MIR-499在急性冠脉综合征患者血清中的表达及与QT离散度的相关性研究

吕晋琳吴新华尹雪艳李利华杨 瑛罗文娟张 雷

（1、大理大学，云南大理671000；2、大理大学附属医院，云南大理671000）

论著／冠心病

MIR-499在急性冠脉综合征患者血清中的表达及与QT离散度的相关性研究

吕晋琳1吴新华2尹雪艳1李利华1杨 瑛2罗文娟2张 雷2

（1、大理大学，云南大理671000；2、大理大学附属医院，云南大理671000）

目的 探讨急性冠脉综合征患者外周血微小RNA-499（miR-499）的表达及其与QT离散度(QTd)的关系。方法 2014年5月至2015年4月大理大学附属医院心血管内科收治的128例ACS患者血清并收集临床资料，以48例健康体检者为对照组。分析miR-499在ACS患者血清中的表达及其与QT离散度的关系。结果 ACS患者miR-499和QTd及校正的QTd（QTcd）值均高于正常对照组，并且miR-499表达的升高和QTd值呈正相关。结论 MiR-499表达在ACS患者血清中上调，并与QTd相关，其可能成为ACS新的潜在诊疗靶点并为预后评估提供重要的临床参考价值。

急性冠脉综合征；microRNA-499；QT离散度

动脉粥样硬化(atherosclerosis，As)引起的心脑血管疾病发病率渐呈上升趋势，已成为危害人类健康的主要杀手[1]。在动脉粥样硬化性疾病中，急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）是一组由急性心肌缺血引起的综合征，可能引起恶性心律失常甚至心脏停搏，是临床常见的急危重症[2]。QT离散度（QTd）是体表心电图不同导联间最长与最短QT间期的差值，反映了心室肌复极的不均一性和电不稳定性。研究发现QTd与冠状动脉粥样硬化密切相关，并在预测恶性室性心律失常及猝死中有重要参考价值[3]。MiRNAs是一类内源性、非编码小RNA序列，miRNA基因先在细胞核内转录出初始miRNA，再经Drosha-DGCR8复合物剪切为60-80碱基长度带有茎-环结构的miRNA，它们主要通过与蛋白编码基因外显子区或基因信使RNA（mRNA）的种子序列互补结合，致靶基因降解和/或翻译抑制[4]。近年来，随着分子生物学及高通量技术的发展，miRNA在As中的作用逐渐引起人们重视，并发现miR-499在急性心肌梗死患者血浆中表达水平明显升高[5]。本文旨在进一步研究ACS患者血清miR-499表达水平，探讨其与QTd的相互关系，以期为ACS诊疗提供新的靶点。

1 资料与方法

1.1 研究对象

2014年5月至2015年4月大理大学附属医院心血管内科收治的128例ACS患者，其中急性心肌梗死(AMI)37例，不稳定型心绞痛(UA)91例，所有患者均行冠状动脉造影检查，以48例健康体检者为对照组。排除其他心脏疾病，合并严重的肝肾功能不全，其他慢性炎症，卒中，恶性肿瘤，风湿性疾病，近期应用抑炎症药物，所有合并心房颤动、束支传导阻滞、严重电解质紊乱、应用影响心肌复极的药物以及先天性长QT综合征的患者。

1.2 研究方法

1.2.1 血样采集和qRT-PCR ACS患者在发病24h内从前臂静脉采取空腹血标本，对照组于空腹体检时采血3ml，肝素钠抗凝。用EastepTM试剂盒提取血清总RNA。按Hairpin-itTMmiRNA qRT-PCR试剂盒说明书步骤进行qRT-PCR反应。ABI7500实时定量PCR仪测定并用2-ΔΔCt计算其相对表达量。

1.2.2 QTd测算 GEMAC1200心电图仪记录患者入院1h内的12导联心电图供分析。由同一人测量同期同步12导联心电图QT间期，以各导联QRS波离开等电位线为Q波起点，T波终点判断：①T波与等电线交点；②T波降支切迹与等电线的交点；③有U波存在时取T波与U波交界的最低点。除外T波、U波分界不清的导联，各导联连续测量3个心动周期取其均值，计算公式：QTd=QT（max）-QT（min），为校正心率影响，用Bazett's公式：QTc= QT/(R-R）1/2计算，QTcd=QTc（max）-QTc（min）[6]。

