俄色总黄酮缓释栓剂的制备工艺研究

徐作军，毛 羽，雷 敏，杨 昳，林灵敏，杨邦祝，杨学军

(1.西南民族大学药学院，四川 成都 610041；2.炉霍雪域俄色有限责任公司，四川 炉霍 624000)

俄色总黄酮缓释栓剂的制备工艺研究

徐作军1，毛 羽1，雷 敏2，杨 昳1，林灵敏1，杨邦祝1，杨学军1

(1.西南民族大学药学院，四川 成都 610041；2.炉霍雪域俄色有限责任公司，四川 炉霍 624000)

目的进行藏药新药俄色总黄酮(ESE)降糖缓释栓剂的制备工艺研究.方法通过单因素实验和多因素实验以混合PEG为基质，分别以HPMC、CMC-Na和硬脂酸为缓释材料，采用熔融法制备含不同量缓释材料的ESE缓释栓剂，考察体外累计释放度和缓释材料含量之间的关系，优化ESE缓释栓剂的最佳处方和制备工艺.结果ESE缓释栓剂的最优处方组成为:ESE 200 g；硬脂酸400 g，PEG400 1400 g，PEG4000 1400 g.ESE缓释栓剂在12 h内缓慢释放，且释药完全(＞90%).结论ESE缓释栓剂处方设计合理，制备工艺可行.

俄色；总黄酮；缓释；栓剂

俄色树是产于青藏高原海拔3000ˉ3800 m之间的蔷薇科苹果属植物变叶海棠Malus toringoides (Rehd.)Hughes.ESE为俄色叶总黄酮提取物，导师课题组2005年首次研究发现ESE的药用和经济价值.并系统进行了以ESE为主要原料的食品、保健食品、药品等相关研究开发工作[1-3].研究表明，ESE具有降血糖、降血脂、降血压、抗糖尿病并发症等多种生理活性及药理作用，对人类的三高疾病的治疗、辅助治疗及预防有重要意义.并在研究中发现，ESE会在胃肠道内被酸解和酶解，导致口服生物利用度降低.因此，为避免ESE在胃肠道中被酸解和酶解并避免肝脏的首过效应，提高ESE的生物利用度，故将其制成缓释肛门栓剂[5-10].

本实验采用单因素和多因素试验考察ESE缓释栓剂的制备过程中各因素对ESE缓释栓剂体外累计释放度的影响，优化其处方及制备工艺参数，制备藏药新药俄色总黄酮(ESE)降糖缓释栓剂.

1 仪器与材料

722 型分光光度计(上海第三分析仪器厂)；ZF—I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)；DZF-6050型真空干燥器(上海-恒科技有限公司). ESE(自制)，PEG400(天津博迪化工股份有限公司)；PEG600(天津博迪化工股份有限公司)；PEG4000(成都市联合化工试剂研究所)；PEG6000(成都市联合化工试剂研究所)；硬脂酸(成都市科龙化工试剂厂)，HPMC(四川瀚华药用辅料有限公司)；HPMC试剂为化学纯，其他试剂均为分析纯.

2 实验方法与结果

2.1 ESE缓释栓剂制备

按《中华人民共和国药典》2015版四部制剂通则0107“栓剂”中的有关规定[4]，供制备栓剂用的固体药物，应全部通过六号筛(100目).将原料辅料先于50℃干燥两小时，粉碎后过100目筛备用.按处方量取基质，于60℃水浴加热熔融后，加入处方量的辅料，待辅料熔融后，加入处方量ESE总黄酮药粉，搅拌混合均匀.搅拌混合均匀，注模成型后得栓剂.

2.2 含量测定方法的建立

2.2.1 供试品溶液的制备

取ESE缓释栓剂3粒，在研钵中研碎，称取1 g，置25 mL锥形瓶中，用30 mL甲醇溶解，超声20 min，放冷，过滤，滤液置于25 mL容量瓶中定容，精密量取滤液10 mL，减压旋干，残渣用甲醇超声溶解并定容于10 mL容量瓶中，过滤，滤液作为供试品溶液.

2.2.2 对照品溶液的制备

精密称取ESE对照品0.00460 g，置10 mL的容量瓶中，加95%乙醇溶解并稀释至刻度，得0.460 mg/mL ESE对照品溶液.

2.2.3 阴性样品溶液的制备

按处方比例，去除药品只加基质与辅料制备空白栓剂.参照2.2.1方法制备溶液，作为阴性样品溶液.

2.2.4 ESE含量测定

选用ESE为对照品，利用黄酮与铝盐的显色反应，按《中华人民共和国药典》2015版四部通则0401“紫外-可见分光光度法”中比色法对ESE进行含量测定，既是测定其吸光度，并将测定结果用空白实验校正，按标准曲线回归方程计算ESE的含量.

