通脉颗粒水提及制粒工艺优化Δ

尤文质，陈雪梅，苏娟娟，彭连共，管昌益（.厦门市中医院药学部，福建厦门 36009；.厦门市中医院心血管病科，福建厦门 36009）

通脉颗粒水提及制粒工艺优化Δ

尤文质1＊，陈雪梅1#，苏娟娟1，彭连共1，管昌益（21.厦门市中医院药学部，福建厦门 361009；2.厦门市中医院心血管病科，福建厦门 361009）

目的：优化通脉颗粒水提及制粒工艺。方法：以浸膏得率和三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1的总皂苷量为评价指标，采用L9（34）正交试验法对通脉颗粒制备过程中的水提取工艺条件进行优化与验证；采用单因素分析对制粒工艺中的除杂、浓缩、干燥、制粒工艺进行优化与验证。结果：该颗粒剂水提取最佳工艺条件为8倍水，浸泡0.5 h，煎煮2次，每次煎煮1.0 h；验证试验中，浸膏得率为（28.38±0.461）%（RSD＝1.63%，n＝3），总皂苷含量为（5.029±0.060）mg/g（RSD＝1.20%，n＝3）。优化的制粒工艺为浸膏经翅片式过滤除杂，于真空度0.08 MPa、温度60℃下浓缩，按药粉-辅料（麦芽糊精）（3∶1，质量比）加入辅料，85～90℃干燥；采用干法制粒，稀释剂（麦芽糊精）的加入量为3%。在此条件下制备的样品的总皂苷含量为（5.211± 0.207）mg/g（RSD＝3.96%，n＝3）。结论：该工艺合理可行、稳定可控，适用于通脉颗粒的制备。

通脉颗粒；水提工艺；制粒工艺；正交试验；喷雾干燥

动脉粥样硬化是心、脑、肾疾病，以及高血压、糖尿病和周围血管疾病的共同病理基础，对健康危害极大，为老年人主要病死原因之一。通脉颗粒是厦门市中医院主任医师管昌益从中医“毒瘀理论”出发，结合西医“动脉粥样硬化炎症学说”，总结多年防治动脉粥样硬化的临床经验组方而成，主要由红参、黄芪、半枝莲、白蔹、三七、郁金、炙甘草等14味中药材组成。全方以益气解毒、化瘀通脉为法，临床用于预防和治疗动脉粥样硬化。经过多年的临床观察，此方在预防及治疗动脉粥样硬化方面取得了良好的效果[1-2]。将其制成颗粒剂既可保留煎剂吸收快、显效迅速等特点，又可有效减小制剂体积，方便患者服用。因此，本试验优化了通脉颗粒水提及制粒工艺，为保证制剂的质量及疗效提供依据。

1 材料

1.1 仪器

1260高效液相色谱（HPLC）仪，包括G1311C四元泵、G1329B真空脱气器、G1315D二极管阵列检测器、ChemStation B.04.02化学工作站（美国Agilent公司）；KQ-250B超声清洗机（昆山超声仪器有限公司）；EL2401电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2 药材与试剂

红参、黄芪、半枝莲、白蔹、三七、郁金、炙甘草等中药饮片，均购自康美药业股份有限公司，经厦门市中医院中药库副主任药师彭连共鉴定为正品，并符合2015年版《中国药典》（一部）各药材项下相关规定。人参皂苷Rb1对照品（批号：110704-201414，纯度：93.7%）、人参皂苷Rg1对照品（批号：110703-201128，纯度：93.4%）、人参皂苷Re对照品（批号：110754-201324，纯度：92.7%）、三七皂苷R1对照品（批号：110745-200617，纯度：100%）均购自中国食品药品检定研究院；乙腈、甲醇为色谱纯；水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 水提工艺优化[3-5]