1.3 统计学处理

用SPSS17.0软件进行统计学分析，计量资料均以均数±标准差（±s）表示，均数比较用t检验或单因素方差分析，用线性相关分析QTd与miR-499的关系。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床特征

本研究共纳入37例AMI患者，其中男性21例，女性16例。91例UA患者，其中男性62例，女性29例。48例健康体检者作为对照组，其中男性29例，女性19例。见表1，各组患者性别、年龄及甘油三酯（TG）水平无统计学差异(P>0.05)。与对照组相比，AMI组血糖、收缩压、舒张压、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（HDL-C）及低密度脂蛋白（LDL-C），UA组收缩压、HDL-C及LDL-C水平差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 外周血miR-499的表达水平分析

如图1所示，AMI及UA患者外周血miR-499水平均较健康对照组(CTL)升高（见图1）。

图1

2.3 miR-499与QTd的相关分析

与对照组相比，ACS组QTd及QTcd值均明显高于升高（详见表2）。ACS患者MiR-499与QTd值呈显著正相关（r=0.321，P=0.0046）。

表1 临床资料分析（±s）

表1 临床资料分析（±s）

注：与对照组相比*P＜0.05，#P＜0.01。

组别 年龄（岁） 空腹血糖 收缩压 舒张压TCTGHDL-CLDL-C（mmol/L） （mm/Hg） （mm/Hg） （mmol/L） （mmol/L） （mmol/L） （mmol/L）研究组AMI69.2±7.97.3±1.4#152±18#93±8*4.72±0.99*1.69±0.721.11±0.27*3.69±0.96*UA67.4±5.84.7±1.1131±13*87±94.06±1.111.80±1.191.32±0.36*2.77±1.1*对照组68.1±5.14.6±0.4122±1478±103.72±0.891.74±0.781.83±0.412.07±0.81

表2 QTd值比较（±s）

表2 QTd值比较（±s）

注：与对照组相比*P＜0.05。

组别ACS组CTL组例数（n）128 48 QTd 58.67±14.31*37.44±9.42 QTcd 61.37±15.17*41.09±8.73

3 讨论

ACS是由于动脉粥样硬化斑块破裂或糜烂，伴有不同程度血栓形成、血管痉挛及栓塞引起心肌急性缺血所导致的一组综合征。诸多研究证明缺血、缺氧可引起心肌细胞损伤，导致细胞膜去极化及膜泵能量缺乏，使局部复极不均一性加重，为折返创造了条件，心肌细胞电活动紊乱，容易诱发恶性心律失常，QTd是心肌最早复极与最晚复极的时间差值，是一种简便、无创地反映心肌复极不均一性和电活动不稳定性的方法。近年的研究发现QTd延长的程度与心血管事件的发生及预后相关[7]。目前关于QTd正常参考值尚无统一标准，一般认为QTd参考范围为30-50ms[8]。本文中ACS患者QTd及QTcd较对照组明显延长，并且与miR-499呈正相关。近年来研究发现，miRNAs在调控心血管系统发育和功能上起重要作用，As患者血管中有44中miRNAs上调57种miRNAs下调[9]，并且miRNAs水平的改变与心律失常存在密切关系。研究发现miR-499可能参与了动脉粥样硬化的进程。MiR-499是心肌特异的微小RNA，参与了心肌肥厚、重构等进程的调节。Corsten等研究发现AMI患者血浆miR-499水平超过不典型胸痛患者约100倍[10]。对小鼠冠状动脉结扎模拟AMI，结扎后4h和24h miR-499分别增高到103倍和95倍[11]。

本研究表明，与对照组相比miR-499在ACS患者血清中表达增加超过30倍，以其对心肌缺血损伤反应的敏感性及特异性可能成为利于早期及时诊断ACS的生物学标志物及新的治疗靶点。同时miR-499与QTd呈正相关，而QTd增加是患者发生恶性心律失常事件的一个危险信号。我们认为可将二者联合起来，作为一种对ACS患者快捷、安全、简单、有效的病情及近期预后评估方法。因此，血浆miR-499水平及QTd对临床医生识别和筛选高危患者，进行积极的治疗和监护，具有重要的临床实用价值。

［1］ Mathers CD,Loncar D.Projections of global mortality and burden of disease from2002 to2030.PLoSMed.2006.3(11):e442.

