PNH实验室检测项目在赣南地区综合医院开展现状调查

肖作淼，张丽琴，张荣山，陈先春，肖德俊，肖九长

(赣州市人民医院检验科，江西赣州341000)

·调查报告·

PNH实验室检测项目在赣南地区综合医院开展现状调查

肖作淼，张丽琴，张荣山，陈先春，肖德俊，肖九长

(赣州市人民医院检验科，江西赣州341000)

目的调查所有赣南地区二级以上综合医院有关阵发性睡眠性血红蛋白尿症（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH）检测项目的开展现状。方法根据实验原理及诊断价值大小将PNH检测项目分为一类至四类，通过问卷方式对已开展项目完成方式、实验方法、标本量和阳性标本数，以及未开展的PNH项目的主要原因等内容进行调查。结果发放问卷共20份，回收问卷20份，有效问卷20份，其中“二甲”医院17家，“三甲”医院3家；第一、二类PNH检测项目开现状为：有4家医院开展了，剩余16家没有开展。未开展的主因分别是：第一类为仪器最贵，第四类为技术人员缺乏，第二、三类不同项目主要原因不一。结论赣南地区的二级综合医院对PNH的重视不足，PNH实验室检测项目开展过少，应引起临床与实验室更多的关注。

阵发性睡眠性血红蛋白尿症；实验项目；赣南地区；现状调查；误诊

PNH是一种由于体细胞xp22.1上PIG-A基因突变导致的获得性造血干细胞克隆性疾病。其发病机制包括造血干细胞PIG-A基因突变，使部分或完全血细胞膜糖化磷脂酰肌醇(dycophosphalidyl-inositol，GPI)锚合成障碍，造成血细胞表面GPI锚连蛋白缺失，细胞灭活补体等能力减弱，从而引起细胞容易被破坏，发生溶血等[1，2]。PNH临床表现多样，实验室检查是PNH诊断的关键，现将赣南地区有关PNH实验室检测项目开展的情况报告如下。

1 材料与方法

1.1 调查对象为赣南地区所有的二级以上综合医院之检验科。

1.2 调查内容包括检验科已开展PNH相关检测项目的名称、方法及周样本量，以及未开展项目的主要原因等内容。

1.3 检测项目分类根据检测原理及诊断PNH价值大小将检测项目依次划分成四类合计15个单项，即第一类为流式细胞术检测、第二类为特异性补体溶血检测、第三类骨髓红系造血代偿检测及第四类血管内溶血检测，其中第一、第二类为PNH诊断主要项目[3]。

1.3.1 第一类为流式细胞（flow cytometry，FCM）检测：运用FCM技术对PNH异常克隆的筛选与识别，包括流式细胞术检测衰变加速因子（DAF， CD55）、反应性溶血膜抑制物（MIRL，CD59)，荧光标记气单胞菌溶素前体变异体（Flaer），共三个项目。

1.3.2 第二类为特异性补体溶血检测血清酸化溶血试验（Ham test）、糖水溶血试验、蛇毒溶血试验、微量补体溶血敏感试验共四个项目。

1.3.3 第三类为骨髓红系造血代偿检测外周血网织红(Ret)检测、骨髓形态和活检，共三个项目。

1.3.4 第四类为血管内溶血检测血游离血红蛋白（FHb）、血清结合珠蛋白（Hp）、乳酸脱氢酶（LDH）、血红蛋白尿(hemoglobinuria)、尿含铁血黄素（Rous test）共五个项目。

1.4 调查方式课题组通过邮件方式给检验科发放调查问卷，由科主任与项目负责人共同完成问卷后发送给课题组邮箱。对有疑问者通过电话方式再次复核，直至无误。问卷表由Excel软件设计完成，在相应单元格内设有下拉选项。PNH相关检测项目分为已开展和未开展两大类；已开展项目中其中：完成方式选项包括自身检测和外送检测；阳性结果选项包括有和无；未开展项目原因包括：标本送检量少、操作复杂、试剂购买难、收费低、仪器昂贵、人员培训不到位、对PNH了解少；其他原因。

2 结果

2.1 问卷发放与回收情况2016年4月至2016年5月，对赣南所有二级以上综合医院实验室通过邮件方式发放共计20份问卷，于2016年5月30日前全部回收，有效问卷20份。其中三级甲等医院3家，二级甲等医院17家。