2.1.1 色谱条件[6]色谱柱：Amethyst-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0～25 min，18%A；25～35 min，18%～19%A；35～55 min，19%～29% A；55～75 min，29%A；75～95 min，29%～40%A；95～100 min，40%～18%A）；检测波长：203 nm；进样量：10 μl；柱温：30℃。取“2.1.2”～“2.1.4”项下溶液进样测定，结果理论板数以人参皂苷Rg1峰计算不低于5 000，分离度均大于1.5。色谱图见图1。

2.1.2 混合对照品溶液的制备 精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品适量，加入甲醇制成每1 ml含三七皂苷R10.03 mg、人参皂苷Rg10.25 mg、人参皂苷Re 0.05 mg、人参皂苷Rb10.15 mg的混合对照品溶液，摇匀，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 取“2.1.6”项下浸膏适量，研细，精密称取约1.2 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定质量，超声（功率：250 W，频率：50 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4 阴性对照品溶液的制备 按处方组成比例，称取除红参、三七外的其余药味，按制备工艺要求，制成不含红参、三七的阴性通脉颗粒。按“2.1.3”项下供试品溶液的方法制备，即得。

2.1.5 专属性及方法学考察结果 按照2015年版《中国药典》（四部）相关规定对专属性和方法学进行考察。结果，人参皂苷Rg1的回归方程为y＝186.224 9x+1.264 9（r＝0.999 6），线性范围为0.487 86～4.878 6 μg；精密度试验的RSD＝1.47%（n＝6）、稳定性试验的RSD＝0.56%（n＝6）、重复性试验的RSD＝0.98%（n＝6）；加样回收率范围为93.40%～97.15%（RSD＝1.96，n＝6）。

图1 高效液相色谱图A.混合对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性对照品溶液；1.三七皂苷R1；2.人参皂苷Rg1；3.人参皂苷Re；4.人参皂苷Rb1Fig 1 HPLC chromatogramsA.mixed substance control solution；B.test sample solution；C.negative control solution；1.notoginsenoside R1；2.ginsenoside Rg1；3.ginsenoside Re；4.ginsenoside Rb1

2.1.6 浸膏制备 按处方比例称取红参、黄芪、三七、郁金、炙甘草等14味中药材共9份，分别按照表2的正交试验设计进行提取。取滤液滤过、浓缩、放至室温，定容至1 000 ml量瓶（相当于原药材325 g），混匀。量取300 ml提取液，于100℃浓缩、干燥至恒质量，测定浸膏得率。浸膏得率（%）＝浸膏质量×1 000/（药材质量×300）×100%。

2.1.7 正交试验 根据处方中药物的性质，采用传统的水煎煮法为本产品的提取工艺。根据预试验结果，选取加水量（A）、浸泡时间（B）、煎煮时间（C）、煎煮次数（D）作为考察因素，以浸膏得率和总皂苷（三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1）含量的综合评分为评价指标，优选最佳提取工艺。综合评分＝[（浸膏得率/浸膏得率最大值）×0.4+（总皂苷量/总皂苷量最大值）×0.6]×100。因素与水平见表1，正交试验设计与结果见表2，方差分析结果见表3。

表1 因素与水平Tab 1 Factors and levels

由表2、表3可知，各因素对综合评分的影响大小顺序为D＞B＞A＞C，综合评分最佳工艺为试验号7，工艺组合为A3B1C3D2。由表3可知，浸泡时间（B）和煎煮次数（D）对结果影响显著，故B、D因素的水平可确定为B1D2；A、C因素对试验结果影响不明显，综合考虑实际生产效率与节约能耗等因素，最终A选取A1，C选取C2。最终优化提取工艺为A1B1C2D2，即8倍水，浸泡0.5 h，煎煮2次，每次煎煮1.0 h。

2.1.8 验证试验 按最优工艺进行3次提取试验，结果见表4。由表4可知，浸膏得率平均为（28.38±0.461）%（RSD＝1.63%，n＝3），总皂苷含量平均为（5.029±0.060）mg/g（RSD＝1.20%，n＝3）。验证试验结果与正交试验结果比较接近，说明该工艺比较稳定，方法可靠。

