CPNE3蛋白在肺腺癌组织中的表达及其临床意义

程光嘉 刘顺林 王金志

CPNE3蛋白在肺腺癌组织中的表达及其临床意义

程光嘉 刘顺林 王金志

目的 探讨CPNE3蛋白在肺腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 收集肺腺癌组织标本82例（肺腺癌组）、癌旁肺组织标本20例（对照组），采用免疫组化SP法检测CPNE3蛋白的表达情况，并分析CPNE3蛋白在不同性别、年龄、肿瘤分化程度、大小、分期及淋巴结转移患者中的表达差异。结果 肺腺癌组CPNE3蛋白高表达53例（64.6%）、低表达29例（35.4%），对照组高表达0例（0%）、低表达20例（100%），肺腺癌组CPNE3蛋白高表达率明显大于对照组（χ2=12.67，P＜0.01）。CPNE3蛋白的表达在不同TNM分期、是否淋巴结转移患者及不同组织标本中的差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）；在不同性别、年龄、分化程度及肿瘤大小患者中的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论 CPNE3蛋白在肺腺癌组织中表达增高，并与肺癌的分期、淋巴结转移相关；CPNE3蛋白可作为评估肺癌患者病变范围和预后的标志物。

CPNE3蛋白 肺腺癌 临床

肺癌是全球因肿瘤死亡的主要原因之一，严重威胁人类健康。而非小细胞肺癌在所有类型肺癌中占80%左右，其中腺癌占40%左右。检测肺腺癌组织中CPNE3蛋白的表达，有助于研究CPNE3蛋白在肺癌发病机制中的作用。本研究采用免疫组化SP法检测肺腺癌组织、癌旁组织中CPNE3蛋白的表达情况，旨在探讨CPNE3蛋白检测在肺腺癌组织中的临床意义。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选取2010年1月至2015年6月手术切除并经病理确诊、未经其他治疗的肺腺癌组织标本82例（肺腺癌组），其中苏州大学附属第一医院50例，奉化市人民医院32例。患者男41例，女41例，年龄44～76（61.25±5.56）岁；均行胸部CT、腹部B超、骨扫描及头颅CT或MRI等检查；TNM临床分期：Ⅰ～Ⅲa期67例，Ⅲb～Ⅳ期15例；术前淋巴结穿刺细胞学和（或）手术切除淋巴结病理证实有淋巴结转移42例，无淋巴结转移40例。同时取癌旁组织标本20例（离病变组织2cm以上，均经病理证实为正常肺组织）作为对照。

1.2 方法 每个蜡块取4μm厚连续切片作免疫组化染色，兔抗人CPNE3单克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，免疫组化SP试剂盒购自北京中山金桥生物有限公司。采用免疫组化SP法检测肺癌组织中CPNE3的表达。先将切片置于二甲苯中脱蜡，10min/次，共2次，乙醇梯度水化处理，3%H2O2消除内源性过氧化物酶，EDTA修复液常规修复：微波炉中高火5min、解冻2min、中低火20min加热以充分暴露抗原位点，待其自然冷却后，加A液室温封闭15min，兔抗人CPNE3 4℃孵育过夜15min，1×PBST漂洗3次，5min/次；然后加B液室温孵育15min，1×PBST漂洗3次，5min/次；再加C液室温孵育15min，1×PBST漂洗3次，5min/次，DAB显色10min，终止显色，苏木精复染，盐酸乙醇固定，封片，观察。采用抗体稀释液代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判断 光镜显微镜下观察组织标本的着色程度。CPNE3蛋白阳性表达主要表现为细胞核内呈现棕黄色或棕褐色颗粒，也有少量为胞质内呈现棕黄色。高倍镜下随机取4个不同视野，计数细胞总数及核阳性细胞数，按阳性细胞数所占的百分比计分：阳性细胞率≤10%为1分、＞10%且≤50%为2分、＞50%且≤75%为3分、＞75%为4分；同时，根据染色的强弱程度计分：阴性1分，弱染色2分，中等染色3分，强染色4分。通过两者的乘积来判断结果：≤6分为低表达，＞6分为高表达。

1.4 统计学处理 应用SPSS22.0统计软件，计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 CPNE3在两组标本中的表达情况 肺腺癌组CPNE3高表达53例（64.6%），低表达29例（35.4%）；对照组高表达0例（0%），低表达20例（100%）。肺腺癌组CPNE3高表达率高于对照组（χ2=12.67，P＜0.01）。免疫组化染色见图1。

图1 CPNE3在肺腺癌组织及癌旁组织中的表达（a：CPNE3在肺腺癌细胞核中呈高表达；b：CPNE3在肺腺癌细胞核中呈低表达；c：CPNE3在癌旁组织中呈低表达；SP法，×400）

2.2 肺腺癌组CPNE3的表达与临床病理特征的关系 见表1。

由表1可见，CPNE3的表达在不同TNM分期、是否淋巴结转移及不同组织标本比较差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）；在不同性别、年龄、分化程度及肿瘤大小方面比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

