冷冻血浆在血浆黏度室内质控中的应用及评价

陈蓉艳，刘继来，高芳琳，李扬宇，赖雯斓

(福建中医药大学附属人民医院检验科，福建福州350004)

冷冻血浆在血浆黏度室内质控中的应用及评价

陈蓉艳，刘继来，高芳琳，李扬宇，赖雯斓

(福建中医药大学附属人民医院检验科，福建福州350004)

目的自制混合冷冻血浆（来源于健康体检人群）以及临床上报废的滤白冷冻新鲜血浆（来源于献血者）用于血液流变学中血浆黏度的室内质量控制，并对其进行评价。方法收集健康体检人群的血浆充分混合后、-20℃低温保存自制混合冷冻血浆，同时采用无偿献血者报废滤白冷冻新鲜血浆，用于室内质控检测，并对其进行精密度和稳定性评价。结果健康体检人群混合冷冻血浆的血浆黏度定值范围为1.548±0.025(CV:1.622%)，180d以内稳定性良好，无偿献血者报废滤白冷冻新鲜血浆的血浆黏度的定值范围为1.182±0.008(CV:0.688%)，两者的室内质控均未见失控。结论两种冷冻质控血浆的精密度与稳定性均良好。

血浆黏度；室内质量控制；应用评价

国内大多数医院检验科所进行的血液流变学检测中血浆黏度的室内质控为空白，也无商品血浆黏度质控物可购买。为了检测结果的准确可靠，我们应用健康体检人群的混合冷冻血浆以及无偿献血者的报废滤白冷冻新鲜血浆作为血浆黏度测定的室内质控物，建立本科室的血浆黏度室内质量控制体系。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂SA7000血液流变仪（北京赛科希德）；低温冰箱（日本三洋）；TS-8振荡器（海门其林贝尔）；电热恒温水浴箱（江苏新康出）；纯水机（杭州天创）。其余试剂均为北京赛科希德公司产品。

1.2 质控血浆的制备

1.2.1 健康体检人群的冷冻混合血浆的配制一次性收集一天内健康体检人群(HBsAg、HCV、HIV、RPR阴性，血清蛋白、肝功、血脂、血糖正常，血浆黏度在正常参考值范围内）的肝素锂抗凝血浆，排除脂血、黄疸、溶血标本，收集血浆于一个洁净大烧杯中，充分混匀，并经56℃、30min灭活后备用，取出5ml用于定值，其余以每支500μl分装于EP管中，置低温冰箱-20℃保存，分装过程血浆置于TS-8振荡器上持续混匀并在2h内完成。

1.2.2 无偿献血者报废滤白冷冻新鲜血浆分装将确定报废的血浆及时地取出5ml用于定值，其余以每支500μl分装于EP管中，置低温冰箱-20℃保存，分装过程血浆置于TS-8振荡器上持续混匀并在2h内完成。

1.2.3 纯水的定值纯水机配置的纯水分装到干净检测管内用于日常校准及定值。

1.3 质控血浆的定值SA7000血液流变仪经日常维护后，对血浆黏度进行定标校准，取上述健康体检人群的混合冷冻血浆、无偿献血者的报废滤白冷冻血浆在37℃电热恒温水浴箱内温浴15~ 30min，同纯水一起重复测定20次，分别计算得出均值±标准差（x±s）作为各自的定值范围。

1.4 稳定性试验间隔若干工作日取质控血浆20份样本，分别在3d、30d、60d、120d、180d后完成相同数量的检测，由于无偿献血者报废滤白冷冻新鲜血浆只收集到200ml，分别在3d、30d、60d进行了检测。而后进行统计学分析，用以反应随时间推移冷冻血浆的稳定性变化。

1.5 冷冻血浆室内质控的应用利用均值、标准差和变异系数确定Levey-Jennings质控图的x±2s上下警告线和x±3s质控上下限，每天常规检测开展室内质控。同一批号的冷冻血浆每月的室内质控上下警告线和质控上下限采用数据累计的方法来确定。采用Westgard规则质控方法进行判断。

1.6 统计学处理采用SPSS统计软件进行数据处理。

2 结果

2.1 质控血浆的定值健康体检人群的混合冷冻血浆（n=20）：1.548±0.025(CV：1.622%)；无偿献血者的报废滤白冷冻新鲜血浆（n=20）：1.182±0.008(CV：0.688%)；纯水（n=20）：0.709±0.006(CV：0.779%)。2．2稳定性试验结果见表1、表2、表3。

