胃癌组织中B7-H1的表达及临床意义研究

王战伟 赵辉 韩少良

胃癌组织中B7-H1的表达及临床意义研究

王战伟 赵辉 韩少良

目的 检测人体胃癌组织中B7-H1的表达，探讨其与患者临床病理特征的关系及对预后的影响。方法 采用免疫组化染色法检测胃癌组织中B7-H1的表达，分析其在胃癌组织中的阳性表达率与患者临床病理特征之间的关系，并绘制患者术后生存曲线，评价B7-H1表达对预后的影响。结果 65例胃癌组织中癌细胞的细胞膜、细胞质以及部分肿瘤组织浸润的淋巴管及淋巴细胞中均有检测到B7-H1的阳性表达，阳性率为36.9%。有淋巴结转移或脉管内有癌栓的患者B7-H1阳性率较高（均P＜0.05）。B7-H1阳性表达的胃癌患者术后5年生存率（25.0%）低于阴性表达的患者（56.1%）（P＜0.05）。结论 B7-H1阳性表达的胃癌患者易发生淋巴结转移，预后较差，B7-H1可作为评价胃癌患者预后的指标之一。

B7-H1蛋白 胃癌 临床病理特征 预后

B7-H1又称CD274或程序性死亡配体，是近年来发现的一种免疫共刺激分子，主要表达在抗原递呈细胞上，它与受体结合后诱导特异性T细胞凋亡，介导人类肿瘤免疫逃逸进而参与肿瘤的发生及转移[1-2]。目前多种人类实性肿瘤组织中都有发现B7-H1，其已成为肿瘤免疫治疗的新热点。本研究运用免疫组化方法研究胃癌组织中B7-H1的表达，结合患者临床资料分析B7-H1与临床病理特征和预后的关系，旨在探索B7-H1在胃癌发生过程中的免疫作用机制及其对患者预后的影响。

1 资料和方法

1.1 一般资料 本研究胃癌组织标本为温州医科大学附属第一医院普外科2005年4月至2006年7月因胃癌行手术治疗的65例患者。所有患者术前未行放疗或化疗，且均有完整的临床及随访资料。其中男51例，女14例；年龄30～81（61.8±10.8）岁；有淋巴结转移者41例，有种植转移或其他脏器转移者9例，脉管内有癌栓者29例；胃癌TNM分期Ⅰ期16例，Ⅱ期17例，Ⅲ期23例，Ⅳ期9例。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化染色 采用SP三步法。主要试剂：小鼠抗人B7-H1（美国eBioscience公司）、羊抗小鼠二抗、山羊血清、DAB显色剂、过氧化氢封闭液（北京中杉金桥生物技术有限公司）。取石蜡标本3μm厚连续切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，PBS洗3次（每次5min，下同），抗原修复液微波热抗原修复（中低火15min），PBS洗3次，3%过氧化氢室温孵育10min抑制内源性过氧化物酶的活性，PBS洗3次，山羊血清封闭37℃恒温箱孵育20min，倾去血清后直接加一抗（B7-H1稀释浓度为1∶40，阴性对照用抗体稀释液代替一抗），置于4℃冰箱过夜，PBS洗3次，加羊抗小鼠二抗37℃恒温箱孵育30min后PBS洗3次，DAB显色，苏木素核染，脱水，封片。

1.2.2 检测结果判断 每张切片在×200倍显微镜下随机选择5个肿瘤区域进行细胞计数。细胞核被染成蓝色或淡蓝色，而在细胞膜或细胞质有淡黄色、棕黄色或者褐色颗粒的细胞为阳性表达细胞，细胞膜及细胞质无着色为阴性细胞。染色结果评分标准：（1）无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；（2）阳性细胞占比＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。标本检测结果判断：两项评分相加＜2分为阴性（-），2～3分为弱阳性（+），4～5分为中度阳性（++），6～7分为强阳性（+++）；结果≥2分设为阳性组，＜2分设为阴性组。

1.3 随访 所有患者术后均按常规诊疗规范定期治疗和随诊，采用电话随访的方式。生存时间从手术日开始算起至死亡日或最后随访日（2012年1月），以月为单位计算。

1.4 统计学处理 采用SPSS15.0统计软件；计数资料以构成比表示，两组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法；采用Kaplan-Meier法绘制两组患者生存曲线，两组间中位生存时间的比较采用log-rank检验。