2.2.5 标准曲线的制备

精密吸取0.2 mL ESE溶液于具塞试管中，用95 %乙醇加至4 mL，再加入5%NaNO2溶液0.5 mL，摇匀；6 min后加入10%Al(NO)3溶液0.5 mL，摇匀；6 min后加入4%NaOH溶液4 mL，摇匀并静置10 min，随行试剂作为空白.

精密量取0.5 mL，1 mL，1.5 mL，2 mL，2.5 mL ESE对照品溶液于具塞试管中，照上法显色后，随行试剂为空白，0.5 h内于468 nm测定吸光度，以ESE含量(mg)为横坐标，吸收值A为纵坐标，绘制标准曲线，得ESE含量与吸光度之间的关系为:A＝4.2043＋0.0031，R2＝0.9997.表明ESE含量在0.023 mg-0.489 mg范围内与吸光度A有良好的线性关系.

2.3 释放度的测定方法

按《中华人民共和国药典》2015版四部通则0931“释放度测定法”第一法转篮法[4]，以脱气的新鲜纯化水900 mL为溶出介质，温度(37士0.5)℃，转速100 r/min，经0.5、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24 h，取样10 mL，0.8 μm微孔滤膜过滤，并即时补充新鲜的同温度的介质10 mL，减压挥干溶剂，残渣用甲醇超声溶解至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀.精密吸取供试品液适量，按《中华人民共和国药典》2015版四部通则0401“紫外-可见分光光度法”中比色法[4]对ESE进行含量测定，既测定其吸光度，代入标准曲线求含量，计算不同时间的累积释药百分率.

2.4 处方筛选

2.4.1 基质的初步筛选

取适量各型号的PEG，按比例混合，在65℃下熔融，注入模具中，冷却后，得空白基质栓.按《中华人民共和国药典》2015版四部通则0612“熔点测定法”第二法[4]测定不易粉碎的固体药品提供的方法，测定混合PEG各比例的熔点，见表1.

表1 各比例混合PEG的熔点测定Table 1 Melting point determination of mixed PEG in various proportions

查阅文献[11-16]，PEG的混合比例多数为上述几组，通过测其熔点，经比较，PEG600:PEG6000各比例所测熔点高，为了避免体温下不融化或不软化，故选择PEG400:PEG4000这几组进行下一步实验.

2.4.2 缓释辅料的筛选

1)HPMC对其释放度的影响

昌乐并不出产黄金，却在这十几年里，形成了一条集蓝宝石开采、黄金珠宝首饰加工、宝石镶嵌、展览展示、批发零售到休闲旅游购物的各环节功能较完备的产业链条。在昌乐黄金产业发展的历史长河中，有这样一家企业，有这样一位人物起到了至关重要的作用。

羟丙基甲基纤维素(HPMC)是一种水溶性凝胶材料，缓释能力显著.本文针对其两种型号及用量对药物释放的影响进行考察.选用二种不同粘度规格的HPMC，粘度分别为K4m，K15m.取适量水溶性基质PEG400:PEG4000＝1:2，加入藏药新药俄色(ESE)总黄酮药粉及不同型号的HPMC(K15m和K4m)及其不同用量的HPMC(1.5%、9%、15%)，按照其制备工艺分别制备藏药新药俄色总黄酮缓释栓剂.按2.3项下释放度的测定方法，计算出累积释放度，其累积释放度结果见图1、图2.

图1 PEG基质＋HPMC(K4m)累积释放度曲线Fig.1 Cumulative release curve of PEG matrix＋HPMC(K4m)

图2 PEG基质＋HPMC(K15m)累积释放度曲线Fig.2 Cumulative release curve of PEG matrix＋HPMC(K15m)

结果表明:随着HPMC用量的增加，释药有缓慢减慢，但是基本上2 h以后释放度基本无变化.所以当基质为PEG时HPMC的缓释效果不明显.

2)CMC-Na对其释放度的影响

羧甲基纤维素钠(CMC-Na)是一种水溶性凝胶材料，具有增稠、乳化等作用.取适量水溶性基质PEG400:PEG4000＝1:2，加入藏药新药俄色(ESE)总黄酮药粉及不同用量的CMC-NA(1.5%、9%、 15%)，按照其制备工艺分别制备藏药新药俄色总黄酮缓释栓剂.按2.3项下释放度的测定方法，计算出累积释放度，其累积释放度结果见图3.

图3 PEG基质-CMC-Na累积释放度曲线Fig.3 Cumulative release curve of PEG matrix-CMC-Na

结果表明:当基质为PEG时，随着CMC-NA的含量增加，释药速度稍有减缓，且6 h之内药物释放基本完全，缓释效果不明显.