表2 正交试验设计与结果Tab 2 Orthogonal experiment design and results

表3 方差分析结果Tab 3 Results of variance analysis

表4 验证试验结果（n＝3）Tab 4 Results of validation test（n＝3）

2.2 除杂工艺研究

选择对化学成分影响比较小的物理除杂方法开展比较研究。分别取通脉颗粒提取液适量，采用翅片式过滤、筒式过滤、卧螺式过滤等方法进行过滤，最终确定过滤效果较好、滤液质量较高、满足连续生产要求的翅片式过滤方式。

2.3 浓缩工艺研究

采用外循环式真空薄膜浓缩工艺。取通脉颗粒提取液约1 000 kg，分别考察当真空度为0.06、0.07、0.08、0.09 MPa，真空温度对应为80、67、60、55℃条件下的浓缩效率。结果，浓缩需要的时间分别为3.0、2.4、2.3、2.1 h，即真空度为0.09 MPa、对应真空温度为55℃时浓缩效率最高。但考虑到此真空度对设备的要求比较高，危险性较大，故最终确定的浓缩条件为真空度0.08 MPa、真空温度60℃。

2.4 干燥工艺研究

为提高干燥效率，缩短生产周期，减少干燥过程对有效成分的破坏，本试验采用喷雾干燥工艺。因提取液中含有多糖类成分，直接喷雾干燥时易黏附于干燥塔内壁，故对在喷雾干燥时加入的辅料进行考察。

2.4.1 辅料的选择 通过选择麦芽糊精、乳糖、淀粉等辅料进行试验，结果麦芽糊精对改善喷雾黏壁现象的效果较好，且麦芽糊精具有吸水性能好、成本低的特点，故选择麦芽糊精作为喷雾干燥的辅料。

2.4.2 麦芽糊精加入量对喷雾干燥结果的影响 通过考察麦芽糊精加入量，比较其对喷雾干燥物料性状的影响。结果表明，当干浸膏与辅料的质量比达到3∶1和2∶1时，均可解决黏壁问题。本着少加辅料的原则，确定干浸膏与辅料的质量比为3∶1。

2.4.3 干燥温度的控制 通过考察发现，当出风口温度分别为80、85、90、95℃时，干燥粉的含水量分别为5.6%、4.7%、4.1%、3.7%，故将出风口温度设置为85～90℃。

2.5 制粒工艺研究

本试验采用干法制粒技术，以减少辅料用量；缩短工艺流程和受热时间，以提高颗粒收率。由于通脉颗粒中含有多糖类成分，易吸潮结块，直接影响产品使用，为提高颗粒的稳定性，需在制粒工艺中加入适量的防湿辅料。本处方选择价廉易得的麦芽糊精作为稀释剂，以增加颗粒的流动性、减少吸潮。通过比较辅料的加入量，结果辅料量为3%、5%时，颗粒均不结块。本着减少辅料用量的原则，确定辅料的加入量为3%。

2.6 含量测定

取按上述确定的最佳工艺参数制备的样品约1.2 g，共3份，精密称定，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定。结果，总皂苷含量为（5.211±0.207）mg/g（RSD＝3.96%，n＝3）。

3 讨论

通脉颗粒由红参、黄芪、半枝莲、白蔹、三七、郁金、炙甘草等14味中药材组成。方中以黄芪、红参为君药，黄芪可补中健脾，为补气要药，补气同时可化内毒、消痰瘀；红参可补脾益肺生津，大补元气。三七通络止痛、活血化瘀，标本兼治，以益气为本，以活血化瘀通脉治标，治病于未病，从血脉入手，以益气化瘀、疏通脉道，瘀血去则血脉通。

红参主要成分为皂苷类、挥发油、糖类、氨基酸等，皂苷类为其有效成分之一；三七主要成分为皂苷类、氨基酸类、黄酮类、多糖等，且大部分皂苷与人参皂苷类成分相同[7]。三七和红参的主要活性部位为总皂苷类成分。大多数皂苷极性较大，易溶于水、甲醇和乙醇[8]。由于水提取成本低，因此最终确定煎煮水提为提取工艺。

