黄芪四君子汤联合不同营养方式对肝硬化肝癌大鼠肝部分切除术后营养状态与免疫功能的影响

2016-12-23刘诗泆刘素兰尹秋林

中国老年学杂志 2016年23期

关键词：四君子汤黄芪肝硬化

刘诗泆刘素兰尹秋林

(江西卫生职业学院，江西南昌 330006)

黄芪四君子汤联合不同营养方式对肝硬化肝癌大鼠肝部分切除术后营养状态与免疫功能的影响

刘诗泆刘素兰尹秋林1

(江西卫生职业学院，江西南昌 330006)

目的探讨黄芪四君子汤联合不同营养方式对肝硬化肝癌大鼠肝部分切除术后营养状态与免疫功能的影响。方法将成功建立肝硬化肝癌大鼠模型并采用Higgins法成功行肝部分切除术的150只大鼠，按随机数字表分为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组，每组50例，Ⅰ组给予常规经口饮食处理，Ⅱ组给予黄芪四君子汤联合肠外营养，Ⅲ组给予黄芪四君子汤联合肠内营养，术前及术后7 d进行营养状态指标〔血红蛋白(Hb)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)〕、免疫功能指标(细胞免疫功能指标、体液免疫功能指标)、免疫细胞因子〔白细胞介素(IL)-2、IL-6、干扰素(INF)-γ〕检测，对三组检测结果进行比较。结果 Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组术后Hb、TC、TG、LDL均较术前明显降低，但Ⅱ组、Ⅲ组营养状态指标高于Ⅰ组，Ⅲ组营养状态指标高于Ⅱ组。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组术后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显低术前，CD8+明显高于术前，Ⅱ组、Ⅲ组术后细胞免疫功能指标明显优于Ⅰ组，Ⅲ组术后细胞免疫功能指标明显优于Ⅱ组。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组术后IgG、IgM、IgA 水平均明显低于术前，Ⅱ组、Ⅲ组术后体液免疫功能指标明显优于Ⅰ组，Ⅲ组术后体液免疫功能指标明显优于Ⅱ组。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组术后IL-2、INF-γ均较术前明显升高，Ⅱ组、Ⅲ组术后IL-2、INF-γ明显高于Ⅰ组，Ⅲ组术后IL-2、INF-γ明显高于Ⅱ组，Ⅰ组术后IL-6高于术前，Ⅱ组、Ⅲ组术后IL-6低于术前，Ⅲ组术后IL-6低于Ⅱ组。结论肝硬化肝癌大鼠肝部分切除术后应用黄芪四君子汤联合肠内营养既能改善术后的营养状况，又可提高机体的免疫功能。

肝硬化;肝癌切除术;黄芪四君子汤;免疫功能;营养状况

肝硬化、肝癌患者因肝代谢功能障碍，致使营养不良与免疫力低下发生率极高，而肝硬化与肝癌合并存在的患者尤为明显〔1〕。手术切除是治疗肝硬化后肝癌最有效的手段，但术后出现肝衰竭和肿瘤复发的概率较高，与机体存在营养不良及免疫功能低下相关〔2，3〕。围术期营养支持对改善营养不良具有积极意义，但营养支持对免疫功能影响的研究相对较少。四君子汤出自《太平惠民和剂局方》，是益气健脾的经典方剂，具有健脾和胃、益气养血之功效，能有效增强肝癌患者免疫功能、改善营养状态〔4〕。黄芪四君子汤是在四君子汤的基础上加入黄芪配伍而成，有助益气健脾之功，使提升正气的作用进一步加强，改善肝细胞代谢功能受损的作用优于四君子汤〔5〕。本研究探讨黄芪四君子汤联合不同营养方式对肝硬化肝癌大鼠肝部分切除术后营养状态与免疫功能的影响差异。

1 材料与方法

1.1 药品试剂、动物 150只Wistar大鼠(3～4个月龄、体质量230～250 g)，雌雄不限，南昌大学医学部实验动物中心提供(合格证：合格证号:021-9815)；黄芪四君子汤：黄芪30 g、党参15 g、白术15 g、茯苓15 g、炙甘草15 g，饮片均购自江西益丰大药房，均经鉴定为合格药材，按照常规方法煎煮、过滤、浓缩为200 ml。中长链脂肪乳(20%，卡路，广州侨光制药有限公司生产)，复方氨基酸注射液(安平，德国贝朗)，非蛋白质热量171.5 kCal·kg-1·d-1，氮1.22 g·kg-1·d-1，按热氮比140∶1配制营养液；四氯化碳(CCl4)(美国Sigma公司)；Walker-256 肿瘤细胞混悬液购自上海信裕生物技术有限公司。甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)试剂盒(上海科华东菱诊断用品有限公司)，血红蛋白(Hb)试剂盒(上海西唐生物科技有限公司)，淋巴细胞分离液(TBD生物技术发展中心)；日立7080全自动生化分析仪(日本日立公司)，流式细胞仪FACScan(BD公司)，AXSYM全自动免疫化学发光分析仪(美国雅培公司)。

