂型关节炎大鼠体质量、行为状态、关节局部变化等外部特征做了观察。若要进一步考察夏天无滴丸对风湿的治疗作用，还应从病理形态学方面观察风湿性关节炎大鼠关节皮下软组织和滑膜炎症的改变，须从分子水平作深入的研究[16]。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010:262．

[2]徐卫国，李秀梅．夏天无及其制剂近10年研究进展[J]．中国药业，2005，14(1):80－81．

[3]付超美，何宇新，李 玲，等．中药滴丸剂成型工艺的研究[J]．中国药业，2004，13(4):27－28．

[4]范自全，周明眉，邱明丰，等．痛经滴丸的主要药效学研究[J]．中成药，2012，34(1):133－136．

[5]杨培培，于立坚，马润娣，等．阿魏酸钠脑室内注射对谷氨酸单钠诱导成年小鼠神经损伤的修复作用[J]．中华行为医学与脑科学杂志，2008，17(1):13－15．

[6]范文昌，梅全喜，欧秀华，等．12种广东地产清热解毒药材的抗炎作用研究[J]．中国药业，2011，20(8):28－30．

[7]冯平安，贾德云，刘 超，等．老鹳草抗炎作用研究[J]．安徽中医临床杂志，2003，15（6）：511－512．

[8]王瑞明．曲氏传药对小白鼠肉芽肿增生的影响[J]．中国药业，1999，8(9):10－11．

[9]戴小慧，章建芳，陈 龙．硫酸软骨素免疫增强作用研究[J]．中国药业，2006，15（16）：16－18．

[10]朱京虎，洪孝民，杨海人，等．关节康口服液对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用及胃黏膜保护作用研究[J]．中国药业，2007，16(22):26－27．

[11]杨宏昕，常 亮，赵 阳，等．蒙药金莲花药理作用研究[J]．中国药业，2012，21(20):29－30．

[12]刘 虎，李 洁，王喜梅，等．荨篷膏醋酸扭体法镇痛实验研究[J]．新疆中医药，2014，32(2):54－55．

[13]孙 婷，姜建国，张广钦．芍药甘草汤的镇痛抗炎作用研究[J]．中国药业，2016，25(3):18－20．

[14]姜国云，高小芳，周 鸿，等．月舒滴丸对实验性痛经模型的药效学研究[J]．湖北中医药大学学报，2012，14(6):17－20．

[15]徐 钊，贾天凌，曹于平．免疫增强剂的研究进展[J]．中国药业，2013，22(15):1－3．

[16]殷书梅，王 宓，林新艳，等．七味通痹口服液治疗类风湿性关节炎的机理研究[J]．中国药业，2010，19(14):29－32．

Pharmacodynamical Study on Corydalis Decumbens Dropping Pills

Hu Jia,He Tao,Wang Chuang
(Jinzhou Institute for Drug Control,Jinzhou,Liaoning,China 121000)

Objective Tostudy the analgesicand anti－inflammatory effects of Corydalis Decumbens Dropping Pills．Methods Hot plate,acetic acid body turning,mouse ear swelling model,inflammatory granuloma hyperplasia in rats,mice macrophage cell consume chicken red blood cell tests were used．Results Corydalis Decumbens Dropping Pills had obvious inhibitory effect on the body torsion reaction induced by acetic acid;the pain threshold of mice was increased;had obvious inhibitory effect on the mouse ear swelling caused by xylene and showed clear dose－response relationship．All dose of Corydalis Decumbens Dropping Pills had obvious promoting effect on phagocytic function of macrophage and a certain dose－response relationship．Conclusion Corydalis Decumbens Dropping Pills has analgesic,anti－inflammatory effect and can improve immune function

Corydalis Decumbens Dropping Pills;analgesia;anti－inflammatory;immune;pharmacodynamical test

R285．5；R286

A

1006－4931(2016)23－0014－05

胡佳（1981－），女，硕士研究生，副主任中药师，研究方向为中药学，（电话）0416－2655924（电子信箱）hujia0424＠126．com。

2015－10－14；

2016－06－28)