2.3 室内质控的应用见图1、图2、图3。

3 讨论

血液流变学中的血浆黏度用于评估血浆黏度的异常，许多因素会影响血浆黏度，血浆蛋白是影响血浆黏度的主要因素，纤维蛋白原、免疫球蛋白和其它血浆蛋白含量、分子构成和大小都是影响血浆黏度的主要因素，洪流等[2]在研究不同临床类型冠心病诊疗纤溶系统标志物的变化时发现血浆Fg、FDP、D-D含量明显升高，有显著性差异（P＜0.01），认为患者血浆纤溶系统失衡，其中AMI和UAP患者存在异常激活的高凝状态。王秋丰[3]Culleton BF[4]等也注意到某些心血管疾病患者Fbg有升高的趋势。刘继来等[5]在探讨血浆纤维蛋白原、血脂血糖与血黏度的相关性时提出纤维蛋白原与血浆黏度具有显著线性相关，一元及多元回归分析均显示其与血浆黏度的相关系数最大，相关性较其它指标更明显。此外，胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白的含量与黏度成正比；血糖升高，血浆黏度升高；杜贵萍[6]等提出脂肪酸结合蛋白（HFABP）在心肌梗死早期诊断中有重要意义。邓荣春等[7，8]提出血清non-HDL-C及apoB/apoA1比值的升高与心血管事件发生危险性明显正相关，而冠心病患者血清HDL-C和ApoAl水平明显降低。白血病患者由于血液内存在大量白细胞，裂解后血浆中出现大量核酸，血浆黏度也会升高。而血浆黏度升高可以引起全血黏度的升高，因为血浆不仅以其固有黏度影响全血黏度，更重要的是其蛋白的桥接作用造成红细胞的聚集。血液流变学血浆黏度测定现已广泛应用于临床[9，10]，特别是在代谢综合征高血脂、糖尿病、冠心病、动脉粥样硬化中起到重要的辅助诊断作用，同时对亚健康状态也有提示意义[11]。

表1 健康体检人群的冷冻混合血浆稳定性试验结果

表2 无偿献血者的报废滤白冷冻新鲜血浆稳定性试验结果

表3 纯水稳定性试验结果

图1 2016年3月份健康体检人群的混合冷冻血浆室内质控图(CV=3.017%)

图2 2016年3月份无偿献血者报废滤白冷冻新鲜血浆室内质控图(CV=2.435%)

图3 2016年3月份纯水室内质控图(CV=2.257%)

做好血浆黏度的室内质量控制是保证结果准确可靠，更好服务于临床和患者的重要前提。本科室使用北京赛科希德SA7000全自动血液流变仪测定血浆黏度，所采用的方法为毛细血管法，利用标准毛细管在相同条件下，液体黏度不同，流过一定体积的液体所需时间不同，黏度越大所需时间越长的原理，测量结果为同水的比黏度。目前血液流变学全血黏度已经有了商品的非牛顿质控物，卫生部临检中心及各省临检中心也有开展针对全血黏度的室间质评，而作为牛顿流体的血浆，商品血浆黏度质控物仍是空白。这一空白已引起了大家的关注，孙丽萍等[12]采用聚乙二醇600作为血浆黏度检测的质控品，李迎旭等[13]则采用了乙基淀粉。还有一部分实验室[14，15]采用移动值法对血浆黏度进行室内质控。使用冷冻血浆来开展室内质控，相较于各类化学试剂有便于获取、变废为宝、经济方便的优点，而移动均值法不能完成替代传统的质控样本，特别是对于一些没有配备LIS系统和标本量不大的基层医院，移动均值法有其固有的缺陷。

从以上实验数据分析可知，不论是健康体检者自制混合冷冻血浆还是临床上报废的滤白冷冻新鲜血浆均能满足了室内质量控制的要求，其CV值在5%以内，变异系数低，满足了室内质量控制的要求，前者在180d后稳定性良好，后者在60d后稳定性也是良好的，应用于每日的室内质控也获得良好的效果，此外使用纯水进行室内质控，稳性性和室内质控效果相较于前两种质控品更为显著。比较这三种室内质控的方法，各自均有优缺点，纯水每天新鲜配置，稳定性最好，在37℃其定值更是稳定在0.69左右，与文献相符[16]，室内质控效果最佳，但其不含各种血浆成分，虽然同为牛顿液体，与血浆的黏度特性还是有相当程度的差异，故而用于血浆黏度的室内质控并不合理。健康体检者自制混合冷冻血浆采自新鲜血液分装冷冻后配置而成，其定值结果在正常参考值范围内，这便于我们对正常人群进行室内质控（中值质控），但是该类标本需通过甄选，除了体检者需满足HBs Ag、HCV、HIV、RPR阴性，血清蛋白、肝功、血脂、血糖正常，血浆黏度在正常参考值范围内等指标要求，还需排除脂血、黄疸、溶血等异常性状标本，同时还需经56℃、30min灭活后方能放心使用，程序繁琐，不易坚持开展下去。临床上报废的冷冻新鲜血浆则无需经过以上繁琐步骤可直接使用，但不易长期获得，且经血液中心保存液稀释后，并冷冻处理后，其定值常常在正常参考值低限，更适用于低值质控而不适用于中值质控，此外，联合使用移动均值法，也是到血浆黏度的室内质控一种有益的补充。