3 讨论

CPNE3是Copines基因家族成员之一，是一类分布广泛、进化保守的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，其结构特征是在N端有2个C2结构域，是Ca2+和磷脂分子的结合位点，与突触结合蛋白和蛋白激酶C的C2结构域同源；在C端有1个血管性血友病因子（vWF）A结构域，与整联蛋白A结构域部分同源[1]，在拟南芥中，vWF的同源结构vWA的功能是结合并募集靶标蛋白在C2结构域的辅助作用下实现准确的靶标蛋白的膜定位[2]。

CPNE3可能具有激酶活性，用CPNE3抗体与K562和Daudi的细胞提取液免疫共沉淀得到具有激酶活性的复合物，体外实验也证实CPNE3能磷酸化磷脂碱性蛋白和H1组蛋白[3]。最新研究发现在非小细胞肺癌中CPNE3以一种新的肿瘤转移促进因子的角色出现[4]，在乳腺癌中CPNE3和ErbB2（又名CD340）相互作用促进肿瘤细胞迁移。原位组织芯片分析发现，CPNE3在乳腺癌、前列腺癌和卵巢癌中有不同程度的表达，表明CPNE3在这些肿瘤中可能发挥一定的作用[5]。

恶性肿瘤的侵袭和转移是相当复杂的临床病理问题，相关机制目前尚未完全明了。越来越多的分子标志物如癌胚抗原（CEA）、鳞状细胞癌相关抗原（SCC）、神经元特异烯醇化酯（NSE）等用于肺癌的临床诊断，但这些标志物在预测肿瘤的早期诊断及转移上缺乏特异性及敏感性。为了研究CPNE3与肺腺癌的临床病理关系，本研究通过免疫组化方法检测82例肺腺癌与20例癌旁组织中CPNE3蛋白表达情况并结合相关临床病理资料进行分析。研究发现，CPNE3在肺腺癌组织中的表达较癌旁组织明显增高，而且其表达情况在不同TNM分期、是否淋巴结转移及不同标本来源比较差异均有统计学意义，在不同性别、年龄、分化程度及肿瘤大小方面比较差异均无统计学意义。CPNE3可能在肺腺癌的发生、发展等机制上起重要作用，在肺腺癌发生浸润转移的晚期起着重要作用，其有可能成为预测肺腺癌高度转移的新的标志物。

表1 肺腺癌组CPNE3的表达与临床病理特征的关系[例（%）]

[1]Ghislat G,Knecht E.New Ca(2+)-dependent regulators of autophagosome maturation[J].Commun Integr Biol,2012,5(4): 308-311.

[2]Liu J,Jambunathan N,McNellis TW.Transgenic expression of the von Willebrand A domain of the BONZAI 1/COPINE 1 protein triggers a lesion-mimic phenotype in Arabidopsis[J].Planta,2005, 221(1):85-94.

[3]Mo W,Zhang J,Li X,et al.Identification of novel AR-targeted microRNAs mediating androgen signalling through critical pathways to regulate cell viability in prostate cancer[J].PloS One, 2013,8(2):56592-56593.

[4]Lin H C,Zhang F L,Geng Q,et al.Quantitative proteomic analysis identifiesCPNE3 asa novel metastasis-promoting gene in NSCLC[J].J Proteome Res,2013,12(7):3423-3433.

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Expression of CPNE3 protein in lung adenocarcinoma and its clinical significance

CHENG Guangjia，LIU Shunlin,WANG Jinzhi. Department of Respiratory Medicine,Fenghua People's Hospital,Fenghua 315500,China

Objective To investigate the expression of CPNE3 protein in lung adenocarcinoma and its clinical significance. Methods The expression of CPNE3 protein was detected by immunohistochemical SP method in 82 specimens of lung adenocarcinoma and 20 specimens of adjacent normal lung tissue.The relationship of CPNE3 expression with sex,age, tumor size,degree of differentiation,staging and lymph nodes metastasis was analyzed. Results The expression of CPNE3 protein in lung adenocarcinoma was significantly higher than that in adjacent normal lung tissue(P＜0.01).The expression levels of CPNE3 in stageⅢb and IV lung adenocarcinoma were significantly higher than those in stage I,ⅡandⅢa(P＜0.05).The CPNE3 expression levels of were higher in lung adenocarcinoma with lymph node metastasis than those without lymph node metastasis(P＜0.05). Conclusion The increased expression of CPNE3 in lung adenocarcinoma is correlated with TNM staging and lymph node metastasis,indicating that CPNE3 may serve as a new marker for evaluation of the severity and prognosis of lung cancer.

CPNE3 protein Lung adenocarcinoma Clinical

2016-04-09）

（本文编辑：马雯娜）

315500 奉化市人民医院呼吸科（程光嘉）；苏州大学附属第一医院呼吸科（刘顺林）；苏州大学基础医学与生命科学学院（王金志）

刘顺林，E-mail：liusl.123@163.com