北疆地区猪伪狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗体检测与分析

2016-12-20刘鸽于会举张培生张倩刘功成屈勇刚杨慧敏

养猪 2016年5期

关键词：玛纳斯北疆狂犬病

刘鸽，于会举，张培生，张倩，刘功成，屈勇刚，杨慧敏

（石河子大学动物科技学院，新疆石河子832003）

北疆地区猪伪狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗体检测与分析

刘鸽，于会举，张培生，张倩，刘功成，屈勇刚，杨慧敏

（石河子大学动物科技学院，新疆石河子832003）

为了解2014年2月至2016年4月新疆北疆地区猪伪狂犬病病毒野毒感染情况，试验从北疆地区的17个规模化猪场（克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯4个不同区域）采集血样932份，采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测猪伪狂犬病病毒gE蛋白抗体水平，结果发现有139份阳性血清，平均阳性率为14.91%。对4个不同区域PRV gE蛋白抗体分析发现，玛纳斯区域的平均阳性率最高，为18.27%。试验对猪场的PRV gE蛋白抗体检测呈阳性的个体进行分析发现，玛纳斯区域的阳性个体平均S/N值最大，为0.269 1。研究表明，虽然北疆地区PRV gE蛋白抗体阳性率较低，但各猪场普遍存在PRV，希望该试验对北疆乃至全疆各猪场PR的预防和净化工作有所帮助。

PRV；ELISA；抗体检测；阳性率

猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）是引起猪伪狂犬病（Pseudorabies,PR）的病原。PR具有急性、热性和高度接触性传染的特点，危害十分严重。猪是PRV的自然宿主，自然界中只有猪是该病毒的唯一宿主[1]，猪感染PRV后能引起脑脊髓炎症、自身发热，并且容易引起妊娠母猪流产和仔猪死亡，且仔猪死亡率非常高，达到有发病无一幸免的可怕程度[2]。PR在全球范围内流行很广，将该病从猪场根除难度很大，对养猪业的危害不容忽视[3]。国际兽医局（OIE）将之列为B类动物传染病，因为评定标准名称不同，我国将之列为二类动物传染病[4-5]。20世纪90年代，西方发达国家大多制定并启动了根除PR计划。在欧洲一些国家，常采用猪伪狂犬病病毒gE蛋白抗体ELISA（酶联免疫吸附试验）的检测方法对待测猪进行监测，方便对猪群进行PR的预防和及时净化猪场PRV[6-7]。目前，全球范围内都在积极预防和净化猪场的PRV。

由于南疆地区是少数民族聚集区，猪肉消费量相对较少，北疆地区养猪量占全疆养猪量的绝大部分，所以了解北疆地区的猪病情况对评估全疆的猪病有一定的参考价值。为了调查北疆地区猪群PRV野毒感染情况，本试验在2014年2月至2016年4月期间内从北疆地区的17个规模化猪场（克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯4个不同区域）采集血样932份，在新疆石河子大学动物科技学院动物传染病实验室用间接ELISA法检测其抗体情况，希望对北疆乃至全疆各猪场PR预防和净化工作有所帮助。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 血样来源2014年2月至2016年4月从北疆地区的17个规模化猪场的不同类别猪（0～10 d、11～20 d、21～30 d仔猪，后备母猪，经产母猪，种公猪）中共采集血样932份。

1.1.2 试验仪器和材料猪伪狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗体检测试剂盒（武汉科前生物生产，批号：20130101），微量移液器、恒温培养箱、自动酶标仪（美国Bio Tek仪器有限公司生产），兽用采血器。

1.2 试验方法

1.2.1 样品采集用一次性兽用采血器从猪的前腔静脉采血3~4 mL/头，待血清析出，将采血器和血样放到有冰袋的保温箱内带回实验室处理。每份移取1 mL左右血清到灭菌的EP管（1.5 mL）中，一定要逐管准确对应标记，在离心机中离心（条件：4 000 r/min，时间为8~10 min），即刻检测或放到-20℃冰箱中保存备用。放入冰箱备用的血清也要尽快对其检测，避免时间过长而影响试验结果。