2 结果

2.1 胃癌组织中B7-H1的表达情况 见图1。

图1 胃癌组织中B7-H1的表达情况（SP三步法染色，×400）

由图1可见，胃癌组织中B7-H1主要表达于细胞膜和细胞质，呈棕黄色颗粒或褐黄色粗颗粒。

2.2 两组患者胃癌组织中B7-H1的表达与临床病理特征的关系 见表1。

由表1可见，65例标本中有阳性标本24例（阳性率36.9%），阳性组患者脉管内癌栓及淋巴结转移发生率均高于阴性组患者。

2.3 两组患者术后5年生存情况的比较 截止随访终止日，本研究患者中位生存时间47个月（1～79个月）；两组患者术后生存曲线见图2，阳性组患者术后5年中位生存时间短于阴性组患者（P＜0.05）；其5年生存率亦低于阴性组患者，见表2。

图2 两组患者术后生存曲线的比较

表2 两组患者术后5年生存率的比较[例（%）]

3 讨论

B7-H1是第3个被发现的B7家族成员，属于负性共刺激分子，主要表达在细胞质及细胞膜上，且受到多种细胞因子及肿瘤抗原的调节。B7-H1在正常胃黏膜组织中几乎不表达[3]，本研究检测到B7-H1在胃癌组织中呈高表达，且在伴有脉管内癌栓及淋巴结转移的胃癌患者中的阳性表达率较高。这可能与B7-H1介导的肿瘤细胞免疫逃逸有关，提示B7-H1可能参与了胃癌的发生，且与肿瘤浸润淋巴细胞及淋巴结中B7-H1及其受体PD-1的特异性高表达有关[4]。本研究亦发现阳性组患者术后5年中位生存时间短于阴性组患者，其术后5年生存率低于阴性组患者，可能是由于B7-H1高表达患者抗肿瘤免疫功能发生障碍，更容易发生肿瘤转移，预后较差，这从侧面反映出B7-H1的高表达可能是影响胃癌患者预后的危险因素。

目前公认抗肿瘤免疫功能障碍是胃癌形成机制之一，而B7-H1/PD-1信号通路在该过程中起到重要的作用，其参与调节人体细胞及体液免疫，尤其是细胞免疫。在人类多种免疫细胞及肿瘤细胞表面已检测到B7-H1的表达，并发现其与人类肿瘤免疫逃逸有着密切的关系。肿瘤细胞及肿瘤浸润细胞上高表达的B7-H1通过与受体PD-1结合，传递抑制信号，调节Fas/FasL信号通路使激活的T细胞凋亡、失活或发生功能耗竭，并诱导具有抗肿瘤作用的特异性细胞毒性T淋巴细胞发生凋亡；B7-H1也可抑制穿孔素的产生，阻碍CD8+T细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤；其还可通过抑制细胞毒性T细胞介导的细胞溶解作用及限制自然杀伤细胞的作用，使肿瘤细胞躲过人体免疫系统的监视，发生免疫逃逸，促进肿瘤的发生、发展及转移[5-7]。

综上所述，B7-H1介导的肿瘤免疫逃逸参与了肿瘤的发生及转移，根据本研究结果推测B7-H1可作为评估胃癌患者预后的指标之一，同时B7-H1介导的免疫逃逸机制研究有可能成为一项具有良好前景的抗肿瘤研究方向。

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[2]Seliger B,Quandt D.The expression,function,and clinical relevance of B7 family members in cancer[J].Cancer Immunology Immunotherapy Cii,2012,61(8):1327-1341.

[3]Wu C,Zhu Y,Jiang J,et al.Immunohistochemical localization of programmed death-1 ligand-1(PD-L1)in gastric carcinoma and its clinicalsignificance[J].Acta histochemica,2006,108(1):19-24.

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Expression of B7-H1 protein in gastric cancer and its clinical significance

WANG Zhanwei,ZHAO Hui,HAN Shaoliang.Department of General Surgery,the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou 325000,China

Objective To investigate the expression ofB7-H1 in gastric carcinoma and its clinicopathological significance. Methods Immunohistochemical staining was used to detect the expression of B7-H1 protein in gastric cancer.The relationship between the B7-H1 protein expression and clinicopathological parameters was analyzed. Results Immunohistochemical staining revealed that B7-H1 was expressed on membrane,cytoplasm of cancer cells and tumor infiltrating lymphocytes.B7-H1 protein in gastric cancer was correlated with lymph node metastasis and vessel infiltration(P＜0.05).The postoperative 5-year survival rate of patients with negative B7-H1 expression(25.0%)was lower than that of those with positive B7-H1 expression (56.1%,P＜0.05). Conclusion Gastric cancer patients with B7-H1 positive expression are likely to have lymph node metastasis and poor prognosis,indicating that it might be used as an indicator ofprognosis for gastric cancer patients.

B7-H1 protein Gastric cancer Clinicopathologic feature Prognosis

2015-09-24）

（本文编辑：李媚）

325000 温州医科大学附属第一医院胃肠外科（王战伟为研究生，现在湖州市中心医院工作）

韩少良，E-mail：SLhan88@hotmail.com