综上为本科室对血浆黏度室内质控的尝试，我们将进一步观察其更长时长的稳定性及室内质控的效果，寻求稳定性好、操作简便的方法，建立适合本科室特点的血浆黏度室内质控体系。

[1]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版. 2006：239-241.

[2]洪流，林伟华，陈华英，等.纤溶系统标志物的变化在不同临床类型冠心病诊疗中的应用[J].实验与检验医学，2013，31(5)：428-430.

[3]王秋丰，谢文堂.尿酸、纤维蛋白原及尿微量白蛋白与冠心病关系的探讨[J].实验与检验医学，2008，26(2)：195、207.

[4]Culleton BF，Larson MG，Kannel WB，et al.Semm uric acid and risk for cardiovascular disease and death：the Fraingham Heart Study[J].Ann Intern Med，1999，131：7-13.

[5]刘继来，陈蓉艳，高芳琳.血浆纤维蛋白原、血脂指标与血浆黏度的相关性及回归分析[J].实验与检验医学，2015，33（3）：290-292.

[6]杜贵萍，邵燕丽，余俊.血清心脏型脂肪酸结合蛋白在急性心肌梗死发生早期的变化[J].实验与检验医学，2013，31(4)：320-321.

[7]邓荣春，王慧敏，周爱群.血清非高密度脂蛋白胆固醇水平对冠心病的临床诊断价值[J].实验与检验医学，2014，32(4)：398-400.

[8]邓荣春，桂晓美，王慧敏.冠心病患者血清同型半胱氨酸及血脂水平分析[J].实验与检验医学，2013，31(6)：546-548.

[9]席玉冰.血液流变学在心脑血管疾病方面的应用价值[J].实用医技杂志，2006，13(8)：1405-1406．

[10]宋敏，李泽佳，刘彦宏，等．血液流变学在椎动脉型颈椎病诊疗中的应用价值评价[J]．颈腰痛杂志，2013，34(2)：164-167.

[11]廖福龙，陈然，孙京昇，等．血液流变学实验室技术的国际指南与血液流变学研究新进展[J].首都医药，2010，17（6）：9-l1．

[12]孙丽萍，张惠风.一种血浆粘度质控物的应用[J].中国血液流变学杂志，2007，17(4)：652-679．

[13]李迎旭，桂骏，张哗，等.血浆粘度测定质控液的研究与应用[J].中国血液流变学杂志，1999，9(1)：53-54．

[14]刘津.应用浮动均值法作血液粘度室内质控[J].中国临床医药研究杂志，2004，125：13309-13310．

[15]卢敏等.患者数据移动均值法在血液流变学检测室内质控中的应用[J].实验与检验医学，2009，27(4)：430、433.

[16]向建敏.物理化学实验[M].武汉：化学工业出版社，2008：25-36.

Establishment and Analysis on IQC of plasma viscosity by frozen plasma

CHEN Rongyan，LIU Jilai，GAO Fanglin，LI Yangyu，LAI Wenlan.

Department of Clinical Laboratory，the People’s Hospital Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350004，China.

ObjectiveTo establish and analysis internal quality control(IQC)of plasma viscosity by using frozen plasma from the healthy people and blood donors.MethodsThe plasma which was collected from the healthy people was mixed and stored in cryopreservation(-20℃）and then was used as IQC.And meantime the clinically scrapped frozen plasma from blood donors also was detected as IQC.ResultsRespectively，the value ranges of IQC are 1.548±0.025(CV：1.622%)and 1.182±0.008(CV：0. 688%).And plasma is stable within 180 days.ConclusionTwo types of frozen plasma have good precision and stability，and it could be used for plasma viscosity internal quality control in clinical laboratory.

plasma viscosity；internal quality control；application evaluation

R446.11+1，R457.1+2

A

1674-1129(2016)06-0710-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.06.004

2016-06-13；

2016-11-11)

福建中医药大学校管课题，编号：XB2015002

陈蓉艳，女，1980年6月生，硕士，主治医师/助教，目前从事临床血液学专业。