1.2.2 猪伪狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗体检测法严格按照猪伪狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗体检测试剂盒使用说明书操作。在室温条件下，将浓缩洗涤液摇动1~3 min，20倍稀释。将待检血清和对照血清各按1∶1稀释。各取稀释好的待检血清和对照血清100 μL于包被板微孔中，阴、阳对照各设两孔，37℃恒温箱中孵育45 min后，抗原抗体结合，先洗涤再加酶标记物100 μL，37℃恒温箱中孵育20 min，每孔各加50 μL底物A、B，室温避光显色15 min后，每孔加50 μL终止液，混匀后尽快（最好10 min内之内，时间过长会影响结果的准确性）测各反应孔中的OD630nm值，判定结果。

1.2.3 判定结果的标准用酶标仪测OD630nm值。本试验成立的条件是阴性对照平均OD630nm值与阳性对照平均OD630nm值之差必须≥0.3。

S代表各样品孔OD630nm值大小，N代表阴性对照各孔平均OD630nm值大小。

若S/N≤0.35，样品判为gE抗体阳性；若0.4≥S/N＞0.35，样品判为可疑；若S/N＞0.4，样品判为gE抗体阴性。

1.2.4 统计分析用SPSS软件、Excel软件对试验数据进行统计分析，计算gE抗体阳性率、可疑率、阴性率及平均S/N值。

2 试验结果

2.14 个区域猪场的猪伪狂犬病病毒gE抗体阳性率、可疑率、平均S/N值

猪场A～D在克拉玛依区域，E～I在沙湾区域，J～M在石河子区域，N～Q在玛纳斯区域。932份血清中检出gE抗体阳性139份，阳性率14.91%；检出可疑血清5份，可疑率为0.54%。猪场A~Q中，只有A、C、D、I、L场检测出可疑血清，可疑率分别为1.43%、0.70%、5.00%、2.86%、1.32%，均小于10%。猪场A~Q的gE抗体阳性率依次为：14.29%、17.46%、10.56%、10.00%、12.00%、12.12%、17.86%、16.28%、8.57%、11.11%、25.00%、17.11%、18.42%、13.04%、21.43%、21.95%、16.67%，不难发现其中最大值为25%，最小值是8.57%。A~Q猪场的平均S/N值分别为：0.481 2、0.431 8、0.501 5、0.482 7、0.491 5、0.490 1、0.431 5、0.437 8、0.501 1、0.503 1、0.409 8、0.431 8、0.428 7、0.483 1、0.413 2、0.411 2、0.435 1，这些值都＞0.4，其中最大值为0.503 1，最小值为0.409 8。结果见表1。

表1 北疆地区猪伪狂犬病病毒gE蛋白抗体ELISA检测结果

试验不同区域的17个猪场的PRV gE蛋白抗体检测平均阳性率：克拉玛依13.08%，沙湾13.37%，石河子17.91%，玛纳斯18.27%。结果发现，玛纳斯的PRV gE蛋白抗体检测平均阳性率最高，为18.27%；而石河子的仅次于玛纳斯，为17.91%；克拉玛依的最低，为13.08%，但都高于10%。

不同的试验区域猪场的平均S/N值为：克拉玛依0.474 3，沙湾0.470 4，石河子0.443 4，玛纳斯0.435 7。可以发现，该4个区域的平均S/N值均＞0.4，且均<0.500 0，其中克拉玛依和沙湾的平均S/N值较接近，分别为0.474 3、0.470 4，玛纳斯的平均S/N值最小，为0.435 7。

对北疆地区试验猪场的PRV gE蛋白抗体检测呈阳性的个体进行分析发现，其阳性个体平均S/N值：克拉玛依与玛纳斯的结果相差较大，分别为0.225 8、0.269 1。对比发现，沙湾和石河子的阳性个体平均S/N值极为接近，分别为0.241 2和0.245 9；其中最大值在玛纳斯区域为0.269 1，但都小于0.300 0。结果见表2。

表2 北疆4个不同区域17个猪场的PRV gE蛋白抗体分析

2.2 试验猪场不同类型猪群的PRV gE蛋白抗体水平

对北疆地区的17个规模化猪场PRV gE蛋白抗体检测发现，PRV gE蛋白抗体平均阳性率为14.91%，试验统计结果发现0～10 d、11～20 d、21～30 d仔猪，后备母猪，经产母猪，种公猪的PRV gE蛋白抗体阳性率依次为5.88%、7.06%、22.35%、26.88%、9.4%和5.06%。各类型猪群中，PRV gE蛋白抗体阳性率最低是种公猪群，为5.06%；PRV gE蛋白抗体阳性率最高的猪群是后备母猪，为26.88%，其次为21～30 d仔猪22.35%。该试验统计结果如表3。