人参、三七皂苷的HPLC含量测定法稳定、成熟，是2015年版《中国药典》（四部）收载的法定方法[6]，故选红参三七总皂苷含量作为提取工艺评价的主要指标，综合评价时权重系数定为0.6；干浸膏得率是固体复方制剂剂型选择的主要依据，也是确定提取效率、颗粒服用量及包装规格的重要参数，故权重系数设为0.4。

本试验以浸膏得率，红参、三七的总皂苷含量为考察指标，对通脉颗粒提取工艺进行工艺筛选，用正交试验优化的提取工艺所制成的样品有效成分含量高，并经验证其工艺稳定、重现性好。制剂的成型工艺选择喷雾干燥、干式制粒，选取干浸膏与辅料的质量比为3∶1的麦芽糊精作为喷雾干燥的辅料，制粒使用3%防湿辅料。辅料的用量少，药物受热时间短，可保证药品质量；同时，无糖型颗粒也特别适用于糖尿病患者使用。以上优化工艺稳定可靠，可作为通脉颗粒的制备。

[1] 管昌益，林琳.通脉颗粒治疗冠心病心绞痛（气虚血瘀型）及对CRP的影响研究[J].微循环学杂志，2010，20（2）：81.

[2] 苏天生，管昌益，罗继红.通脉颗粒对家兔实验性高脂血症及动脉粥样硬化的影响[J].福建中医药，2011，42（1）：4.

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[5] 涂瑶生，高华宏，张建军，等.丹芪调经颗粒的制备工艺研究[J].中药新药与临床药理，2011，22（2）：211.

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[7] 宋立人，洪恂，丁旭亮，等.现代中药学大辞典：上册[M].北京：人民卫生出版社，2001：33-35、65-70.

[8] 肖崇厚.中药化学[M].上海：上海科学技术出版社，1997：385-386.

Optimization of Water Extraction and Granulating Techology of Tongmai Granule

YOU Wenzhi1，CHEN Xuemei1，SU Juanjuan1，PENG Liangong1，GUAN Changyi2（1.Dept.of Pharmacy，Xiamen Hospital of TCM，Fujian Xiamen 361009，China；2.Dept.of Cardiovascular Diseases，Xiamen Hospital of TCM，Fujian Xiamen 361009，China）

OBJECTIVE：To optimize water extraction and granulating technology of Tongmai granule.METHODS：Using the contents of notoginsenoside R1，ginsenoside Rg1，ginsenoside Re and ginsenoside Rb1and yield of extracts as the index，L9（34）orthogonal design was used to optimize and validate water extraction technology in preparation process of Tongmai granule.Decontamination，concentration and drying，diluent of granulating technology were investigated.RESULTS：The optimal water extraction technology was as follows as 8-fold water，soaking for 0.5 h，decocting 1.0 h each time，for 2 times.In validation test，the yield of extract was（28.38±0.461）%（RSD＝1.63%，n＝3），and the content of total saponins was（5.029±0.060）mg/g（RSD＝1.20%，n＝3）.The optimized granulating technology was that extract was filtrated and decontaminated，and then concentrated under vacuum degree of 0.08 MPa and vacuum temperature of 60℃；the ratio of extraction powder-accessories（maltodextrin）was 3∶1，drying temperature was set at 85-90℃；the amount of diluent was 3%.Under this condition，the content of total saponins was（5.211±0.207）mg/g（RSD＝3.96%，n＝3）.CONCLUSIONS：This technology is stable and feasible，and it is suitable for the preparation of Tongmai granule.

Tongmai granule；Water extraction technology；Granulating technology；Orthogonal test；Spray drying

R943

A

1001-0408（2016）34-4835-04

2016-05-26

2016-09-26）

（编辑：刘明伟）

福建省卫生厅中医科研项目（No.wzze201305）

＊副主任药师。研究方向：中药制剂。电话：0592-5582130。E-mail：awen303@163.com

#通信作者：主任药师。研究方向：医院药学。电话：0592-5579606。E-mail：merylchen@126.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.34.26