2.2 PNH检验项目开展现状第一类PNH项目（CD55 CD59和Flaer）有3家（占15%）实验室已开展，其中2家（10%）完成方式为外送，仅1家（5%）为自身完成；第二类中血清酸化溶血试验（Ham）和糖水溶血试验有2家（10%）；第三类外周血网织红PNH项目者18家（占90%），骨髓形态17家（占85%），骨髓活检3家（占15%）；第四类游离血红蛋白有1家（占5%），而蛇毒溶血试验、微量补体溶血及结合珠蛋白三项无实验室开展，详见图1。

图1 20家实验室PNH项目开展情况

2.3 已开展项目的标本量全区20家实验室已开展的12个PNH相关项目，涉及第一和第二类仅4家（其中有1家二甲单位开展了糖水溶血试验，每周标本量均不超过10个。详见表1。

2.4 未开展项目原因调查对实验室PNH相关项目未开展原因调查，各类项目主要原因如下：第一类为仪器最贵（占94.1%），第四类为技术人员缺乏（占100%），第二、第三类不同项目主要原因不一。详见表2。

3 讨论

艾库组单抗（Eculizumab）的临床应用，使PNH患者的生活质量与生存期得到明显提高，为PNH患者带来了福音[4，5]，而实验室检测是临床诊断PNH的必须手段。传统PNH检测即调查表中的第二类项目，如Ham试验和蔗糖水溶血等项目，为特异性补体溶血试验，具有仪器设备和实验技术要求低的优点，容易开展，其中Ham试验曾为PNH诊断的经典试验[6]。随着第一类项目即流式细胞术（FCM）检测CD55、CD59、Flaer的应用，则大大提高了PNH诊断的特异性与敏感性，微小克隆的检出使PNH的早期诊断成为可能，FCM已成为现代PNH诊断的金标准[3，7，8]。传统检测（第二类）与现代流式（第一类）两者检测方法相比，前者最大的优势在于：仪器设备和操作技术要求低[10]，同时检测费用低、患者容易接受，适合于基层医院开展，适应对贫血患者的筛查或大部分PNH患者的确诊，但通过本次问卷得出：传统检测方法在基层医院开展并不理想，主要原因包括收费低、操作复杂；而后者同样受到限制，整个赣南地区的综合医院中共有2台流式细胞仪，均在“三甲”医院，致使第一类检测项目难于在基层医院开展，而仪器昂贵是其主要原因。其他项目如蛇毒溶血和游离Hb等几项试验整个赣南地区无单位开展标本少、试剂难买和操作复杂是主要原因。

随着我国“分级诊疗”制度的推行，二级综合医院所承担疾病诊疗病种、复杂程度都将会面临着挑战。PNH患者发病时临床表现多样如贫血（如缺铁性贫血、类似再障的全血细胞减少、慢性血管内溶血）、血栓或腹痛症状[11-15]，而绝大多数PNH患者患病后都首先在当地医院就诊。因PNH发病率不高，临床病例并不多见，故容易被临床医师忽视，在临床上PNH的误诊现象较为普遍[6，11]，许多PNH病例从发病到明确诊断前通常有几个月至几年的诊断不明病史。PNH的诊断主要依赖于实验室检查，而本调查显示赣南地区的二级综合医院的实验室开展的第一、二类PNH检测项目非常有限，这显然不利于PNH的早期诊断，致使PNH的诊断难于完成，PNH误诊的重要因素之一。作为欠发达地区的赣南老区，应用传统的PNH检测项目进行组合如Ham试验、蔗糖水溶血和尿含铁血黄素（Rous），对贫血患者进行联合筛查，可以大大减低PNH的误诊率[6]；而对高度疑似患者外送检测机构进行流式细胞术确诊，可以有效提高PNH的早期诊断率；总之，减少PNH的误诊，让PNH患者尽早得到明确诊断，需要临床医生更多关注PNH，对可疑患者应及时送检PNH检查项目；而实验室积极开展第一、二类PNH检测项目，为诊断PNH提供实验室支持亦同样重要。

表2 PNH检测项目未开展原因汇总表

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R556.6+9

A

1674-1129(2016)06-0788-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.06.033

2016-08-09；

2016-11-20)

江西省赣州市科技局计划课题（GZ2015ZSF107）

肖九长，Email：13807078672@163.com。