1.2 方法

1.2.1 肝硬化肝癌大鼠模型的建立大鼠皮下注射60% CCl4，0.13 ml/100 g，1次/d，连续给药5 d，以5%乙醇作唯一饮用水，连续服用40 d，停药7 d，B超引导下向大鼠肝中叶注入Walker-256瘤细胞混悬液，筛选植瘤直径0.5～0.8 cm的肝硬化肝癌大鼠模型作为研究对象，颗粒饲料喂养，自由饮水取食，9 d后进行研究。

1.2.2 分组将造模成功的肝硬化肝癌大鼠按随机数字表分为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组，每组50例，按照Higgins 法切除带瘤的大鼠肝中叶，定期换药，Ⅰ组给予常规经口饮食处理，普通饲料喂养，自由饮水；Ⅱ组给予黄芪四君子汤联合肠外营养(PN)，术后黄芪四君子汤灌，5 ml/d，分2次灌胃，连续灌胃7 d，采用恒流微泵持续输注静脉营养液，连续给药7 d。Ⅲ组术后6 h给予营养乳剂与黄芪四君子汤灌胃，每日均为5 ml，分2次灌胃，连续灌胃7 d。Ⅱ组与Ⅲ组营养液的热量及含氮量相同。

1.3 观察指标术前及术后7 d禁食水10 h后取大鼠尾缘静脉血5 ml，高速离心取上清液，采用8120全自动生物化学分析仪检测TC、TG、LDL，采用氰化高铁法测定Hb，流式细胞术细胞计数仪测定CD3+、CD4+、CD8+，采用免疫散射比浊法测定IgG、IgM、IgA，采用ELISA法检测白细胞介素(IL)-2、IL-6、干扰素(INF)-γ。

1.4 统计学方法应用SPSS19.0软件进行单因素方差分析。

2 结果

2.1 三组大鼠手术前后营养指标比较 Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组术后Hb、TC、TG、LDL均较术前明显降低，但Ⅱ组、Ⅲ组上述指标高于Ⅰ组，Ⅲ组营养状态指标高于Ⅱ组。见表1。

2.2 三组大鼠手术前后免疫功能指标比较 Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组术后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显低术前，CD8+明显高于术前，Ⅱ组、Ⅲ组术后细胞免疫功能指标明显优于Ⅰ组，Ⅲ组术后细胞免疫功能指标明显优于Ⅱ组。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组术后IgG、IgM、IgA 水平均明显低于术前，Ⅱ组、Ⅲ组术后体液免疫功能指标明显优于Ⅰ组，Ⅲ组术后体液免疫功能指标明显优于Ⅱ组。见表2，表3。

组别Hb(g/L)术前术后TC(mmol/L)术前术后TG(mmol/L)术前术后LDL(mmol/L)术前术后Ⅰ组99.3±5.585.1±6.73.43±0.222.02±0.251.15±0.060.63±0.041.18±0.080.65±0.03Ⅱ组99.2±8.390.3±6.43.40±0.342.36±0.261.13±0.080.78±0.031.16±0.040.80±0.04Ⅲ组99.5±6.495.2±7.23.35±0.402.64±0.241.12±0.100.96±0.051.18±0.050.98±0.05F/P值0.402/>0.056.054/<0.010.315/>0.054.246/<0.010.417/>0.054.115/<0.010.422/>0.054.226/<0.01

组别CD3+(%)术前术后CD4+(%)术前术后CD8+(%)术前术后CD4+/CD8+术前术后Ⅰ组69.65±7.5460.45±5.5842.65±5.5036.30±3.4029.43±3.2136.45±3.301.45±0.201.00±0.06Ⅱ组69.42±6.6462.48±5.3642.54±4.5637.53±3.4629.32±2.4634.48±3.371.45±0.181.09±0.05Ⅲ组69.50±6.5964.54±5.2941.60±4.8239.54±3.5329.40±2.8632.54±3.321.42±0.221.22±0.08F/P值0.255/>0.054.042/<0.050.354/>0.053.961/<0.050.411/>0.053.866/<0.050.312/>0.053.916/<0.05

