北疆地区规模化猪场猪圆环病毒2型免疫抗体水平检测与分析

2016-12-20刘鸽张培生于会举张倩屈勇刚

养猪 2016年5期

关键词：免疫抗体圆环猪群

刘鸽，张培生，于会举，张倩，屈勇刚

（石河子大学动物科技学院，新疆石河子832003）

北疆地区规模化猪场猪圆环病毒2型免疫抗体水平检测与分析

刘鸽，张培生，于会举，张倩，屈勇刚

（石河子大学动物科技学院，新疆石河子832003）

为了解新疆北疆地区2014年1月至2016年4月期间的猪场猪圆环病毒2型免疫抗体水平及PCV2野毒感染情况，试验从北疆地区的18个规模化猪场中采集血样984份，检出免疫抗体阳性个体902份，占91.67%。18个试验猪场中有11个猪场的抗体阳性率在90%以上，占61.11%，免疫抗体阳性率超过85%的猪场有17个；种公猪的抗体阳性率最高，为98.78%。研究结果表明：北疆地区的猪圆环病毒2型免疫抗体阳性率较高，整体免疫水平较好，但也存在猪圆环病毒2型野毒感染或免疫失败的情况；0～30 d仔猪的免疫抗体阳性率虽然较高，但有随日龄增大而免疫水平下降的趋势。希望试验研究成果在一定程度上对养猪企业的生产工作有所帮助。

PCV2；ELISA；抗体水平；阳性率

猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）是引起猪圆环病毒病的病原。PCV属圆环病毒科、圆环病毒属的单股负链DNA病毒，该病毒是目前发现的动物病毒中最小的一种。据抗原性和基因组成的不同，PCV可以分为两个血清型：PCV1、PCV2，两个血清型PCV均在猪群中存在，但只有PCV2具有致病性[1-2]。猪群被PCV2感染后，不但引起猪圆环病毒病，还可引起免疫抑制，造成其他猪病的继发感染[3]，引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、肺炎、母猪繁殖障碍、肥育猪皮炎肾病综合征等[4]。猪圆环病毒病最早在20世纪90年代初发现于加拿大，1996年在欧洲一些国家暴发，现在在世界上普遍流行。目前，我国各地猪场感染PCV2情况十分普遍，有的可高达96%[5]。随着养猪产业的不断扩大，对PCV2的研究越来越受到人们的重视[6]。PCV抗体在猪群中普遍存在，采用猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒可快速、准确地对猪群进行检测。

新疆养猪事业在近几年有了飞速发展，规模化、集约化程度越来越高，尤其是从2015年下半年开始。北疆地区养猪量占全疆的绝大部分，因此研究北疆猪病情况对全疆有较为准确的参考作用。在2014年1月至2016年4月期间，本试验研究从北疆地区（巴州、克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯、奇台等不同区域）的18个现代规模猪场采样，进行猪圆环病毒2型免疫抗体检测并做出分析，希望对各养猪企业的生产工作有所帮助。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验样品来源2014年1月至2016年4月期间，从新疆北疆地区（巴州、克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯、奇台等不同区域）的18个现代规模猪场采集984份血样，其中包括不同类型猪群（0～30 d仔猪、后备母猪、经产母猪、种公猪）。

1.1.2 试验所需材料和必备仪器猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒（武汉科前生物，20130101）、自动酶标仪（美国Bio Tek）、一次性兽用采血器（5 mL）、微量移液器（Eppendorf公司）、恒温培养箱、平板震荡仪等。

1.2 试验方法

1.2.1 采集试验样品方法试验样品采集过程保证规范性操作。用5 mL一次性兽用采血器从猪的前腔静脉一次性采血3～4 mL/头，室温静置，析出血清，收纳于放有冰袋的保温箱或采样箱中，带回实验室进行分析。从每份血样中吸取1 mL血清于已经灭菌处理的EP管（1.5 mL）中，做到逐管准确标记，在适当规程的离心机中离心（合适的离心条件：4 000 r/min，时间为8~10 min），放到-20℃冰箱中保存备用或即刻检测。也要尽快对放到冰箱中的待检血清进行检测，以防较长的时间对试验结果造成大的影响。