3)硬脂酸对其释放度的影响

取适量水溶性基质PEG400:PEG4000＝1:2，加入藏药新药俄色(ESE)总黄酮药粉及不同含量的硬脂酸(1.5%、9%、15%)，按照其制备工艺分别制备藏药新药俄色总黄酮缓释栓剂.按2.3项下释放度的测定方法，计算出累积释放度，其累积释放度结果见图4.

图4 PEG基质-硬脂酸累积释放度曲线Fig.4 Cumulative release curve of PEG matrix and stearic acid

2.4.3 ESE缓释栓剂的处方优化

2.4.3.1 检测方法

以对药物释放度的综合评分为评价指标，选择最佳处方，主要考察三个时间点药物的累积释放度:1 h的累计释放度:以30%为标准；4 h的累计释放度:以60%为标准；12 h的累计释放度:以95%为标准.

采用综合评分T＝｜T1-30｜＋｜T4-60｜＋｜T12-95｜，T值越小，表明与所选用的标准趋势接近.

2.4.3.2 试验方法

依据单因素筛选结果，将PEG400:PEG4000的比例、硬脂酸的用量进行实验.见表2.通过药物溶出释放测定不同时间点的释放度，释放结果图5、图6、图7.

表2 PEG比例与硬脂酸用量的实验方案Table 2 Experimental program of PEG ratios and stearic acid contents

图5 PEG比例为1:2时硬脂酸不同用量的累积释放度曲线Fig.5 Cumulative release curve of different dosage of stearic acid on PEG ratio of 1:2

图6 PEG比例为1:1时硬脂酸不同用量的累积释放度曲线Fig.6 Cumulative release curve of different dosage of stearic acid at PEG ratio of 1:1

图7 PEG比例为2:1时硬脂酸不同用量的累积释放度曲线Fig.7 Cumulative release curve of different dosage of stearic acid at PEG ratio of 2:1

结果表明:

1)当PEG400:PEG4000＝1:2时，虽然随着硬脂酸的含量增大，释药变缓，但是基本上10 h以内就释放完全了.

2)当PEG400:PEG4000＝1:1时，硬脂酸含量为15%时，释药缓慢，大于12 h，缓释效果明显.

3)当PEG400:PEG4000＝2:1时，硬脂酸含量较小时，释药较迅速，缓释效果不明显，当硬脂酸含量为15%时，释放时间明大于12 h，缓释效果明显.

综上所述，故选取组6、组9重复实验，同时制备了不加硬脂酸只有基质和药粉的组6和组9做对照，进行释放度测定，结果见图8、图9.

图8 PEG比例为1:1硬脂酸含量为15%时栓剂的释放曲线Fig.8 Release curve of suppository with stearic acid content of 15%at PEG ratio of 1:1

图9 PEG比例为2:1硬脂酸含量为15%时栓剂的释放曲线Fig.9 Release curve of suppository with stearic acid content of 15%at PEG ratio of 2:1

由上图可知，加了缓释材料的组6释放缓慢，并且浓度平稳；加了缓释材料的组9释放缓慢但其浓度不平稳.所以，选择PEG400:PEG4000比例为1:1，硬脂酸含量为15%.

2.5 ESE缓释栓剂的最佳处方及制备工艺

综合单因素考察和多因素实验的结果，确定ESE缓释栓剂的最佳处方和制备工艺如下.处方规格:每粒2 g.

制备工艺:将原料辅料先于50℃干燥两小时，粉碎后过100目筛备用.取处方量PEG400和PEG4000，于60℃水浴加热熔融后，加入适量15%硬脂酸，待硬脂酸熔融后，加入ESE总黄酮药粉，搅拌混合均匀，注模成型后得栓剂.

2.6 验证实验

为保证制剂处方及工艺的可行性，对优选的最佳处方及最佳制备工艺制备3批样品，通过对三批样品释放度的考察来进行最佳处方和制备工艺验证.验证结果见表3.

表3 处方及制备工艺验证结果Table 3 Validation of formulation and preparation process

结果表明:各批样品累积释放度变化不大，在各溶出时间点的累积释放度的RSD值均小于5%，所以，该最佳处方及最佳制备工艺较为科学、可行.

3 结论

根据辅料筛选实验结果，当PEG400:PEG4000＝1:1，硬脂酸含量15%时药物的累计释放度符合要求，故选取PEG400:PEG4000＝1:1，硬脂酸含量15 %为ESE缓释栓剂基质的最佳处方.因此，确定ESE缓释栓剂的最佳处方为:ESE 200 g，硬脂酸400 g，PEG 1400 g，共1000粒.规格:每粒2 g.总黄酮含量为200 mg/粒.ESE缓释栓剂的最佳制备工艺为:将原料辅料先于50℃干燥两小时，粉碎后过100目筛备用.取处方量PEG400和PEG4000，于60℃水浴加热熔融后，加入适量15%硬脂酸，待硬脂酸熔融后，加入ESE总黄酮药粉，搅拌混合均匀，注模成型后得栓剂.三批ESE缓释栓剂处方工艺验证实验在各溶出时间点的累积释放度的RSD值均小于5%，证明此栓剂处方设计合理，制备工艺可行.