表3 各试验猪场不同类型猪群PRV gE蛋白抗体水平

3 讨论

3.1 北疆地区PRV gE蛋白抗体阳性率较低

用PRV gE蛋白ELISA抗体检测试剂盒对采自北疆地区的932份血清进行检测，发现有139份阳性血清，阳性率为14.91%，比张鲁安在2005年报道的10.1%高[8]，而与张倩等在2013年对青岛市的一些猪场检测的15.42%接近[9]。所有试验猪场中有3个猪场的PRV gE蛋白抗体阳性率高于20%，分别为25.00%、21.43%、21.95%，其余猪场的PRV gE蛋白抗体阳性率都小于20%，最低的为8.57%。PRV在新疆北疆地区的猪场普遍存在，并没有哪个猪场的PRV gE蛋白抗体阳性率为0，这说明，虽然北疆地区PRV gE蛋白抗体阳性率较低，但各猪场PRV存在率为100%。

3.2 加强猪场管理和预防疾病工作，积极净化猪场PR

从试验结果发现，PR在北疆地区流行较广，每个猪场都有PR野毒感染的情况。所以，应加强各规模化猪场的饲养管理和疾病预防工作，做好猪场的日常消毒工作，尽早并定期对猪群进行PR检测，一年要进行2次，甚至更多，及时发现被PRV感染的猪，尤其是种母猪和种公猪被PRV感染时应及早淘汰。因为PRV可在猪群中横向和垂直传播，必须及早淘汰PRV感染猪，防止猪场健康猪群感染PRV。

3.3 用基因缺失苗对猪群进行免疫

目前，国内外有效果较好的基因缺失苗用于PR的免疫接种，常有PRV存在的猪场可以对猪群进行科学的全免，合理的免疫是预防PR的有效措施之一。免疫后，用PRV gE蛋白ELISA抗体检测法评估猪群的免疫效果，及时淘汰感染PRV的猪和免疫耐受猪。

[1]白文彬，于康震.动物传染病诊断学[M].北京：中国农业出版社，2002：70-45.

[2]殷震，刘景华.动物病毒学[M].第2版.北京：科学出版社，1997：329-340，998-1002.

[3]陈溥言.兽医传染病学[M].第5版.北京：中国农业出版社，1980：218-220.

[4]于大海，崔砚林.中国进出境动物检疫规范[M].北京:中国农业出版社，1997：103-115.

[5]世界动物卫生组织.陆生动物诊断实验和疫苗手册[M].第5版.农业部兽医局译，2004：45-50.

[6]van nes A.Mathematieal modelling of Pseudorabies virus(syn. Aujeszk's disease virus)outhreaks aids eradieation programmes: a review[J].Vet Q,2001,23(1):21-26.

[7]Pensaert M,Labarque.Aujeszky's disease vaeeination and Differentiation of vaecinated from infectedpigs[J].Dev Biol(Basel), 2004,119:243-254.

[8]张鲁安.新疆猪伪狂犬病流行病学调查及病毒株的分离鉴定[D].杨凌：西北农林科技大学，2005.

[9]张倩，杨培培，刘明团.青岛地区猪伪狂犬病血清学调查[J].山东畜牧兽医，2013（12）：53-54.

（编辑：柳青）

高强度有氧运动能延缓衰老

【英国《每日邮报》网站8月1日报道】题：耐力运动能减缓衰老吗？

如果真有什么能鼓励你去健身房，或许就是这个了。一项新研究称，高强度有氧运动可以减缓衰老进程

随着人逐渐变老，我们每条DNA链的保护性端粒会磨损和变短。但新研究发现，耐力训练能保护这些端粒，让它们逃离变短的命运。

研究结果显示，此类体力活动能生成强化和延长端粒的化学物质，从而使我们能更长久地保持青春。这项研究由比利时的几家机构开展，其结果发表在本月出版的英国《科学进展》杂志上。

研究人员让10名志愿者骑健身车45分钟。他们采集每名志愿者运动前后的血样和肌肉活组织，然后在两个半小时后再次采集。

研究人员分析结果后发现，一种导致端粒变长的酶的含量增加了。这意味着染色体（以及染色体内的DNA）能得到更好的保护。

我们的DNA被包裹在染色体内。每条染色体的两端各有一个保护性端粒。在我们的一生中，细胞不断分裂和复制。但在这个分裂过程中，端粒变短，能覆盖的染色体区域变小。这导致我们的细胞开始老化和衰弱。最终，细胞分裂完全停止，我们走向死亡。