组别IgG术前术后IgM术前术后IgA术前术后Ⅰ组13.64±1.3510.32±1.201.78±0.151.30±0.102.67±0.142.03±0.16Ⅱ组13.56±1.2711.34±1.151.74±0.151.43±0.132.59±0.162.14±0.22Ⅲ组13.60±1.3312.36±1.081.75±0.161.55±0.202.62±0.162.25±0.30F/P值0.156/>0.054.421/<0.050.542/>0.053.618/<0.050.313/>0.053.412/<0.05

2.3 三组大鼠手术前后免疫细胞因子比较 Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组术后IL-2、INF-γ均较术前明显升高，Ⅱ组、Ⅲ组术后IL-2、INF-γ明显高于Ⅰ组，Ⅲ组术后IL-2、INF-γ明显高于Ⅱ组，Ⅰ组术后IL-6高于术前，Ⅱ组、Ⅲ组术后IL-6低于术前，Ⅲ组术后IL-6低于Ⅱ组。见表4。

组别IL-2术前术后INF-γ术前术后IL-6术前术后Ⅰ组13.1±1.124.5±1.227.8±2.181.8±4.521.8±1.728.4±1.4Ⅱ组13.2±0.931.4±1.328.2±2.0110.4±5.322.4±2.019.9±1.2Ⅲ组13.1±1.139.4±1.528.1±2.0139.5±6.222.1±1.816.6±1.3F/P值0.164/>0.054.413/<0.050.525/>0.053.682/<0.050.332/>0.053.423/<0.05

3 讨论

肝癌、肝硬化患者多合并营养不良与免疫功能低下，早期营养支持治疗能够有效改善患者的营养状况和免疫功能，其方式包括完全PN、肠内营养(EN)。四君子汤是益气健脾的经典方法，联合肠内营养乳剂可有助于改善肝癌合并肝硬化围手术期营养状态与免疫功能〔6〕，作用优于单纯肠内营养乳剂，对于四君子汤联合PN或EM何种效果更好，有待进一步研究。黄芪四君子汤是在四君子汤的基础上再配伍黄芪，宋雅芳等〔5〕研究显示，与四君子汤比较，黄芪四君子汤在促进线粒体氧化磷酸化过程中的能量转化作用更好，促使ATP合成更多，维持细胞代谢与能量代谢，起到更好的扶正补虚的效果。曾益宏等〔7〕研究表明，黄芪四君子汤改善脾主运化的功能优于四君子汤，其机制可能与其能升高血清胃泌素含量、促进胃肠道吸收有关。徐旭东等〔8〕研究显示，黄芪四君子汤联合早期EN能够改善食管癌术后的营养、免疫状态，促进患者康复。

T和B淋巴细胞是免疫系统的重要组成部分，二者相互作用功能调控机体免疫，T淋巴细胞在参与机体细胞免疫调节及免疫效应的过程中发挥了重要的作用，T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+是反映机体细胞免疫功能的常用指标，CD4+细胞能够有效地促进机体免疫系统起到抗肿瘤作用，CD8+发挥免疫抑制作用，CD4+/CD8+可作为术后免疫抑制程度的重要指标；B淋巴细胞主要参与体液免疫，IgA、IgM、IgG是反映机体体液免疫功能的常用指标。本文研究结果显示，肝硬化肝癌大鼠肝部分切除术后免疫功能明显下降，但黄芪四君子汤联合不同营养方式能够抑制免疫功能下降，其中黄芪四君子汤联合EN对免疫功能的改善效果更好。

肝硬化肝癌大鼠肝部分切除术后营养状态下降，黄芪四君子汤联合不同营养方式能够促进营养状况改善，以黄芪四君子汤联合EN的效果更好，可能与其能更好促进营养物质吸收有关。

免疫细胞因子是免疫调控的主要执行者，IL-2、INF-γ发挥促进免疫功能的作用，抑制肿瘤细胞生长；IL-6启动急性期炎性反应，同时部分抑制机体免疫功能。本文研究结果显示，肝硬化肝癌大鼠肝部分切除术后启动了免疫调控功能，出现急性期炎性反应，黄芪四君子汤联合不同营养方式能够促进免疫功能，减轻机体的免疫抑制状态，以黄芪四君子汤联合EN的效果更好。

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7 曾益宏，刘友章，徐升.益气健脾法对脾虚证模型大鼠血清胃泌素含量的影响〔J〕.广州中医药大学学报，2008;25(3):239-40.

8 徐旭东，陈刚，叶波，等.黄芪四君子汤联合早期肠内营养对食管癌术后恢复的影响〔J〕.浙江中西医结合杂志，2012;22(11):859-60.

〔2015-12-11修回〕

(编辑袁左鸣)

1 江西省人民医院

刘诗泆(1965-)，男，副教授，主要从事天然药物化学研究。