［2］ Van Camp G,Pasquet A,Sinnaeve P,et al.Summary 2015 ESC guidelines [J]. Acta Cardiol, 2016,71 (1):7-13. DOI: 10.2143/AC.71.1.3132092.

［3］ Gleser MG,Kiseleva AE,Astashkin EI.Effect of L-Carnitine on QT Dispersion in PatientsWith AcuteCoronary Syndrome[J]. Kardiologiia,2015,55(3):4-9.

［4］ MianoJM,LongX.The short and longofnoncodingsequences in the control of vascular cell phenotypes.Cell Mol Life Sci,2015,72: 3457-88.

［5］ Chen X,Zhang L,Su T,et al.Kinetics of plasma microRNA-499 expression in acute myocardial infarction[J].J Thorac Dis,2015,7 (5):890-896.

［6］ Jordaens LJ.The clinical value of QT dispersion:newperspectives on the assessment of cardiac repolarization more than 75 years after Bazett's formula[J].Europace,1999,1(2):73-76.

［7］ Ornek E,Duran M,Ornek D,et al.The effect ofthrombolytic therapy on QT dispersion in acute myocardial infarction and its role in the prediction ofreperfusion arrhythmias[J].Niger J Clin Pract,2014,17 (2):183-187.

［8］ Lee KW,Kligfield P,Okin PM,et al.Determinants of precordial QT dispersion in normal subjects[J].J Electrocardiol,1998,31 Suppl: 128-133.

［9］ Wang R,Dong LD,Meng XB,et al.Unique MicroRNA signatures associated with early coronary atherosclerotic plaques.Biochem Biophys Res Commun,2015,464:574-9.

［10］ CorstenMF,DennertR,JochemsS,etal.CirculatingMicroRNA-208b and MicroRNA-499 reflect myocardial damage in cardiovascular disease[J].CircCardiovascGenet,2010,3(6):499-506.

［11］ ZhangLL,Liu JJ,LiuF,etal.MiR-499 induces cardiac differentiation of rat mesenchymal stem cells through wnt/β-catenin signaling pathway[J].Biochem BiophysResCommun,2012,420(4):875-881.

Expression of microRNA-499 in serum of patients with acute coronary syndrome and its correlation with QT dispersion

LYU Jin-lin1,WU Xin-hua2,YIN Xue-yan1,LI Li-hua1,YANG Ying2,LUO Wen-juan2,ZHANG Lei2
(1.Dali University,Dali 671000,China; 2.The Affiliated Hospital of Dali University,Dali 671000,China)

Objective To investigate the expression of microRNA-499(miR-499)in peripheral blood in patients with acute coronary syndrome (ACS)and its correlation with QT dispersion.Methods A total of 128 patients with ACS who were admitted to Department of Cardiology in The Affiliated Hospital of Dali University from May 2014 to April 2015 were enrolled,and serum samples and clinical data were collected.A total of 48 healthy persons who underwent physical examination were enrolled as control group.The expression of miR-499 in serum and its correlation with QT dispersion were analyzed.Results The ACS group had significantly higher serum miR-499 level,QT dispersion,and corrected QT dispersion than the control group,and the expression of miR-499 was positively correlated with QT dispersion.Conclusion The expression of miR-499 is upregulated in serum of patients with ACS and is positively correlated with QT dispersion.Therefore,it may become a new potential target for the diagnosis and treatment of ACS and provide an important reference for prognostic evaluation.

Acute coronary syndrome;microRNA-499;QT dispersion

云南省应用基础研究计划项目(编号：2012FD037)

吕晋琳，1982年生，女，云南大理人，博士研究生在读，主治医师，主要研究方向为冠心病基础与临床方面。