[1]毛羽，冯豫川，吴永康，等.苹果属花揪苹果组植物的新用途:中国，101411760A[P].2009-4-22.

[2]毛羽，冯豫川，吴永康，等.苹果属花揪苹果组植物的新用途:中国，101411761B[P].2011-11-09.

[3]毛羽，冯豫川，吴永康，等.一种保健茶及其制备方法:中国，101411372B[P].2012-5-23.

[4]国家药典委员会.中国药典(四部)[S].北京:中国标准出版社，2015.

[5]谢斌，丁玉峰，贺国芳.右旋布洛芬缓释栓的制备工艺及其体外释放特性研究[J].医药导报，2008，27(5):522-525.

[6]丁劲松，闫军，李焕德.生物粘附性达那唑缓释栓剂的处方筛选与体外释放度考察[J].中国药房，2003，14(5):265-267.

[7]VAFAEI SEYED YASER，DINARVAND RASSOUL，et al.Controlledrelease drug delivery system based on fluocinolone acetonide–cyclodextrin inclusion complex incorporated in multivesicular liposomes[J]. Pharmaceutical Development＆Technology，2014，20(7):1-7.

[8]张翠欣，王宪英，刘保良，等.奥硝唑生物粘附性缓释栓的制备及质量控制[J].制剂技术，2003，12(6):48-49.

[9]POLICIANOVA OLIVIA，BRUS JIRI，et al.In vitro dissolution study of acetylsalicylic acid solid dispersions.Tunable drug release allowed by the choice of polymer matrix[J].Pharmaceutical Development＆Technology，2015，20(8):935-940.

[10]龙利红，黄群，侯淑贤，等.黄体酮缓释栓的制备及药动学[J].中国医院药学杂志，2016，26(2):156-160.

[11]李喜香，刘效栓，包强，肖正国.新型栓剂制备工艺及其药动学特征研究进展[J].中国药事，2013，27(7):740-744.

[12]吴德敏.氨基葡萄糖普通栓剂和中空栓剂的制备与质量标准研究[D].合肥:安徽医科大学，2013.

[13]刘磊，屈云云.中药栓剂的概况及应用进展[J].黑龙江医药，2010，23(1):98-100.

[14]高捷.蛇床子素水凝胶栓的研制[D].杭州:浙江工业大学，2011.

[15]张周菊，刘文志.中药复方前列康栓不同基质配方的比较研究[J].湖北中医药大学学报，2012，14(2):37-39.

[16]程运扬.直肠给药制剂的应用进展[J].中国医院药学志，2013，33(23):1969-1971.

(责任编辑:李建忠，付强，张阳，罗敏；英文编辑:周序林，郑玉才)

Preparation of ESE sustained-release suppository

XU Zuo-jun1，MAO Yu1，LEI Min2，YANG Yi1，LIN Ling-min1，YANG Bang-zhu1，YANG Xue-jun1
(1.School of Pharmacy，Southwest University for Nationalities，Chengdu 610041，P.R.C.；2.Lu-huo Snow-world ESE Limited Liability Company，Lu-huo 624000，P.R.C.)

Objective To study the preparation of new Tibetan drugs named ESE anti-diabetic sustained release suppository.Methods In order to mix PEG as matrix，HPMC，CMC-Na and stearic acid as the controlled release materials，melt method was used to prepare ESE sustained-release suppository containing different amounts of sustained material by one-factor experimental design and multi-factors experimental design.The relationship between in vitro cumulative release and sustained release material content was studied.Prescription and preparation of ESE anti-diabetic sustained release suppositories were optimized.Results The optimized prescription of ESE anti-diabetic sustained release suppositories is as follows:ESE 200 g；stearic acid 400 g；PEG400 1400 g，PEG4000 1400 g.ESE anti-diabetic sustained release suppositories can release more than 90%in 12 h.Conclusion The prescription of ESE anti-diabetic sustained release suppositories is reasonable，and the preparation is feasible.

ESE；total falconoid；sustained release；suppository

R283；R29

A

2095-4271(2016)05-0496-07

10.11920/xnmdzk.2016.05.005

2016-06-22

毛羽(1961—)，男，汉族，四川人，副教授，博士，硕士生导师，研究方向:中药及民族药新药制剂研发.E-mail:yumao192000＠126.com

四川省农业科技成果转化资金项目(14NZ0015)