1.2.2 猪圆环病毒2型ELISA抗体检测方法将浓缩的洗涤液恢复到室温，摇动（目的是使沉淀的盐溶解），作20倍稀释（稀释好的洗涤液可在2~8℃存放7 d）。待检血清按1∶40的体积稀释，对照血清按1∶4的体积稀释。用洗涤液对需要用到的抗原包被板微孔洗涤2次后，分别取稀释好的100 μL待检血清和对照血清加于对应抗原包被板微孔中。要求阴、阳对照各设两孔，每个待检样各设一孔。摇匀，经37℃恒温箱中温育30 min，洗涤5次。移取100 μL酶标二抗于各孔中，再次在37℃中孵育30 min后，再次洗涤5次。接下来，分别在每个孔中各加50 μL底物A和50 μL底物B，在室温条件下避光10 min后，在每孔中加50 μL终止液。在10 min之内测OD630nm值（测定前在平板震荡器上轻轻震荡一下）。

1.2.3 试验结果判定用酶标仪测定各孔的OD630nm值。本试验成立必须满足的条件是：阳性对照孔的平均OD630nm值≥0.7，阴性对照孔的平均OD630nm值＜0.3。

待测样品OD630nm值＞0.42，则该血清判为阳性；若0.42≥OD630nm值≥0.38，则该血清样品被判为可疑；待检血清OD630nm值＜0.38，则判为阴性。

1.2.4 试验结果分析用统计分析中最为常见的SPSS软件、Excel软件对本试验的数据进行准确的统计分析，计算PCV2抗体阳性率、可疑率、阴性率，阳性个体的平均OD630nm值用平均值±标准差表示。

2 试验结果

2.1 试验猪场的猪圆环病毒2型免疫抗体阳性率、可疑率、阴性率

猪场编号A~R分别代表18个现代规模猪场。试验采集的984份血清样品中检出猪圆环病毒2型免疫阳性抗体的有902份，其阳性率为91.67%。统计18个试验猪场的试验结果发现，阳性率最高的为96.48%，阳性率最低的为84.21%；阳性率超过90%的猪场有11个，占试验猪场的61.11%；阳性率超过85%的猪场有17个（也就是说，18个猪场中只有1个猪场的抗体阳性率低于85%），占试验猪场的94.44%，但所有试验猪场的抗体阳性率均在84%以上；984份血清样品中检出6份可疑血清样品，占所有试验血清样品的0.61%；检出抗体阴性的血清样品有76份。试验结果见表1。

2.2 免疫抗体阳性个体的平均OD630nm值

18个试验猪场中，检出猪圆环病毒2型免疫抗体阳性个体的平均OD630nm值均在0.700以上；平均OD630nm值在0.85以上的有15个猪场，占所有试验猪场的83.33%；平均OD630nm值在0.95以上的有11个猪场，占试验猪场的61.11%；有5个猪场的猪圆环病毒2型免疫抗体阳性个体的平均OD630nm值大于1.000。试验结果见表2。

表1 试验猪场猪圆环病毒2型免疫抗体ELISA检测结果

表2 试验猪场猪圆环病毒2型免疫抗体阳性个体的OD630nm值

2.3 北疆地区试验猪场不同类别猪群的猪圆环病毒2型免疫抗体水平

统计试验结果发现，984份试验样品中检出902份猪圆环病毒2型免疫抗体阳性血清样品，阳性率为91.67%；0～30 d仔猪、后备母猪、经产母猪、种公猪的抗体阳性个体数分别为258、239、324、81份，而其免疫抗体阳性率依次为95.56%、80.74%、96.43%、98.78%。从统计试验结果不难发现，猪群结构中抗体阳性率最高的为98.78%，是种公猪；最低的为后备母猪，免疫抗体阳性率为80.74%，但免疫抗体阳性率都高于80%；4种猪群结构中抗体阳性率大于95.00%的有3种，占总猪群结构的75%。统计结果见表3。

表3 不同类别猪群抗体阳性率

2.4 试验猪场所有0～30 d仔猪猪圆环病毒2型免疫抗体阳性率

试验采集的270份0～30 d仔猪血样中，有258份呈免疫抗体阳性，阳性率为95.56%。其中，0～10 d、11～20 d、21～30 d仔猪样品数均为90份，其阳性数依次为89、86、83份，对应的抗体阳性率依次为98.89%、95.56%、92.22%。可以发现，0～10 d仔猪的抗体阳性率最高，为98.89%；21～30 d仔猪抗体阳性率最低，为92.22%；0～30 d仔猪的抗体阳性率随日龄增长有下降趋势，但抗体阳性率均高于92.00%。结果见表4。

表4 0～30 d仔猪猪圆环病毒2型免疫抗体阳性率

3 讨论

3.1 北疆试验猪群的猪圆环病毒2型免疫抗体水平较高

使用猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒检测984份血清样品，发现有902份呈阳性，免疫抗体阳性率为91.67%，其有较高的整体免疫水平，高于河南、湖南一些地区的免疫抗体水平[7-8]。试验研究发现，18个猪场中有11个猪场的抗体阳性率在90%以上，占61.11%，也就是超过一半猪场的抗体水平较高；抗体阳性率最低的猪场为84.21%，也在84%以上；免疫抗体阳性率超过85%的猪场有17个。984份血清中发现6份可疑血清，可疑率为0.61%，不足1%，处于较低水平，需对这些血清重复检测，以确定其准确的阴、阳性。检出15个猪场猪圆环病毒2型免疫抗体阳性个体的平均OD630nm值在0.85以上，5个猪场的平均OD630nm值大于1.000。检出76份阴性血清，阴性率为7.72%，不足10%，且每个试验猪场均检出猪圆环病毒2型免疫抗体阴性个体。这就说明：北疆地区的猪圆环病毒2型免疫抗体阳性率较高，整体免疫水平较好，但也存在猪圆环病毒2型野毒感染或免疫失败的情况，应加强防控措施。

3.2 试验猪场的不同类别猪群间存在差异

统计试验结果发现，0～30 d仔猪、后备母猪、经产母猪、种公猪的不同类别猪群中猪圆环病毒2型免疫抗体水平存在差异，种公猪的抗体阳性率最高，为98.78%；其次为经产母猪，为96.43%；后备母猪的抗体阳性率仅为80.74%，也低于0～30 d仔猪的抗体阳性率（95.56%）。4种猪群结构中有3/4的猪群免疫抗体阳性率大于95.00%。研究0～30 d仔猪猪圆环病毒2型免疫抗体阳性率发现：0～10 d仔猪的免疫抗体阳性率最高，为98.89%；其次为11～20 d仔猪，为95.56%；21～30 d仔猪的抗体阳性率最低，为92.22%。不难发现：0～30 d仔猪的免疫抗体阳性率虽然较高，但有随日龄增大而免疫水平下降的趋势，可能与母源抗体有一定关系。

3.3 加强猪群管理，把好疾病预防关

本试验研究结果发现，北疆地区的猪圆环病毒2型免疫抗体水平较高，但鉴于PCV2在国内猪场流行较广，建议采取及时有效的免疫预防工作，搞好猪场的环境消毒工作，防患于未然[9]。对种公猪和繁殖母猪做到全免，根据各猪场自身特点，在适当时间对仔猪进行免疫接种，应科学积极地调整本猪场的免疫程序[10]。

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[4]陈溥言.兽医传染病学[M].第5版.北京：中国农业出版社，2006：231-233.

[5]甘孟侯，杨汉春.中国猪病学[M].北京：中国农业出版社，2005：440-461.

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[9]韩雪，蔡林，倪建强.2009年我国猪群中猪圆环病毒2型感染情况调查[J].中国兽医学报，2012（32）：941-944.

[10]孟纪萍，王建梅，武晓虎，等.猪圆环病毒2型和猪瘟病毒抗体检测与分析[J].中国动物检疫，2012（29）：39-40.

（编辑：郭玉翠）

S858.285.3

1002-1957(2016)05-0105-03

2016-05-24

新疆石河子市农业科技攻关项目（2013NY04）